蔡國倩 寧書菊 葉齊 胡永樂 馬小毛 魏道智

摘 ?要：吲哚-3-甘油磷酸合酶（indole-3-glycerol phosphate synthase，IGPS）是廣泛參與生物體內色氨酸、生長素等吲哚化合物合成途徑中重要的關鍵酶之一。為了研究BcIGPS在馬藍吲哚類生物堿合成中的作用，基于馬藍轉錄組數據，通過RT-PCR技術從馬藍中克隆得到IGPS基因序列，命名為BcIGPS;利用生物信息學分析BcIGPS序列特性;運用qPCR分析BcIGPS在馬藍不同器官及外源誘導處理下的時空表達情況;構建pET-32a-BcIGPS原核表達載體，并優(yōu)化誘導表達條件。結果表明：BcIGPS（GenBank登錄號：MT210517）全長為1176 bp，包含1個開放閱讀框（ORF），編碼392個氨基酸，具絲氨酸（Ser）、蘇氨酸（Thr）、酪氨酸（Tyr）磷酸化位點31個，無跨膜結構，無信號肽，亞細胞定位于葉綠體中。BcIGPS含有product（indole）活性結構域和IGPS、TrpC特異性位點。qPCR分析結果顯示，BcIGPS基因在不同器官的相對表達豐度依次為：葉>莖>花>根;其響應茉莉酸甲酯（MeJA）、脫落酸（ABA）、水楊酸（SA）、乙烯利（ETH）外源誘導信號的誘導，經MeJA和ETH處理后，分別在24 h和36 h最高，為初始水平的5.53、6.87倍;在SA處理下，BcIGPS表達響應最為強烈，呈先驟升后驟降的變化趨勢，在12 h最高達初始水平的33.13倍;ABA處理后，其表達量變化不顯著。所構建的pET-32a-BcIGPS原核表達載體在大腸桿菌BL21中表達，其最適條件為37?℃、0.4 mmol/L IPTG培養(yǎng)3 h，BcIGPS重組蛋白主要以包涵體形式存在，且蛋白分子量與預測相符。

關鍵詞：馬藍;BcIGPS;基因克隆;表達分析;原核表達

Abstract： Indole-3-glycerol phosphate synthase （IGPS） is one of the most key enzymes involved in the synthesis of indole compounds such as tryptophine and auxin in organisms. In order to study the function of BcIGPS in the synthesis of the indole alkaloids from Baphicacanthus cusia， based on the transcriptome data of B. cusia， the gene sequence of IGPS was obtained by RT-PCR， the BcIGPS sequence characteristics was analyzed by bioinformatics. qPCR analysis was used to analyze the spatiotemporal expression of B. cusia in different organs and exogenous induction. The prokaryotic expression vector of pET-32a-BcIGPS was constructed and the conditions were optimized for inducing expression. Results showed that BcIGPS （GenBank login number： MT210517） contained an open reading frame （ORF） of 1176 bp， encoded 392 amino acids without transmembrane structure and signal peptide. There were 31 phosphorylation sites for Ser， Thr and Tyr. Subcellular localization prediction showed that BcIGPS was located on the chloroplasts. And BcIGPS contained product （indole） active structure domain and specific sites of IGPS and TrpC. The results of qPCR showed that the relative expression abundance of BcIGPS in different organs was leaf>stem>flower>root. It responsed to the induction of exogenous MeJA， SA， ETH. After the treatment of MeJA and ETH， the maximum value was up to 5.53， 6.87 times at 24 h and 36 h respectively. BcIGPS showed the strongest response to SA treatment， the expression level increased quickly and then decreased sharply， more 33.13 times than the initial level at 12 h. After ABA treatment， there was no significant change in the expression level. The prokaryote expression of pET-32a-BcIGPS was constructed successfully and the optimal conditions for expression in E. coli BL21 was 37 ℃， 0.4 mmol/L IPTG and cultured for 3 h. The recombinant BcIGPS protein mainly existed in the form of inclusion body， and the molecular weight of BcIGPS was consistent with the prediction.

