藍(lán)文坪，張建秋，王 挺，卓懷書(shū)，覃英嬌，熊 均

支氣管哮喘是以氣道高反應(yīng)性和慢性氣道炎癥為主要病理特征的呼吸道慢性疾病。一項(xiàng)大規(guī)模流行病學(xué)調(diào)查顯示老年人群是支氣管哮喘的高發(fā)群體，且超過(guò) 60 歲以上患者以重癥為主［1］。 氣道重塑是支氣管哮喘病情進(jìn)展的必然結(jié)果，隨著氣道重塑的發(fā)生，使支氣管發(fā)生不可逆性呼吸困難［2］。 因而，監(jiān)測(cè)氣道重塑對(duì)控制支氣管哮喘病情，扭轉(zhuǎn)病理進(jìn)展具有重要意義。 目前，臨床認(rèn)為在氣道炎癥早期，因持續(xù)性的接觸變應(yīng)原，成為氣道重塑的誘發(fā)因素，隨著病情發(fā)展，氣道重塑不依賴于變應(yīng)原接觸［3］。 在此期間，細(xì)胞因子在支氣管病變過(guò)程中發(fā)揮重要作用。 既往認(rèn)為T(mén)h1/Th2 失衡是支氣管哮喘發(fā)病的重要病理因素，但近年來(lái)有報(bào)道顯示部分支氣管哮喘患者不能完全用Th1/Th2 失衡機(jī)制來(lái)解釋［4-5］。 白介素-17（IL-17）是由輔助性 T 細(xì)胞 17（Th17） 細(xì)胞分泌的前炎癥細(xì)胞因子， 有研究表明IL-17 是支氣管哮喘重要細(xì)胞因子， 推測(cè)其可能參與氣道重塑［6］。本研究收集98 例老年支氣管哮喘患者資料，回顧性探討IL-17 與氣道重塑的關(guān)系。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象 收集2017 年5 月～2020 年5 月在瓊中黎族苗族自治縣人民醫(yī)院就診的98 例老年支氣管哮喘患者，其中男性60 例，女性38 例；年齡（70.24± 7.83）歲；體質(zhì)量指數(shù)（19.84 ± 1.69）kg/cm2；根據(jù)中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)推薦指南標(biāo)準(zhǔn)，將支氣管哮喘患者分為重度組（44 例）和輕中度組（54 例）［8］。輕中度組和重度組患者性別、年齡及發(fā)病時(shí)間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），兩組肺功能分級(jí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05），見(jiàn)表1。納入標(biāo)準(zhǔn)：支氣管哮喘診斷參照共識(shí)意見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行［7］；年齡≥ 60 歲，均為急性發(fā)作期就診；患者病例資料完整。 排除標(biāo)準(zhǔn)：肝腎功能嚴(yán)重不全者；合并有惡性腫瘤者；合并有嚴(yán)重肺部感染、肺結(jié)核及慢性阻塞性肺疾病者。

表1 兩組老年支氣管哮喘患者基本資料比較

1.2 方法

1.2.1 Th-17 細(xì)胞檢測(cè) RNA 提取和反轉(zhuǎn)錄：采集患者清晨空腹外周血5 ml，抗凝處理后送檢。 采用Trizol 法獲取 RNA， 參照劉澤宇等［9］配制 RNA/Primer 和 cDNA 混合物，將 10 μl cDNA 加入 RNA/引物混合物中， 反應(yīng)后加入RNase H 降解的RNA。PCR 擴(kuò)增： 設(shè)計(jì)引物上游5'-GTAAAGACCTCTATG CCAACA-3'， 下游 5'-CCTTCACCGTTCCAGTTT-3'，擴(kuò)增長(zhǎng)度 205 bp。 以 β-action 為內(nèi)參， 上游 5'-CTGAACATCCATAACCGGAATACCA-3'， 下游 5'-AGCGTTGATGCAGCCCAAG-3'，擴(kuò)增長(zhǎng)度 183 bp。將 dNTP 混合物、cDNA 模板、 上下游引物、PCR 緩沖液及Taq 酶置于離心管中，進(jìn)行PCR 擴(kuò)增。 擴(kuò)增條件：92 ℃預(yù)變性 5 min，92 ℃變性 0.5 s，55 ℃退火0.5 s，72 ℃延伸 0.5 s，共 45 個(gè)循環(huán)。 PCR 半定量分析：取擴(kuò)增產(chǎn)物5 μl，行電泳處理，記錄積累光密度（IOD）。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)：采用流式細(xì)胞儀上機(jī)檢測(cè)Th17 水平。

1.2.2 IL-17 水平檢測(cè) 取外周血2 ml， 離心后取上清液送檢，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清IL-17，操作方法按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行，試劑盒購(gòu)自南京森貝伽生物科技有限公司。

1.2.3 CT 掃描檢查 采用Ingenuity 荷蘭飛利浦CT機(jī)進(jìn)行CT 檢查，管電壓120 kV，管電流240 mA，矩陣512 × 512，層厚、間隔5 mm。掃描時(shí)患者取仰臥位，自肺尖至肺底進(jìn)行掃描，收集數(shù)據(jù)，以CT 診斷儀自帶工作站和Meta Morph 圖像分析系統(tǒng)處理，測(cè)量點(diǎn)定位于病變肺葉上支氣管主干內(nèi)（支氣管主干距氣管壁0.5 cm 處），測(cè)量記錄支氣管壁厚度（Wat）和氣道平滑肌厚度（Wam）。

