李芷萱

作為可內(nèi)服的抗菌成分，賦予橄欖葉提取物理想抗菌性的成分主要是環(huán)烯醚萜與橄欖苦苷。本文以橄欖葉提取物為研究對象，從毒理學(xué)的角度，對其安全性進(jìn)行了深入探究。

一、植物提取物介紹

本文所分析的橄欖葉提取物，由橄欖干燥葉提取所得，其成分以黃酮和萜類為主，具有良好活性。此外，提取所得羥基酪醇可被用來刺激線粒體合成及功能發(fā)揮，并且能夠抑制酪氨酸消化和堿基修飾相關(guān)反應(yīng)，這也決定其具備清除自由基的作用，屬于典型的無毒級提取物。

二、橄欖葉提取物化學(xué)成分

1.脂肪族。已知脂肪族化合物有苯乙醛、壬醛以及橙花叔醇。

2.酚酸化合物。作為酚羥基有機(jī)酸的酚酸化合物，其酚酸成分主要包括肉桂酸、香草酸、綠原酸、咖啡酸、沒食子酸。

3.黃酮化合物。對橄欖葉進(jìn)行提取和分離所得黃酮成分，其甘元以芹菜素、木犀草素以及洋芫荽黃素為主，上述苷元的糖鏈以1個(gè)糖和2個(gè)糖較為常見?，F(xiàn)階段，研究人員已成功分離出20余種表征不同的黃酮化合物，并在多個(gè)領(lǐng)域得到了運(yùn)用。

4.萜類衍生物。橄欖葉普遍含有大量萜類衍生物，對油橄欖葉而言，最具代表性的萜類化合物為裂環(huán)烯醚萜，另外其萜烯含量往往較高。

（1）三萜化合物。橄欖葉含有的三萜成分以五環(huán)三萜為主，例如廣為人知的山楂酸以及齊墩果酸，均屬于齊墩果烷型。

（2）裂環(huán)烯醚萜。作為環(huán)戊烷單萜所衍生存儲化合物，裂環(huán)烯醚萜的形成機(jī)理為環(huán)烯醚萜裂環(huán)，由此可見，裂環(huán)烯醚萜在環(huán)烯醚萜總量中的占比極小。此外，橄欖苦苷也應(yīng)當(dāng)引起重視，作為裂環(huán)烯醚萜苷代表，該化合物的藥理活性極為突出，對其做水解處理，通?？色@得游離狀態(tài)的羥基酪醇。

三、橄欖葉提取物的獲取方法

將羥基酪醇含量作為主要考察指標(biāo)，通過正交實(shí)驗(yàn)與單因素實(shí)驗(yàn)相結(jié)合的方式，對橄欖葉羥基酪醇進(jìn)行提取的工藝加以確定，首選工藝為超聲輔助磷酸，相關(guān)參數(shù)如下：提取所用磷酸的濃度以2mol/L為宜，液料比應(yīng)控制在40：1左右，經(jīng)過60min超聲處理后獲得5.2mg/g的羥基酪醇。基于正交實(shí)驗(yàn)、單因素實(shí)驗(yàn)酶法對羥基酪醇進(jìn)行提取的工藝，酶解時(shí)間應(yīng)當(dāng)控制在80min左右，pH值以7為最佳，實(shí)驗(yàn)全過程均在40℃環(huán)境下進(jìn)行，在酶濃度達(dá)到30μg/mL時(shí)，獲得羥基酪醇的實(shí)際含量約為3.7mg/g。

若計(jì)劃使用乙醇溶劑對多酚物質(zhì)進(jìn)行浸提，研究人員應(yīng)了解以下內(nèi)容：液料比應(yīng)在1：35g/mL左右，最佳浸提溫度為55℃，且乙醇體積分?jǐn)?shù)不得超過60%。本次實(shí)驗(yàn)中，研究人員將浸提時(shí)間設(shè)定為1.75h，最終獲得57.3mg/g的多酚提取物。

將橄欖葉品作為原料、蘆丁作為對照，將總黃酮實(shí)際提取率作為指標(biāo)，將料液比、乙醇體積分?jǐn)?shù)和回流時(shí)間等參數(shù)作為重點(diǎn)考察因素，通過正交實(shí)驗(yàn)對提取工藝進(jìn)行設(shè)計(jì)，可得出以下數(shù)據(jù)：最佳液料比為1：20；最佳乙醇體積分?jǐn)?shù)為90%；最佳回流時(shí)間為1.5h；最佳提取溫度為60℃。在滿足上述條件的前提下，對橄欖葉總黃酮進(jìn)行提取，提取率高達(dá)2.3%。

四、橄欖葉提取物的毒理學(xué)研究

研究人員以原衛(wèi)生部頒布的評價(jià)食品安全性所適用程序及方法為依據(jù)，對大鼠進(jìn)行了長達(dá)90d的喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，期間大鼠正?；顒?dòng)及生長，既不存在死亡病例，同時(shí)也不存在拒食等異常行為。每周基于對照組對雄大鼠的體重、食物利用率以及進(jìn)食總量進(jìn)行比較，不存在顯著性差異。在喂養(yǎng)約45d后，由研究人員對各組大鼠血液進(jìn)行檢測，待實(shí)驗(yàn)告一段落，再次對大鼠血液進(jìn)行檢測，通過對比中期檢測值和末期檢測值，可得出各參數(shù)波動(dòng)正常的結(jié)論。另外，小鼠精子畸形實(shí)驗(yàn)中未發(fā)現(xiàn)精子誘變活性。關(guān)于口毒性實(shí)驗(yàn)，在經(jīng)口MTD值不低于15g/kg的前提下，研究人員未發(fā)現(xiàn)相關(guān)誘變活性。綜上所述，橄欖葉提取物滿足無毒級提取物標(biāo)準(zhǔn)，不存在潛在致突變的可能。