Keywords： Baphicacanthus cusia; BcIGPS; gene cloning; expression analysis; prokaryotic expression

馬藍（Baphicacanthus cusia）屬爵床科板藍屬多年生草本植物，主要分布在我國亞熱帶及熱帶等地區(qū)，是重要傳統(tǒng)中藥材青黛的原植物和染料資源[1]。馬藍全草具藥用價值，其根及根莖為南板藍根[2];由莖葉泡制加工成青黛，具有治療口瘡、喉痹、傳染性皮膚病等功效[3]。研究表明，中藥青黛的主要藥效成分為吲哚類生物堿的靛玉紅和靛藍，靛玉紅具有抑制惡性腫瘤等作用，在臨床用于治療慢性粒細胞性白血病;靛藍是一種天然的抗菌植物色素，普遍應用于食品、印染、化妝品等行業(yè)[4-5];因此，靛玉紅、靛藍的合成途徑受到諸多領域的廣泛關注。

馬藍吲哚類生物堿代謝通常有莽草酸途徑（shikimate pathway）[6]和色氨酸途徑[7]。在莽草酸代謝途徑中，以磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）和赤蘚糖-4-磷酸（E4P）為底物，經5-烯醇式莽草酸-3-磷酸合成酶（EPSPS）[8]合成5-烯醇式莽草酸-3-磷酸，由分支酸合成酶（CS）[9]催化轉變成分支酸，經鄰氨基苯甲酸合成酶（ASA/ASB）[10]生成鄰氨基苯甲酸，由吲哚-3-甘油磷酸合酶（IGPS）催化生成吲哚-3-甘油酸后，經色氨酸合成酶（TSA）[11]作用下形成吲哚。而在色氨酸代謝途徑中，色氨酸直接由色氨酸酶催化為吲哚。由細胞色素P450（CYP450）氧化酶將吲哚氧化為2-羥基吲哚和3-羥基吲哚，再氧化為吲哚酚，吲哚酚進一步加氧、聚合成靛藍、靛玉紅及其他吲哚類物質。因此，研究其代謝途徑中的關鍵基因對于馬藍藥效成分積累機制的研究具有重要意義。

吲哚-3-甘油磷酸合酶（IGPS， EC：4.1.1.48）是合成生物體內必需氨基酸色氨酸和植物內源激素吲哚-3-乙酸（IAA）2條途徑分支點的重要酶，且可催化生物堿、植物抗毒素和硫代葡萄糖苷等吲哚環(huán)狀化合物的合成[12]。在菘藍和微生物工程的靛藍代謝途徑中，IGPS也被認為是調控吲哚類生物堿（靛藍）合成中的關鍵酶之一。目前尚未發(fā)現有關IGPS作為馬藍關鍵藥效物質合成途徑中限速酶的研究報道。因此，本研究擬利用馬藍轉錄組數據，克隆得到BcIGPS基因序列，對其序列進行生物信息學分析，并分析BcIGPS在馬藍不同組織器官的表達模式及其在不同外源誘導處理下的表達特異性，構建pET-32a-BcIGPS原核表達載體并誘導表達BcIGPS的重組蛋白，以期為后續(xù)該基因研究及分子調控機制奠定基礎。

1 ?材料與方法

1.1 ?材料

馬藍取自福建省農業(yè)生態(tài)過程與安全監(jiān)控重點實驗室藥用植物園，在馬藍旺盛生長期分別取根、莖、葉、當天開放的花，經無菌水洗凈后液氮冷凍，于–80?℃冰箱保存待用。

1.2 ?方法

1.2.1 ?激素處理 ?配置濃度為100??mol/L的茉莉酸甲酯（MeJA）、脫落酸（ABA）、水楊酸（SA）、乙烯利（ETH）溶液處理，每種處理3個重復。在處理0、1、2、4、6、8、12、18、24、36、48、72?h后取材，置液氮速凍后，于–80?℃冰箱保存待用。

