葛愛娟，王小紅，鄧瑞華

（中國人民解放軍聯(lián)勤保障部隊第904醫(yī)院婦產科，無錫 214000）

宮頸癌在女性生殖道惡性腫瘤中發(fā)病率位居第一位，近年來發(fā)病率逐年上升且有年輕化的趨勢，對婦女健康產生嚴重危害［1］。隨著HPV的篩查力度增加，當前臨床宮頸浸潤癌確診率相對降低，但朱春麗等［2］一項研究顯示國內成年女性宮頸CIN以及癌前病變發(fā)病率逐漸升高。其中CINⅡ/Ⅲ級的高級別CIN自然消退率較低，遠低于CINⅠ級，CINⅡ/Ⅲ級發(fā)展為浸潤癌的風險更大。高危HPV感染是宮頸癌變以及CIN發(fā)生的必要條件，其也是各類惡性腫瘤中唯一明確發(fā)病原因的種類［3］。隨著醫(yī)療保健意識及檢測水平的提高，國內對HPV篩查以及相關研究的深入，有學者認為HPV感染以及是否發(fā)展為CIN及癌變主要取決于宿主自身免疫、局部微環(huán)境、病毒等三大因素，而對局部微環(huán)境的研究具有更高的可行性［4］。當前國內對多產、性紊亂等輔助致癌因素及陰道微生態(tài)變化報道較多，對宮頸局部炎性反應及免疫狀態(tài)的報道較少，因此本文研究宮頸局部炎性因子和T細胞亞群改變對高危型HPV感染的影響，為女性HPV感染的防控提供理論依據，報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料本研究觀察對象為2017年1月～2020年6月我院102例高危HPV 陽性宮頸上皮內瘤變（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）患者，其中CINⅠ級28例，Ⅱ級32例，Ⅲ級 42例，34例宮頸癌患者以及40例HPV 陰性的正常體檢者，設為對照組。CINⅠ級年齡23～74歲，平均（49.65±3.67）歲；CINⅡ級年齡22～75歲，平均（49.63±3.54）歲；CINⅢ級年齡22～73歲，平均（50.87±3.59）歲；對照組年齡26～67歲，平均（48.32±3.89）歲；鱗癌29例，腺癌5例；宮頸癌年齡23～70歲，平均（49.32±3.80）歲；5組年齡差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 納入與排除標準年齡22歲～60歲女性；有性生活史，入組時非妊娠期、月經期及哺乳期；未合并其他組織惡性腫瘤；無免疫性疾??；入院檢查前3d無性生活、陰道用藥、檢查史；患者精神狀況良好知情并配合檢查；排除標準：合并感染性、免疫性疾病或營養(yǎng)不良；近期手術史或急性心腦血管疾病等嚴重內科疾??；近期服藥影響免疫系統(tǒng)藥物；無盆腔創(chuàng)傷或合并惡性腫瘤。

1.3 方法

1.3.1 HPV檢測所有受試對象均進行常規(guī)HPVDNA檢測，采用無菌窺器將宮頸陰道部暴露，無菌棉球將宮頸口黏液輕拭后再采用1支專用分泌物無菌棉拭子進行標本采集，并保存于EP管。采用聚合酶鏈式反應（Polymerase Chain Reaction，PCR）與膜雜交檢測HPVDNA，包括16、18、31、33、35、39、45等15種高危HPV亞型。HPV檢測試劑盒選擇豪洛捷?AptimaTM HPV檢測試劑盒（美國），由雜交檢測試劑以及 HPV核酸擴增試劑組成，采用導流雜交原理以及基因擴增技術，通過堿性磷酸酶系統(tǒng)進行定性檢測，嚴格按試劑盒說明書操作，每份HPV亞型DNA≥110pg/mL判為HPV感染陽性，分為單一感染與多重感染（兩種及以上亞型）。

1.3.2 宮頸局部炎性因子和T細胞亞群檢測按1.3.1步驟采集宮頸分泌物，裝入3mL生理鹽水的試管中，1500r/min下離心10min分離上清液，采用賽默飛Attune NxT流式細胞儀（美國，賽默飛世爾科技有限公司）檢測其中CD4＋、CD8＋等T淋巴細胞亞群水平，并計算CD4＋/CD8＋比值。INF-γ、IL-4、TNF-α、IL-2通過酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測，ELISA檢測試劑盒購自武漢默沙克生物科技有限公司，檢測步驟根據試劑盒說明書進。

1.4 統(tǒng)計學分析采用SPSS 22.00軟件，計數資料均以“%”表示，組間采用χ2檢驗，計量資料均采用mean±SD表示，組間、組內多組比較分別采用獨立樣本t檢驗以及重復方差分析，檢驗水準：α=0.05。

2 結果

2.1 CIN與宮頸癌患者高危HPV感染情況宮頸癌患者單一感染率顯著低于CIN患者，多重感染率顯著高于CIN患者，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表1，高危HPV感染情況見表2。

