馬增輝

摘 要：本文參照NY/T 1453—2007，建立了高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定蓮菜中嘧菌酯殘留的檢測方法。實(shí)驗(yàn)表明，在49.91～499.1 ng/mL范圍內(nèi)，嘧菌酯的峰面積與濃度線性關(guān)系良好，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為f（x）=6 484.72x+89 005.6，r=0.998 24，檢出限為0.01 mg/kg，加標(biāo)回收率為74.48%～87.65%，RSD為0.88%～3.41%，該方法精密度與穩(wěn)定性良好，均符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，適用于蓮菜中嘧菌酯殘留的檢測。

關(guān)鍵詞：蓮菜;嘧菌酯;高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

嘧菌酯是一種新型的人工合成仿生型內(nèi)吸性殺菌劑，具有廣譜、高效、低毒等優(yōu)點(diǎn)，且與其他殺菌劑無相互抗性，被廣泛用于果蔬、農(nóng)作物的病害防治與儲藏保鮮[1]。蓮菜屬于蓮科水生蔬菜，兼具食藥兩用功效，國內(nèi)多地均有栽培，深受人們的喜愛。在蓮藕生長期施用嘧菌酯等農(nóng)藥可有效防治對其產(chǎn)量與品質(zhì)影響最大的葉斑病，然而用藥過量易造成蓮藕中農(nóng)藥殘留，對食用者身體健康與產(chǎn)業(yè)發(fā)展極為不利，所以有必要加強(qiáng)對蓮菜中嘧菌酯殘留風(fēng)險(xiǎn)的評估[2]。在果蔬產(chǎn)品嘧菌酯殘留測定的常規(guī)方法中，色譜法在檢測靈敏度與定性確證方面存在缺陷，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（HPLC-MS）靈敏度較高，定性準(zhǔn)確，但由于不同果蔬產(chǎn)品試樣基質(zhì)效應(yīng)不同，現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)方法無法直接應(yīng)用，因此，本研究參照《蔬菜及水果中多菌靈等16種農(nóng)藥殘留測定液相色譜-質(zhì)譜-質(zhì)譜聯(lián)用法》（NY/T 1453—2007）[3]，建立了HPLC-MS法測定蓮菜中嘧菌酯殘留的方法。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 材料與試劑

蓮菜（購自某超市）;嘧菌酯標(biāo)準(zhǔn)溶液（BePure，批號C0007041）;甲醇、乙腈、乙酸乙酯、正己烷、丙酮、甲酸均為色譜純;乙酸銨為分析純;硅膠固相萃取小柱（500 mg/6 mL）;實(shí)驗(yàn)室一級超純水。

1.1.2 儀器與設(shè)備

LC-MS-8050島津液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（配ESI離子源）;ML 204T/02電子天平（精度0.000 1 g）;均質(zhì)儀;高速離心機(jī);渦旋混合器;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀;氮?dú)獯祾邇x;固相萃取裝置等。

1.2 試樣處理方法

1.2.1 試樣提取

將樣品充分?jǐn)囁榛靹?，?zhǔn)確稱取試樣約20 g置于150 mL燒杯中，加入60 mL乙酸乙酯，使用均質(zhì)儀提取2 min，用濾紙過濾收集濾液于100 mL具塞比色管中，用40 mL乙酸乙酯分3次淋洗殘?jiān)?，將淋洗液收集于上述比色管中，靜置10 min，待乙酸乙酯與水兩相分層后，準(zhǔn)確吸取50.0 mL乙酸乙酯層試液，在40 ℃下旋蒸濃縮近干，用氮吹儀吹干，加入2 mL丙酮+正己烷（10+90）溶解，待凈化。

1.2.2 凈化處理

將固相萃取柱連接到固相萃取裝置，依次加入10 mL丙酮、5 mL正己烷進(jìn)行預(yù)處理，將待凈化試液移入固相萃取小柱中，加入5 mL丙酮+正己烷（10+90），舍棄流出液。再用20 mL甲醇+丙酮（50+50）分4次洗脫，收集洗脫液于40 ℃下旋蒸至約2 mL，用氮吹儀吹干，加入甲醇溶解定容至2 mL，上機(jī)待測。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)儲備液配制