1.2.2 ?RNA提取及cDNA合成 ?根據RNA提取試劑盒說明書，分別提取不同器官及外源誘導處理后馬藍的總RNA，通過分別檢測RNA質量，將質量高的總RNA按照反轉錄試劑盒說明書反轉錄成cDNA，于–20?℃保存待用。

1.2.3 ?BcIGPS基因的克隆 ?通過Primer Premier 5.0軟件設計BcIGPS基因的引物并分別添加XbaⅠ、SalⅠ酶切位點及相應的保護堿基，BcIGPS的正向引物序列為：5-CTAGTCTAGATCCAT CCTCCATCACTCTG-3和BcIGPS的反向引物序列為：5-ACGCGTCGACAGGAGTATCCAAGTT GTGCTG-3。以馬藍cDNA為模板進行擴增，擴增條件：2×Taq PCR Master Mix 10?μL，上下游引物各1?μL，cDNA模板1?μL，ddH2O 7?μL。擴增程序：94?℃預變性5?min;94?℃ 30?s，58?℃ 30?s，72?℃ 90?s，30個循環(huán);72?℃延伸10?min。擴增產物用1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測。將目的條帶回收，連接至Blunt Simple T載體上，轉化E. coli DH5α中，涂板，挑取單克隆進行菌液PCR驗證，并將陽性菌液送福州鉑尚生物有限公司測序。

1.2.4 ?BcIGPS基因的生物信息分析 ?利用ORF finder軟件查找開放閱讀框，采用在線分析軟件ExPASy-ProtParam tool分析氨基酸理化性質。利用DNAMAN 8.0軟件和NCBI在線Blastp進行同源蛋白序列及進化發(fā)育樹分析和構建。利用ExPASy-ProtScale、NetNGlyc 3.0 Server軟件預測親/疏水性和磷酸化位點，利用SOPMA、SWISS- MODEL軟件分別預測二、三級結構。利用Blast與SMART在線數據庫預測結構域，利用SignalIP4.1Server軟件預測信號肽，利用TMHMM軟件分析跨膜結構域，利用ProtCompv. 9.0軟件預測亞細胞定位。

1.2.5 ?qPCR分析 ?設計BcIGPS基因的特異引物，正向序列：F-5-ACTTGTTGAGGTACATGAT GAGAC-3;反向序列：R-5-GCAATATCGGCA GGAGTGAA-3。選擇β-actin為內參基因，其引物正向序列：F-5-GAGGGCCAAAACAAACTT GA-3;反向序列：R-5-CCCTTATGTGCCTTTGC CTA-3。使用Light Cycler 96實時熒光定量PCR儀進行擴增，每個樣品3個重復，根據2-△△CT公式處理數據。

1.2.6 ?pET-32a-BcIGPS原核表達載體的構建 ?將測序正確的T-BcIGPS重組質粒和pET-32a載體質粒分別用限制內切酶XbaⅠ、SalⅠ進行雙酶切，經電泳檢測后，回收酶切目的片段，連接目的基因片段和載體片段，16?℃金屬浴中連接過夜，將連接產物轉化至E. coli BL21（DE3）感受態(tài)細胞后，涂在含氨芐抗性的LB板進行初步篩選，挑單菌落，培養(yǎng)后提取質粒，經雙酶切和菌液PCR鑒定為陽性菌液，送福州鉑尚生物有限公司測序。