表1 CIN與宮頸癌患者高危HPV感染情況［例（%）］

2.2 不同宮頸病變程度患者宮頸分泌物T淋巴亞群水平比較宮頸癌組及CIN組宮頸分泌物CD4＋水平顯著高于對照組，CD4＋/CD8＋顯著低于對照組，宮頸癌組與CINⅠ級、Ⅱ級、Ⅲ級組差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），CINⅠ級、Ⅱ級、Ⅲ級組組間差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 不同宮頸病變程度患者宮頸分泌物T淋巴亞群水平比較

2.3 不同宮頸病變程度患者宮頸分泌物T淋巴亞群水平比較宮頸癌組及CIN組宮頸分泌物IL-4、TNF-α水平顯著高于對照組，INF-γ、IL-2顯著低于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），宮頸癌組與CINⅠ級、Ⅱ級、Ⅲ級組差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），CINⅠ級、Ⅱ級、Ⅲ級組組間差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表3。

表3 不同宮頸病變程度患者宮頸分泌物T淋巴亞群水平比較（ng/L）

3 討論

HPV屬于嗜人黏膜、皮膚復層鱗狀上皮的一類DNA病毒，是常見的經性途徑傳播的病毒，與人類食管癌、肛周癌，男性尖銳濕疣、陰莖癌以及女性宮頸癌、外陰癌等多種疾病的發(fā)生具有緊密聯(lián)系［5］。上個世紀70年度德國病毒學家在宮頸癌組織中首先發(fā)現了HPVDNA，隨后的研究證實HPV感染與子宮頸癌以及CIN發(fā)生與發(fā)展具有密切聯(lián)系。國內報道成年女性HPV感染率為10.20%～40.00%，但并非全部HPV感染者均會發(fā)展為宮頸癌，其中 5～10 % HPV感染者會因自身免疫因素或微生態(tài)因素無法清除病毒，并長時間維持高水平感染狀態(tài)［6］。眾多報道均證實16、18、31等高危HPV亞型使癌前病變及CIN的風險增加，同時A Qureishi等［7］報道隨病變程度增加，單一HPV亞型感染率顯著上升，宮頸鱗癌中單一高危HPV感率較高，本研究宮頸癌患者單一感染率顯著低于CIN患者，多重感染率顯著高于CIN患者，差異具有統(tǒng)計學意義，與之報道一致。

T淋巴細胞在病原體的防御中起到極為重要的作用，其中CD4+與CD8+ 對人細胞免疫反應具有調節(jié)作用，并能維持免疫平衡，CD4+/CD8+數值下降提示機體存在一定的免疫缺陷［8］。CD4+主要分化為輔助性T 細胞1、2（Th1、Th2），兩者發(fā)揮相互拮抗作用于免疫調節(jié)。本研究表明宮頸癌組及CIN組宮頸分泌物CD4＋水平較正常人群明顯升高，而CD4＋/CD8＋更低，表明機體免疫功能下降與高危HPV的感染可能存在關聯(lián)［9］。當陰道黏膜被病原體侵襲時，免疫系統(tǒng)發(fā)揮著預防陰道感染的重要作用，除全身性免疫外，宮頸、陰道黏膜作為一道重要的防御屏障在防御病原菌侵入中發(fā)揮重要作用，這與局部細胞免疫關系密切。

Th1以及相關炎性因子在細胞免疫中扮演著重要角色；INF-γ、IL-2由Th1釋放，能夠激活腫瘤、病毒細胞的死亡受體進而產生殺傷作用［10］。Th2增加對細胞免疫具有抑制作用，削減T細胞的抗腫瘤及抗病毒效應。Th1、Th2拮抗作用被打破便會表現出免疫應答紊亂，使HPV感染加重［11］。本研究納入研究的炎性因子中IL-2是免疫調節(jié)與應答的核心因子，其活性對宮頸局部免疫狀態(tài)以及免疫細胞的免疫功能產生直接影響，IL-2表達量上升對巨噬細胞殺傷活性起到增強作用。而IL-4來源于激活的Th2，能夠加快Th 向Th2分化，但對Th向Th1細胞分化具有抑制作用，進而影響細胞功能［12］。R Dhanwani等［13］報道顯示CIN級別的增加宮頸分泌物IL-4、IL-6、TNF-α表達量顯著增加，同時宮頸癌宮頸分泌物IL-4、IL-6、TNF-α表達量也顯著高于CIN患者與正常組，本研究結果與之保持高度一致性。表明IL-4、TNF-α水平增加，INF-γ、IL-2水平降低可能降低宮頸局部抵抗力，高危HPV感染風險增加，加速宮頸病變［14］。

綜上所述，高危HPV感染患者隨頸病變程度加重宮頸局部CD4＋水平及CD4＋/CD8＋降低，提示局部細胞免疫功能下降，加快病變發(fā)展，宮頸組織炎癥反應水平可能影響高危型HPV的感染程度。