準(zhǔn)確吸取1 mL嘧菌酯標(biāo)準(zhǔn)溶液，用乙腈定容至10 mL，配制濃度為99.82 ?g/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。

1.3.2 基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液配制

準(zhǔn)確吸取0.1 mL嘧菌酯標(biāo)準(zhǔn)儲備液，用甲醇定容至10 mL，配制成濃度為998.2 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)中間液。再使用空白樣品提取液稀釋配制成49.91 ng/mL、99.82 ng/mL、199.64 ng/mL、249.55 ng/mL和499.1 ng/mL的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作系列。

1.4 儀器工作條件

1.4.1 液相條件

色譜柱：YMC-Triart C18柱（100 mm×2.1 mm），柱溫40 ℃;流動相：乙腈+2 mmoL/L乙酸銨溶液，流速0.20 mL/min，梯度洗脫;進(jìn)樣量，2 ?L。梯度洗脫程序見表1。

1.4.2 質(zhì)譜條件

離子源類型：ESI離子源，溫度：300 ℃;霧化器流速：3.0 L/min，干燥氣流速：10 L/min;掃描方式：MRM，掃描模式，正離子。離子對詳情見表2。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性范圍及檢出限

將配制的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作系列在上述儀器條件下進(jìn)行測定，以工作系列點(diǎn)質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。嘧菌酯在49.91～499.1 ng/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，線性回歸方程為f（x）=6 484.72x+89 005.6，相關(guān)系數(shù)r=0.998 24。根據(jù)3倍信噪比的峰響應(yīng)值計(jì)算方法檢出限，得該方法的檢出限為0.01 mg/kg。

2.2 方法回收率與重復(fù)性

向某陰性蓮菜試樣中添加檢出限、限量值、10倍檢出限3種濃度水平的嘧菌酯標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照上述試樣處理過程、儀器測定條件將每個(gè)濃度平行測定6次，計(jì)算加標(biāo)回收率與RSD，結(jié)果見表3。該方法的回收率為74.48%～87.65%，RSD為0.88%～3.41%。

2.3 精密度與穩(wěn)定性試驗(yàn)

取濃度為49.91 ng/mL的蓮菜基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，連續(xù)測定6次并記錄峰面積，計(jì)算RSD為2.90%，表明該方法精密度良好。取濃度為49.91 ng/mL的蓮菜基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，在24 h內(nèi)每隔4 h測定一次并記錄峰面積，計(jì)算RSD為2.48%，表明該方法穩(wěn)定性良好。

3 結(jié)論

本研究參照NY/T 1453—2007，建立了HPLC-MS法測定蓮菜中嘧菌酯殘留的方法，該線性關(guān)系良好，檢出限、回收率、精密度及穩(wěn)定性符合JJF 1317—2011[4]與GB/T 27404—2008[5]的相關(guān)要求，能夠滿足實(shí)驗(yàn)室對蓮菜中嘧菌酯殘留的檢測需求，可為相關(guān)部門加強(qiáng)蓮菜中嘧菌酯殘留風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測提供支持。

參考文獻(xiàn)

[1]杜鑫，李國烈，蘇旭，等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定草莓中嘧菌酯的殘留量[J].理化檢驗(yàn)（化學(xué)分冊），2018，54（12）：1445-1448.

[2]孫光忠，劉元明，匡輝，等.三種殺菌劑對蓮藕葉斑病的田間防效[J].廣西植保，2018，31（4）：6-8.

[3]中華人民共和國農(nóng)業(yè)部.蔬菜及水果中多菌靈等16種農(nóng)藥殘留測定液相色譜-質(zhì)譜-質(zhì)譜聯(lián)用法：NY/T 1453—2007[S].北京：農(nóng)業(yè)出版社，2007.

[4]國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀校準(zhǔn)規(guī)范：JJF 1317—2011[S].北京：中國質(zhì)檢出版社，2011.

[5]中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局，中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會.實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測：GB/T 27404—2008[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2008.