1.2.7 ?BcIGPS重組蛋白的誘導表達 ?將驗證正確的陽性菌（pET-32a-BcIGPS）進行振蕩培養(yǎng)，按1：100比例將菌液轉入含50?ng/μL氨芐抗性的LB液體培養(yǎng)基中，擴大培養(yǎng)至OD600為0.6～0.8;加入濃度分別為0.3、0.4、0.5?mmol/L的IPTG進行誘導表達，誘導條件為37?℃，200?r/min搖床，振蕩培養(yǎng)2、3、4、5、6?h;誘導完成后，在4?℃，12 000?r/min下離心10?min，倒培養(yǎng)液留菌體，加1 mL磷酸緩沖鹽溶液（1×PBS）懸浮菌體，進行超聲細胞破碎，設置破碎時工作5 s，間歇10 s，循環(huán)30次，破碎后的溶液為總蛋白，經4?℃，12?000?r/min離心15?min后，總蛋白即分為上清蛋白和沉淀蛋白。將需上樣的蛋白經過預處理后，用SDS-PAGE電泳檢測重組蛋白的表達。

2 ?結果與分析

2.1 ?BcIGPS基因克隆及序列比對

根據RNA提取試劑盒說明書提取馬藍總RNA，通過凝膠電泳檢測顯示18S、28S兩條帶。以馬藍cDNA為模板克隆得到BcIGPS基因，測序結果顯示，該基因包含一個全長為1176?bp的開放閱讀框（ORF）（圖1）。通過NCBI在線Blastp對BcIGPS蛋白進行同原序列搜索，選取10種不同物種的IGPS氨基酸序列（圖2），結果表明，BcIGPS基因編碼的氨基酸序列與蓖麻（Ricinus communis， XP_002532209.1）、毛白楊（Populus tomentosa， AXY97877.1）、南瓜（Cucurbita moschata， XP_022952396.1）、山黃麻（Parasponia andersonii， PON44253.1）、筍瓜（Cucurbita maxima， XP_022969112.1）、甜椒（Capsicum annuum， XP_016563733.1）、夏威夷棉（Gossypium tomentosum， TYH63509.1）、煙草（Nicotiana tabacum， NP_001312356.1）、野生大豆（Glycine soja， KHN38572.1）相似性分別為79.60%、78.98%、83.54%、79.37%、82.42%、81.27%、80.35%、81.74%、81.48%，BcIGPS蛋白與南瓜的IGPS氨基酸序列有著較高的相似性。利用DNAMAN 8.0軟件對不同物種的IGPS氨基酸序列進行同源比對分析，結果表明，馬藍的IGPS獨自聚成一支，甜椒和煙草聚成一支，其他7種物種聚成一支（圖3）。

2.2 ?BcIGPS理化性質和磷酸化位點預測

采用在線分析軟件ExPASy-ProtParam tool預測BcIGPS蛋白理化性質，結果顯示，BcIGPS蛋白分子式為C1932H3126N540O565S14，分子量約為43.41?kDa，等電點（pI）為8.42，其中Leu（L）和Ala（A）比例較高分別為10.2%、8.9%。應用軟件ExPASy-ProtScale預測分析，正值為疏水值，反之負值為親水值。在–1.00以下的親水峰有27處，+1.00以上的疏水峰有19處，表明BcIGPS蛋白是一個親水性蛋白（圖4）。采用NetNGlyc 3.0 Server在線軟件對BcIGPS蛋白磷酸化位點進行分析，結果表明，分值在0.5以上的磷酸化位點有31個，其中絲氨酸（Ser）20個，蘇氨酸（Thr）10個，酪氨酸（Tyr）1個（圖5）。

2.3 ?BcIGPS蛋白的信號肽、跨膜結構域及亞細胞定位

通過SignalIP 4.1軟件預測信號肽，發(fā)現BcIGPS蛋白的1～45個氨基酸的平均切割點為0.450，預測分析BcIGPS蛋白的N端不具有信號肽。運用TMHMM 2.0軟件預測馬藍IGPS蛋白具有跨膜結構域的可能性很小，表明BcIGPS基因編碼的產物不屬于跨膜蛋白。采用ProtCompv 9.0在線預測軟件對蛋白質做整體定位評分，葉綠體（7.98）遠高于線粒體（0.81）、液泡（0.7）、高爾基（0.51）亞細胞器。表明BcIGPS蛋白亞細胞定位于葉綠體與馬藍的光合作用有關。

