楊麗蓉 趙海鵬,齊衍超 陳燕 楊釗

摘 要：目的：應(yīng)用高效液相色譜法測(cè)定了保健食品中非法添加的一新型他達(dá)拉非類似物（3-羥丙基去甲基他達(dá)拉非）的含量。方法：采用島津Shim-pack GIST C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 ?m），流動(dòng)相A為磷酸三乙胺溶液-甲醇-乙腈（60∶20∶20），流動(dòng)相B為磷酸三乙胺溶液-甲醇-乙腈（8∶46∶46），梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm。結(jié)果：3-羥丙基去甲基他達(dá)拉非濃度在11.53～92.24μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=1.000 0），平均回收率（n=6）為99.08%。結(jié)論：建立了保健食品中3-羥丙基去甲基他達(dá)拉非含量測(cè)定的方法。

關(guān)鍵詞：3-羥丙基去甲基他達(dá)拉非;保健食品;HPLC

近年來(lái)，部分不法分子將磷酸二酯酶5抑制劑（Phosphodiesterase 5，PDE-5）類化合物非法用于提高免疫力、緩解體力疲勞的保健食品中，以獲取暴利[1]。這類非法添加的化學(xué)物質(zhì)若長(zhǎng)期使用，非但起不到強(qiáng)身健體效果，甚至?xí)p害人體健康[2]。國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局頒布的現(xiàn)行檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)中涉及11種PDE-5選擇性抑制劑[3]，為規(guī)避檢查，不法生產(chǎn)者采取添加標(biāo)準(zhǔn)外的物質(zhì)[4]。

本文采用HPLC-DAD進(jìn)行緩解體力疲勞類保健食品中非法添加篩查時(shí)，發(fā)現(xiàn)有1個(gè)未知結(jié)構(gòu)的他達(dá)拉非類似物，經(jīng)過(guò)正相硅膠薄層色譜分離純化得到目標(biāo)物后，用HPLC-MS/MS得到其相對(duì)分子質(zhì)量和結(jié)構(gòu)碎片，結(jié)合高分辨質(zhì)譜、核磁共振氫譜數(shù)據(jù)及文獻(xiàn)資料[5]，經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)比確認(rèn)，最終鑒定了目標(biāo)物的結(jié)構(gòu)為6-（benzo[d][1，3]dioxol-5-yl）-2-（3-hydroxypropyl）-2，3，6，7，12，12a-hexahydropyrazino[12：1，6]pyrido[3，4-b]indole-1，4-dione（結(jié)構(gòu)式如圖1所示）。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法實(shí)現(xiàn)了對(duì)保健食品中該物質(zhì)的定量檢測(cè)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

高效液相色譜儀（Ultimate3000型，Thermo）;超聲波清洗器（KQ-700VDE型，昆山超聲儀器有限公司）;XSE-205DU電子天平（METTLER TOLEDO）。

甲醇（色譜純），乙腈（色譜純），三乙胺（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，99.0%），磷酸（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，85.0%），3-羥丙基去甲基他達(dá)拉非對(duì)照品（加拿大TLC藥物標(biāo)準(zhǔn)品有限公司，商品名：Tadalafil Impurity 37，純度：99.4%）;保健食品（批號(hào)：20190425）為濰坊市奎文區(qū)市場(chǎng)監(jiān)督管理局提供的樣品。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件

Ultimate3000型高效液相色譜儀，色譜柱：島津Shim-pack GIST C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 ?m）;進(jìn)樣量：10 μL;柱溫：35 ℃;檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm，二極管陣列檢測(cè)器;流動(dòng)相A為磷酸三乙胺溶液（取三乙胺7 mL用水稀釋至1 000 mL，用磷酸調(diào)pH至2.8）-甲醇-乙腈（60∶20∶20），流動(dòng)相B為磷酸三乙胺溶液-甲醇-乙腈（8∶46∶46），梯度洗脫;1～12 min，流動(dòng)相A為100%;25～30 min，流動(dòng)相B為100%;31～36 min，流動(dòng)相A為100%;流速：1.0 mL/min。

1.2.2 溶液的制備

（1）供試品溶液制備。精密稱取1 g供試品，置于50 mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲處理15 min，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液即得。

（2）對(duì)照品溶液制備。精密稱取3-羥丙基去甲基他達(dá)拉非對(duì)照品9.28 mg（純度為99.4%），于100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成質(zhì)量濃度為92.24 μg/mL的對(duì)照品溶液。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性關(guān)系

精密吸取1.2.2（2）對(duì)照品溶液2.5 mL、5.0 mL、10.0 mL和15.0 mL，分別至20 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，按“1.2.1”色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)，計(jì)算得線性方程為Y=33.677X+14.4，r=1.000 0，表明3-羥丙基去甲基他達(dá)拉非濃度在11.53～92.24 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.2 精密度試驗(yàn)

取同一供試品溶液，按“1.2.1”項(xiàng)下色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，3-羥丙基去甲基他達(dá)拉非含量的RSD為0.3%。

2.3 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的同一批保健食品（20190425）6份各0.5 g，分別加入3-羥丙基去甲基他達(dá)拉非對(duì)照品溶液10 mL

（濃度為0.115 3 mg/mL）按1.2.2（1）制備供試品溶液，按“1.2.1”色譜條件進(jìn)行測(cè)定，進(jìn)行回收率考察，平均回收率為99.08%，RSD為1.10%（n=6），表明本方法測(cè)定3-羥丙基去甲基他達(dá)拉非準(zhǔn)確率較高（表1）。

2.4 樣品含量測(cè)定

按1.2.2（1）方法制備供試品溶液，按“1.2.1”項(xiàng)條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算3-羥丙基去甲基他達(dá)拉非的含量，20190425號(hào)樣品含量為2.12 mg/g。

3 討論與結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)針對(duì)最新發(fā)現(xiàn)的一種新型他達(dá)拉非衍生物3-羥基丙基去甲基他達(dá)拉非，采用高效液相色譜法實(shí)現(xiàn)了對(duì)保健食品中該物質(zhì)的定量檢測(cè)。該方法填補(bǔ)了現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)對(duì)保健食品中非法添加該物質(zhì)檢測(cè)的空白，為完善食品中非法添加化學(xué)藥品數(shù)據(jù)庫(kù)，保障人們飲食安全提供了技術(shù)支持。

參考文獻(xiàn)

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[2]蔡振世，徐端瓊，盧文斌.補(bǔ)腎壯陽(yáng)類保健品中非法添加物檢測(cè)方法在國(guó)內(nèi)的研究進(jìn)展[J].海峽藥學(xué)，2016，28（7）：61-64.

[3]國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局.藥品補(bǔ)充檢驗(yàn)方法和檢驗(yàn)項(xiàng)目批準(zhǔn)件（批準(zhǔn)件編號(hào)2009030）[EB/OL].（2009-12-07）[2021-03-17].

https：//www.doc88.com/p-9189096274401.html？r=1.

[4]黃芳，吳惠勤，黃曉蘭，等.高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定保健品及中成藥中非法添加的17種壯陽(yáng)類化學(xué)藥[J].色譜，2016，34（3）：270-278.

[5]申國(guó)華，劉曉普.中成藥中非法添加他達(dá)拉非新型衍生物的檢測(cè)及結(jié)構(gòu)鑒定[J].中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2020，37（2）：192-196.