唐蝶，李儉，張秀明

（深圳市羅湖醫(yī)院集團(tuán)羅湖區(qū)人民醫(yī)院 醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心，廣東 深圳 518001）

0 引言

梅毒是由梅毒螺旋體引起的人類獨(dú)有的疾病，主要由性接觸傳播，也可以通過血液傳播和母嬰傳播[1,2]。近年來，我國梅毒發(fā)病率明顯上升，防治工作面臨著嚴(yán)峻挑戰(zhàn)[3-5]。梅毒螺旋體感染后如果沒有早期診治，可能會(huì)有嚴(yán)重并發(fā)癥, 且梅毒隱性感染者也具有傳染性，因此對(duì)梅毒患者進(jìn)行早期診療是非常重要的[6]。目前，梅毒的診斷主要依據(jù)臨床表現(xiàn)和實(shí)驗(yàn)室檢查，后者包括病原體檢查、血清學(xué)檢測(cè)和核酸檢測(cè)等。由于梅毒病原學(xué)檢查和核酸檢測(cè)受實(shí)驗(yàn)條件、病程影響，檢出率不高，所以血清學(xué)檢查是梅毒檢測(cè)的主要方法。目前本實(shí)驗(yàn)室梅毒血清特異性抗體檢測(cè)項(xiàng)目包括化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLEIA）和梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)（TPPA）兩種。TPPA法具有高度的敏感性和特異性，是目前國內(nèi)外廣泛應(yīng)用的梅毒確認(rèn)試驗(yàn)[7,8]。本文使用TPPA法對(duì)HISCL 5000 化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)臨界值指數(shù)（COI）為0.1-1的標(biāo)本進(jìn)行復(fù)檢確證，分析其結(jié)果假陰性率并探討其檢測(cè)最佳COI。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集深圳市羅湖醫(yī)院集團(tuán)2019年7月1日至2020年7月30日患者血清標(biāo)本17733例，使用HISCL 5000進(jìn)行梅毒抗體檢測(cè)，篩查COI為0.1-1的標(biāo)本進(jìn)行TPPA法確證。

1.2 儀器與試劑

HISCL 5000 全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀及其原裝配套試劑(日本希森美康醫(yī)用電子有限公司)；梅毒螺旋體抗體檢測(cè)試劑盒（日本富士必歐株式會(huì)社）。

1.3 方法

1.3.1 17733 份標(biāo)本用HISCL 5000化學(xué)發(fā)光免疫分析儀進(jìn)行檢測(cè)，嚴(yán)格按照儀器操作說明及試劑操作說明進(jìn)行。儀器自動(dòng)完成標(biāo)本的檢測(cè)和結(jié)果的判讀，當(dāng)COI≤1時(shí)判定為陰性，COI＞1.0 的樣本判定為陽性。

1.3.2 用TPPA法對(duì)COI介于0.1-1 的標(biāo)本進(jìn)行驗(yàn)證。TPPA檢測(cè)時(shí)均進(jìn)行陰、陽對(duì)照及質(zhì)控，嚴(yán)格按照試劑操作說明進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析并繪制ROC曲線，對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行假陰性率分析和確定最佳COI值。

2 結(jié)果

對(duì)HISCL 5000篩查出的133例COI介于0.1-1的標(biāo)本用TPPA法進(jìn)行確證，結(jié)果得出真陰性標(biāo)本92例，假陰性率30.83%。見表1。

表1 133例COI位于0.1-1的篩查標(biāo)本TPPA法結(jié)果

對(duì)133例篩查標(biāo)本做ROC曲線分析如圖1。

圖1 133例標(biāo)本ROC曲線分析

3 討論

梅毒的感染初期多無明顯的癥狀和體征，易造成漏診，延遲治療。血清學(xué)檢測(cè)是臨床診斷梅毒的重要依據(jù)[9]。因?yàn)榉椒▽W(xué)和診斷性能的局限性，任何一種梅毒血清學(xué)檢測(cè)方法均不能完全達(dá)到梅毒診斷所需的全部性能要求[10]，故選擇靈敏度高、特異度好的方法便顯得尤為重要。梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)（TPPA）檢測(cè)特異性梅毒螺旋體抗體具有較高的敏感性和特異性，但其操作過程復(fù)雜，檢測(cè)時(shí)間長，且結(jié)果判定易受人員因素影響及難以自動(dòng)化等原因，不適于作為梅毒的篩查試驗(yàn)。近年來隨著梅毒螺旋體基因工程抗原而研制成功的化學(xué)發(fā)光法在梅毒特異性抗體檢測(cè)方面優(yōu)勢(shì)明顯，其操作簡單、靈敏度高、易于自動(dòng)化，化學(xué)發(fā)光法的靈敏度可達(dá)98%-100%[11]。化學(xué)發(fā)光免疫分析法相比TPPA檢測(cè)速度快，可隨機(jī)檢測(cè)，具有很強(qiáng)的實(shí)用性，可作為梅毒螺旋體的初篩實(shí)驗(yàn)。

希森美康HISCL-5000 檢測(cè)梅毒螺旋體抗體采用的是兩步夾心法的化學(xué)發(fā)光免疫分析法，是一種新的血清實(shí)驗(yàn)方法，檢測(cè)低限突破了一個(gè)數(shù)量級(jí)，可低至10-21mol[12-13]。通過公式計(jì)算反應(yīng)測(cè)定的發(fā)光強(qiáng)度和臨界值的比值來確定標(biāo)本是否存在梅毒特異性抗體。

本研究采用特異度較高的TPPA方法對(duì)靈敏度較高的化學(xué)發(fā)光方法檢測(cè)梅毒特異性抗體COI為0.1-1的結(jié)果進(jìn)行復(fù)檢確證，得出HISCL-5000篩查出的COI為0.1-1的133例標(biāo)本中假陰性標(biāo)本41例，假陰性率達(dá)30.83%，其中當(dāng)COI=0.1時(shí)假陰性率為0。通過 ROC曲線分析，COI取95%置信區(qū)間上限得出最佳COI為0.15，此時(shí)靈敏度為100%，特異度為54.3%。此研究提示本實(shí)驗(yàn)室需重新建立HISCL儀器檢測(cè)梅毒的復(fù)檢規(guī)則，當(dāng)儀器檢測(cè)出0.15＜COI≤1時(shí)，須做TPPA復(fù)查，TPPA復(fù)查陰性結(jié)果即按COI原值發(fā)送，TPPA復(fù)查陽性就將原COI改為1.1后發(fā)送結(jié)果，并建議患者2-4周后再復(fù)查，從而進(jìn)一步完善本實(shí)驗(yàn)室梅毒血清學(xué)檢測(cè)流程和降低結(jié)果的假陰性率。

綜上所述，對(duì)于梅毒的篩查，除了注意假陽性外[14-15]，假陰性也不可以忽視，這樣不僅能及時(shí)發(fā)現(xiàn)潛伏期梅毒，采取及時(shí)正確的方法對(duì)梅毒患者進(jìn)行干預(yù)，在一定程度上也減少了梅毒的傳播。