2.4 ?BcIGPS蛋白二、三級結構及保守結構域

采用在線軟件SOPMA對BcIGPS蛋白二級結構預測表明，BcIGPS蛋白的主要元件由45.15%的α-螺旋、33.93%的無規(guī)則卷曲、14.03%的β-折疊、6.89%的β-轉角構成二級結構（圖6）。運用在線工具SWISS-MODEL模擬出BcIGPS蛋白三級結構（管狀和球棒）模型（圖7）。通過Blast與SMART數據庫預測，BcIGPS蛋白含有關鍵活性結構域phosphate、ribulose/triose、substrate（anthranilate）、product（indole），特異性位點有PLN02460、IGPS、TrpC，并且屬于DRE-TIM-me tallolyase和TIM-phosphate-binding超家族（圖8）。

2.5 ?BcIGPS在不同器官的特異性表達及在不同外源誘導子下的響應情況

通過qPCR檢測BcIGPS基因在馬藍不同器官中的相對表達量，結果顯示，葉中最高，其次是莖和花，且分別為根的34.78、20.58和10.41倍，根中最低（圖9）。表明BcIGPS基因在馬藍葉、莖及花的生長發(fā)育中表達較活躍，這與該基因的亞細胞結構定位預測結果相一致。

經不同外源誘導子處理后，結果發(fā)現，在ABA誘導下，BcIGPS基因表達變化不顯著;經MeJA處理后，BcIGPS表達量的整體變化呈先降后升再降的趨勢，且在24?h達到最高，是對照組的5.53倍;經ETH誘導36?h后，BcIGPS表達量達到最高，是對照組的6.87倍。SA處理1?h后，BcIGPS表達量快速且持續(xù)上升表達，在12?h達到最高，是初始水平的33.13倍（圖10）。表明SA、MeJA及ETH可有效調控BcIGPS基因的表達，相比其他誘導子，BcIGPS基因對SA的應答快速且表達顯著增強。

2.6 ?pET-32a-BcIGPS原核表達載體的構建

原核表達載體pET-32a和T-BcIGPS的質粒經內切酶XbaⅠ和SalⅠ分別進行雙酶切，通過T4 DNA連接酶，原核表達載體pET-32a-BcIGPS經初步構建后，轉化至E. coli BL21（DE3），挑單菌落經培養(yǎng)后，提取質粒進行雙酶切鑒定和菌液PCR（圖11）。電泳結果顯示，pET-32a-BcIGPS原核表達載體經雙酶切后，有2條帶分別為5200?bp左右的pET-32a和1200?bp左右的BcIGPS。將酶切鑒定的陽性菌液送公司測序，測序結果顯示完全一致，說明原核表達載體pET-32a-BcIGPS構建成功。

2.7 ?BcIGPS重組蛋白的誘導表達

將測序正確的pET-32a-BcIGPS質粒轉化至E. coli BL21（DE3），然后進行誘導表達，其條件為：分別加入為0.3～0.5?mmol/L濃度的IPTG，在37?℃、200?r/min的搖床上振蕩培養(yǎng)2～6 h;提取BcIGPS重組蛋白進行SDS-PAGE分析（圖12）。由圖12可知，在0.4?mmol/L IPTG，經3?h誘導后，含pET-32a-BcIGPS質粒的表達菌株顯示目的蛋白條帶在約45?kDa處。重組蛋白是由43.41?kDa的BcIGPS和一個分子量約為0.84?kDa的His標簽蛋白組成，符合預期BcIGPS蛋白的分子量大小。BcIGPS重組蛋白在沉淀的條帶明顯亮于上清的條帶，表明重組蛋白主要以包涵體的形式存在。

