文 雙 王鵬云

(華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬梨園醫(yī)院檢驗科 武漢 430077)

有機(jī)陰離子運(yùn)輸多肽1B1(OATP1B1)是表達(dá)在肝細(xì)胞膜上的攝取轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，介導(dǎo)多種內(nèi)源性代謝物和藥物的吸收，如：他汀類、利福平、卡泊芬凈、伊立替康及其活性代謝產(chǎn)物SN-38等[1～5]。SLCO1B1 基因具有遺傳多態(tài)性，c.521T>C(rs4149053) 和c.388A>G(rs2306283)是最常見的與其功能緊密相關(guān)的兩個SNP位點，可形成9種基因型(*1a/*1a、*1a/*1b*、1b/*1b、*1a/*5、*1a/*15、*1b/*15、*5/*5、*5/*15及*15/*15)，其突變型引起編碼的OATP1B1 轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白活性降低[6～8]，表現(xiàn)為肝臟攝取藥物能力降低，使得血藥濃度上升，增加藥物不良反應(yīng)的發(fā)生風(fēng)險，具有臨床診斷價值。

c.521T>C和c.388A>G多態(tài)在不同遺傳背景人群中頻率具有較大差異，了解其在不同地域群體中的頻率分布對于了解其對不同群體的診斷價值具有重要意義。本研究的目的在于了解我國湖北地區(qū)老年人群SLCO1B1基因多態(tài)性分布特征，探討性別對SLCO1B1基因多態(tài)性的影響，輔助臨床合理調(diào)節(jié)用藥劑量。

1 研究對象和方法

1.1 研究對象

選擇2016年7月～2021年2月在我院遵醫(yī)囑接受SLCO1B1基因多態(tài)性臨床檢測的患者1814例，納入對象年齡≥60歲，平均年齡(75.8±10.0)歲，其中男882例，女932例，所有入選者均為湖北地區(qū)漢族常駐居民，相互之間無血緣關(guān)系。

1.2 研究方法

1.2.1基因組DNA的提取

采集患者外周血1ml于EDTA抗凝管。使用天根生化科技有限公司血液基因組提取試劑盒(TIANamp Blood DNAKit，DP318)進(jìn)行基因組DNA的提取。

1.2.2基因分型

使用PCR-熒光探針法檢測進(jìn)行SLCO1B1基因c.388A>G、c.521T>C位點基因分型。PCR反應(yīng)試劑購于武漢友芝友醫(yī)療科技有限公司。反應(yīng)體系為25ul，包括DNA模版0.2ul (25ng/ul)，反應(yīng)液23ul(含有PCR 緩沖液、dNTPs、特異性引物和探針、內(nèi)標(biāo)引物)。PCR反應(yīng)程序為：37℃ UNG處理10 min，95℃預(yù)變性5min，然后95℃ 15s 、60℃ 60s反應(yīng)40個循環(huán)(采集熒光信號)。反應(yīng)結(jié)束后，根據(jù)擴(kuò)增曲線，劃定合適基線和熒光閾值，得到不同熒光通道CT值并進(jìn)行結(jié)果判讀，確定每個樣本各個位點的基因型。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

應(yīng)用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSSversion20.0完成數(shù)據(jù)分析，兩組間分類變量的頻數(shù)分布差異采用χ2檢驗。P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 熒光定量PCR結(jié)果判讀

以SNP c.388A>G為例，ROX通道為內(nèi)標(biāo)基因，所有檢測中ROX通道CT值≤38。FAM通道CT值≤36，VIC通道CT值≥36或無CT值，即表示為AA野生型；FAM、VIC通道CT值均≤36，則為AG雜合突變型；而VIC通道CT值≤36，F(xiàn)AM通道CT值≥36或無CT值，即表示為GG純合突變型。

2.2 湖北地區(qū)老年人群SLCO1B1基因等位基因頻率及基因型分布

本研究中，1814例湖北地區(qū)老年人群SLCO1B1基因分型結(jié)果顯示(見表1)， SNP 388A>G位點檢測出野生型233例，雜合突變型660例，純合突變型921例，3種基因型A/A、G/A、G/G分別占 12.84%、36.38%、 50.77%，等位基因突變發(fā)生率為68.96%；而521T>C位點檢測出野生型1472例，雜合突變型322例，純合型突變20例，3種基因型A/A、G/A、G/G分別占 81.15%、17.75%、 1.10%，等位基因突變發(fā)生率為9.98%，見表1。

表1 SLCO1B1基因c.388A>G、c.521T>C位點等位基因頻率及基因型分布[n(%)]

2.3 湖北地區(qū)老年人群SLCO1B1基因多態(tài)分布

本研究共檢測出8種SLCO1B1基因型， 其中*1b/*1b及1a/*1b型最多，分別占38.2%和31.64%，其次為*1b/*15 、*1a/*15、 *1a/*5，而未檢測到*5/*5基因型。各基因型在男女群體間的分布比較顯示差異無統(tǒng)計學(xué)意義，見表2。

表2 SLCO1B1基因c.388A>G、c.521T>C多態(tài)性分布[n(%)]

3 討論

有文獻(xiàn)報道，在高加索人群中SLCO1B1基因SNP c.388A>G、c.521T>C 突變頻率分別為 25%～30%和15%～20%[9]，而本研究中，湖北地區(qū)老年人群SLCO1B1 SNP 388A>G突變頻率為68.96%，高于白種人；521T>C 突變頻率為9.98%，低于白種人，這也證實了SLCO1B1 基因多態(tài)性分布具有明顯種族和地域差異。SLCO1B1基因型以*1b/*1b及1a/*1b最常見，占69.84%，其次是*1b/*15(11.63%) 、*1a/*1a(11.30%)、*1a/*15(4.58%)、 *1a/*5(1.54%)，*15/*15(0.94%)、*5/*15(0.17%)，結(jié)果符合亞洲人群SLCO1B1 基因多態(tài)性的分布特征[10～14]。

研究表明，SLCO1B1遺傳多態(tài)性可對多種藥物的血漿濃度產(chǎn)生顯著影響。SLCO1B1 c.521T>C變異與血漿瑞舒伐他汀、辛伐他汀、匹伐他汀濃度升高和普伐他汀對肝臟膽固醇合成的短期抑制作用降低有關(guān)[15～17]。由于他汀類藥物通過抑制肝細(xì)胞中的HMG-CoA還原酶發(fā)揮作用，因此，OATP1B1介導(dǎo)的他汀類藥物的肝攝取可能是他汀類藥物發(fā)揮治療作用的先決條件。另外，他汀類藥物的全身不良反應(yīng)，如肌病和橫紋肌溶解癥，與血漿他汀類藥物濃度增加有關(guān)[18～19]。因此，SLCO1B1多態(tài)性可能與他汀類藥物治療期間的療效降低及全身不良反應(yīng)風(fēng)險增加有關(guān)。

在糖尿病治療藥物中，OATP1B1對瑞格列奈、那格列胺等藥代動力學(xué)有著重要影響，521T>C突變型中瑞格列奈的血清藥物濃度是野生型的3倍，那格列胺的血清藥物濃度是野生型2倍[20]。許多抗感染藥類也通過OATP1B1的攝取進(jìn)入肝臟細(xì)胞，如利福平和青霉素以及某些頭孢類均是OATP1B1的底物。

本研究通過檢測老年漢族人群的SLCO1B1基因型，可評估藥物臨床效益及風(fēng)險比，調(diào)整老年人群的聯(lián)合用藥方案，更好地為臨床醫(yī)生個體化用藥提供參考，減少老年人群不合理用藥。