1.3 觀察指標(biāo) 比較兩組患者Th17 細(xì)胞和血清IL-17 水平，比較兩組患者 Wat 和 Wam 水平。 分析Th17 細(xì)胞、血清 IL-17 水平與 Wat、Wam 相關(guān)性，分析Wat 的相關(guān)因素。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 20.0 軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，符合正態(tài)分布時(shí)，計(jì)量資料以（）表示，組間比較行t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以（%）表示，組間比較行χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Pearson 分析，影響因素采用多元線性回歸分析，以P < 0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組Th17 細(xì)胞及血清IL-17 水平比較 重度組患者 Th17 細(xì)胞比例為（25.09 ± 6.87）%，輕中度組患者 Th17 細(xì)胞比例為（21.29 ± 5.65）%，兩組外周血中Th17 細(xì)胞比例比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=3.005，P=0.003）。 重度組患者血清 IL-17 水平為（74.92 ± 5.76）ng/L， 顯著高于輕中度組 （54.23 ±4.61）ng/L，兩組血清 IL-17 水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=19.755，P < 0.001）。

2.2 兩組氣道形態(tài)學(xué)指標(biāo)比較 輕中度組患者Wat、Wam 水平（11.47 ± 1.59）、（3.13 ± 0.75）顯著低于重度組（13.62 ± 1.80）、（3.97 ± 0.82），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=6.274、5.289，P < 0.05）。

2.3 Wat、Wam 與 Th17、IL-17 線 性 相 關(guān) 分 析Pearson 分析結(jié)果顯示，Wat、Wam 與 Th17、IL-17 水平呈顯著正相關(guān)性（r＝0.583、0.379、0.446、0.494，P <0.05）。

2.4 Wat 多元線性回歸分析 多元線性回歸分析結(jié)果顯示，Th17、IL-17 及肺功能分級(jí)是影響Wat 的獨(dú)立影響因素（P < 0.05）。 見(jiàn)表 2。

表2 老年支氣管哮喘患者影響Wat 水平的多元回歸分析結(jié)果

3 討論

氣道重塑是支氣管哮喘患者氣道炎癥發(fā)展的必然結(jié)果， 而氣道重塑發(fā)生后又將促進(jìn)炎癥的持續(xù)。 因而，長(zhǎng)期以來(lái)，炎性因子與支氣管哮喘的關(guān)系一直是臨床關(guān)注重點(diǎn)。 Th17 是具有促炎效應(yīng)，且能特異性分泌IL-17 的輔助性T 細(xì)胞，研究證實(shí)Th17可通過(guò)促進(jìn)中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞表達(dá)，加重氣道炎癥，加快支氣管哮喘病情進(jìn)展［10］。

IL-17 能激活和誘導(dǎo)氣道嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，加快慢性炎癥的發(fā)生發(fā)展，同時(shí)IL-17 分泌增加可促進(jìn)蛋白酶3 和髓過(guò)氧化物酶合成，進(jìn)而誘導(dǎo)基質(zhì)金屬蛋白酶-9 等因子的釋放，成為氣道重塑的誘因［11］。 但臨床也有報(bào)道發(fā)現(xiàn)健康志愿者與支氣管哮喘患者 IL-17 水平無(wú)顯著性差異［12］。陸光輝等［13］的研究還顯示哮喘患者單個(gè)核細(xì)胞體外培養(yǎng)血清IL-17 低于健康志愿者， 提示IL-17 可能存在雙向調(diào)節(jié)作用。 邵莉等［14］采用健康小鼠動(dòng)物模型，給予IL-17 抗體后，氣道反應(yīng)性顯著增強(qiáng)，這提示IL-17可能對(duì)支氣管哮喘的建立存在負(fù)性調(diào)節(jié)機(jī)制，但在哮喘發(fā)生后，IL-17 則可能加重病理進(jìn)展，成為氣道重塑的促發(fā)因素［15］。

本研究收集98 例老年支氣管哮喘作為研究對(duì)象， 結(jié)果顯示輕中度組與重度組患者Th17 和血清IL-17 水平差異顯著， 且 Th17、IL-17 與 Wam、Wat呈顯著相關(guān)性， 提示Th17、IL-17 與氣道重塑密切相關(guān)，這也證實(shí)上述觀點(diǎn)。 多元線性回歸分析進(jìn)一步顯示 Th17、IL-17 是 Wat 的獨(dú)立影響因素， 提示對(duì)于老年支氣管哮喘患者， 監(jiān)測(cè)Th17、IL-17 水平可為判斷氣道重塑程度提供依據(jù)。 但本研究為回顧性分析，未收集健康正常老年人相關(guān)資料，因而有關(guān)Th17、IL-17 在老年支氣管哮喘建立前的作用機(jī)制還有待今后進(jìn)一步研究證實(shí)。

綜上， 老年支氣管哮喘患者Th17 細(xì)胞、 血清IL-17 水平與氣道重塑相關(guān)，監(jiān)測(cè)Th17、血清IL-17有助于判斷氣道重塑情況。