3 ?討論

吲哚類生物堿作為一類重要的生物活性成分，其合成途徑一直是分子生藥學領域研究的熱點。林文津[13]、黃玉香[14]參考KEGG代謝途徑及菘藍、長春花、蓼藍等的吲哚生物堿合成途徑，測序并解析了馬藍苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成途徑，結果發(fā)現IGPS基因表達處于上調，并推測其參與調控馬藍藥效物質青黛的合成。已有研究結果表明，IGPS基因主要有2個功能：一是參與合成植保素途徑及植物防御反應，在環(huán)境脅迫因子的作用下，IGPS基因蛋白水平表達增加[15];二是調控色氨酸代謝途徑，有研究通過產生IGPS缺陷型轉基因植物，表現出一些類似生長素缺陷的表型（小蓮座和低生育力），同時色氨酸含量顯著下降[16]。因此，BcIGPS基因和植物的防御性代謝有密切關系，研究BcIGPS基因不僅對于了解馬藍生長發(fā)育過程中的防御機制具有重要作用，而且對馬藍藥效成分的合成途徑研究具有一定的意義。

實驗結果表明，BcIGPS蛋白存在保守結構域，蛋白中含有product（indole）關鍵活性結構域、TrpC和IGPS特異性結合位點，符合該基因參與合成吲哚環(huán)狀物質的功能結構特點;此外，有研究發(fā)現一些真菌和細菌的L-色氨酸合成途徑由7個色氨酸基因編碼的5個關鍵酶完成，其中吲哚-3-甘油磷酸合酶由TrpC基因編碼[17-18];經序列分析結果表明，馬藍與蓖麻、南瓜、山黃麻、筍瓜、甜椒、夏威夷棉、煙草、野生大豆等其他雙子葉植物的IGPS基因相似度達79%～ 83%，以上實驗結果均驗證了馬藍IGPS基因的成功克隆。

通過qPCR對馬藍進行組織特異性表達分析，BcIGPS在馬藍的根、莖、葉及花的表達量有明顯差異，葉、莖中BcIGPS蛋白的相對表達量比根分別高達34.78、20.58倍，青黛實際生產也是以葉、莖為加工原料器官，說明BcIGPS的存在與馬藍藥效物質形成部位的一致。此外，葉和莖也是葉綠體主要分布的器官，這與BcIGPS蛋白定位于葉綠體的預測結果相一致。

外源誘導子與植物的次生代謝關系密切，常用來調節(jié)次生代謝產物的合成[19]，如白及的苯丙烷[20]、藏紅花的藏紅花素[21]。在本研究中，發(fā)現馬藍BcIGPS基因均響應MeJA、ETH及SA誘導表達且上調，尤其經SA處理后，BcIGPS基因快速響應且強度是MeJA和ETH誘導反應的5～6倍。SA作為生長調節(jié)物質，不僅參與植物生長、調節(jié)光周期、調控乙烯合成等重要的代謝過程[22]，而且可激活雙子葉植物的抗旱、抗鹽的防御反應，起到信號分子的作用[23-24]。因此，這也表明靛藍、靛玉紅的合成代謝包括在馬藍的次生代謝途徑中，其合成與馬藍的防御代謝有關。

4 ?結論

本研究克隆獲得的BcIGPS（GenBank登錄號：MT210517）包含一個全長為1176 bp的ORF，編碼392個氨基酸，定位于葉綠體中，成功構建pET-32a-BcIGPS原核表達載體并實現了高效表達。BcIGPS基因可強烈響應外源誘導子SA的誘導，該基因在馬藍生長發(fā)育中起到增強相關抗脅迫代謝的能力。該研究結果為進一步對馬藍吲哚類生物堿代謝調控研究提供科學依據。

參考文獻

楊成梓， 劉小芬， 范世明. 藥用植物馬藍的資源調查研究[J]. 中國現代中藥， 2012， 14（3）： 33-35， 38.

肖春霞. 黔產南板藍根中抗流感病毒化學成分的研究[D]. 貴陽： 貴州大學， 2018.

楊步青， 陳建斌， 李新雄. 建青黛及其原植物馬藍的研究進展[J]. 海峽藥學， 2008， 20（12）： 72-76.

周江波， 鄧小紅. 天然靛藍植物生化及分子生物學研究進展[J]. 北方園藝， 2018（1）： 160-166.

張海超， 張軒萌. 中國古代藍染植物考辨及相關問題研究[J]. 自然科學史研究， 2015， 34（3）： 330-341.

陳 ?園， 趙淑娟. 微生物莽草酸代謝途徑的研究進展[J]. 江蘇農業(yè)科學， 2019， 47（7）： 19-23.

王 ?莉， 史玲玲， 張艷霞， 等. 植物次生代謝物途徑及其研究進展[J]. 武漢植物學研究， 2007， 25（5）： 500-508.

Macheroux P， Schmid J， Amrhein N， et al. A unique reaction in a common pathway： mechanism and function of chorismate synthase in the shikimate pathway[J]. Planta， 1999， 207（3）： 325.

于 ?劍， 葉 ?齊， 寧書菊， 等. 馬藍等79種植物分支酸合成酶的生物信息學分析[J]. 中國中藥雜志， 2018， 43（4）： 721-730.

張青磊. 馬藍吲哚類生物堿合成關鍵基因ASA和ASB的克隆與功能研究[D]. 廈門： 華僑大學， 2017.

公培民， 寧書菊， 葉 ?齊， 等. 馬藍色氨酸合成酶基因的克隆、序列及表達分析[J]. 分子植物育種， 2020， 18（3）： 873-881.

Shah J. The salicylic acid loop in plant defense[J]. Current Opinion in Plant Biology， 2003， 6（4）： 365-371.

林文津. 福建馬藍有效成分累積及其分子基礎研究[D]. 福州： 福建農林大學， 2015.

黃玉香. 馬藍藥效物質形成關鍵基因的挖掘與功能研究[D]. 廈門： 華僑大學， 2017.

劉新仿， 歐陽劍， 何奕昆， 等. 擬南芥吲哚-3-甘油磷酸合酶免疫分析[J]. 植物學報， 1999， 41（7）： 3-5.

Müller A， Weiler E W. Indolic constituents and indole-3- acetic acid biosynthesis in the wild-type and a tryptophan auxotroph mutant of Arabidopsis thaliana[J]. Planta， 2000， 211（6）： 855-863.

Gerth M L， Nigon L V， Patrick W M. Characterization of the indole-3-glycerol phosphate synthase from Pseudomonas aeruginosa PAO1[J]. The Protein Journal， 2012， 31（5）： 359-365.

Arif M， Rashid N， Perveen S， et al. Extremely stable indole-3-glycerol-phosphate synthase from hyperthermophilic archaeon Pyrococcus furiosus[J]. Extremophiles， 2019， 23（1）： 69-77.

張 ?睿， 王秀娟， 高 ?偉. 植物激素對次生代謝產物的調控研究[J]. 中國中藥雜志， 2020， 45（17）： 4205-4210.

羅才林， 李 ?林， 陳 ?立， 等. 白及苯丙氨酸解氨酶基因的克隆、序列特征及激素響應表達分析[J]. 中草藥， 2019， 50（3）： 694-701.

賴成霞， 瑪依拉·玉素音，等. 藏紅花酸糖基轉移酶UGTCs4基因的克隆、生物信息學及表達分析[J]. 中草藥， 2020， 51（4）： 1044-1051.

Endo J， Takahashi W， Ikegami T， et al. Induction of flowering by inducers of systemic acquired resistance in the lemna plant[J]. Bioscience， Biotechnology， and Biochemistry， 2009， 73（1）： 183-185.

Shah J. The salicylic acid loop in plant defense[J]. Current Opinion in Plant Biology， 2003， 6（4）： 365-371.

向小亮， 寧書菊， 黃延齡， 等. 外源水楊酸對馬藍葉片中蛋白水平表達的影響[J]. 應用生態(tài)學報， 2010， 21（3）： 689-693.

責任編輯：黃東杰