李 儀， 葉偉標(biāo)， 冼麗英， 戴紹文， 莫玉前， 劉國(guó)輝

東莞市人民醫(yī)院 腎內(nèi)科，廣東 東莞 523059

免疫球蛋白A(immunity globulin A，IgA)腎病是臨床上常見(jiàn)的免疫腎小球腎疾病，以腎小球系膜區(qū)IgA沉積為主要特征，臨床表現(xiàn)復(fù)雜，其發(fā)病機(jī)制目前尚未清楚。有研究認(rèn)為，該病發(fā)病的主要原因是機(jī)體免疫清除功能受損、黏膜含量抗原清除存在缺陷，與細(xì)胞免疫緊密相關(guān)[1-4]。本研究旨在探討IgA腎病患者的臨床特征及外周血T細(xì)胞、Th22變化?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取自2015年2月至2017年2月東莞市人民醫(yī)院收治的87例IgA腎病患者納入B組。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《IgA腎病臨床診治指南》[5]中有關(guān)IgA腎病的診斷標(biāo)準(zhǔn)；臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：伴有過(guò)敏性紫癜、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等繼發(fā)性IgA腎?。话橛杏绊懩I功能疾病，如高血壓、其他型腎炎等；有腎移植史；重要臟器疾??；研究前90 d內(nèi)服用過(guò)激素或免疫抑制劑。選取同期60例健康者納入A組。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。所有研究對(duì)象均簽署知情同意書(shū)。

1.2 研究方法

1.2.1 分離外周血單核細(xì)胞 采集所有受試者清晨空腹靜脈血4 ml，抗凝后，在試管中加入5 ml DMEM培養(yǎng)基均勻混合，以3 000 r/min離心30 min，得到外周血單核細(xì)胞，再加入10 ml DMEM培養(yǎng)基混勻，以2 000 r/min離心10 min。用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞重懸并計(jì)數(shù)，再將細(xì)胞濃度調(diào)整為1×106個(gè)/ml，分別裝入流式細(xì)胞管中(每管含1×106個(gè)細(xì)胞)備用。

1.2.2 外周血中T細(xì)胞檢測(cè) 分別取同型對(duì)照管、試驗(yàn)管內(nèi)400 μl抗凝后靜脈血，于常溫條件下加入10 μl Anti-CD4(PerCP)、10 μl Anti-CD25(APC)，避光30 min；于每個(gè)流式細(xì)胞管內(nèi)加入3 ml溶血素，靜置20 min，加入1 ml磷酸緩沖液洗滌，離心10 min后除上清液，加入1 ml Fixation/Permeabilization Solution 固定、通透，靜置90 min，加入2 ml Permeabilization Buffer，離心除上清，滴入10 μl AntiFOXP3-PE，對(duì)照管內(nèi)加入10μl AntilgC-PE，常溫30 min，固定后上流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

1.2.3 檢測(cè)Th細(xì)胞亞群 取10 μl外周血單核細(xì)胞懸液，加入10 μl的0.2%臺(tái)盼藍(lán)，用顯微鏡觀察細(xì)胞狀態(tài)并計(jì)數(shù)。剩余外周血單核細(xì)胞懸液以2 000 r/min離心10 min，采集細(xì)胞，通過(guò)DMEM培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×106個(gè)/ml后，置入流式細(xì)胞管內(nèi)。在常溫條件下，設(shè)對(duì)照管與試驗(yàn)管，每管中加5 μl anti-CD4(FITC)后，避光靜置30 min，用磷酸緩沖液洗滌細(xì)胞后，2 000 r/min離心10 min，棄上清，滴入600 μl固定、透化溶液，避光30 min；加入5 ml配伍后的BDPerm/Wash洗滌，離心除上清液，于試驗(yàn)管中滴入5 μl anti-IFN-y-FITC、ani-L-9-PE、anti-IL-4-APC，對(duì)照管內(nèi)加入2 μl anti-IgG1-PE、2 μl anti-IgG1-APC，避光40 min，固定后上流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

2 結(jié)果

2.1 兩組臨床特征比較 A組與B組男性比例、年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。B組尿素氮>7 mmol/L、高血壓、腰痛比例高于A組，腎小球過(guò)濾率>60 ml/min比例低于A組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩組一般資料比較/例(百分率/%)

2.2 兩組外周血T細(xì)胞、Th22細(xì)胞比較 B組CD3+、CD4+、CD8+、Th22高于A組，CD4+/CD8+低于A組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 兩組外周血T細(xì)胞、Th22細(xì)胞比較

3 討論

IgA腎病屬于原發(fā)性腎小球疾病。IgA腎病臨床表現(xiàn)呈多樣性，包括蛋白尿、尿素氮>7 mmol/L、血尿等臨床特征[6]。本研究結(jié)果顯示，B組100.00%患者檢出血尿，其中發(fā)作性肉眼血尿占51.72%、持續(xù)性鏡下血尿占48.28%，82.76%患者檢出蛋白尿，19.54%患者血肌酐>132 μmol/L，37.93%患者有高血壓，36.78%患者有腰痛，6.90%患者有腹痛。有研究表明，鏡下血尿伴蛋白及蛋白尿?yàn)镮gA腎病患者常見(jiàn)的臨床表現(xiàn)，若病情持續(xù)發(fā)展未得到有效控制，可發(fā)展為慢性腎衰竭，從而出現(xiàn)高血壓、腹痛等并發(fā)癥[7]。IgA腎病發(fā)病機(jī)制尚不明確，但已證實(shí)與人體免疫因素相關(guān)。有研究表明，淋巴細(xì)胞與腎疾病的發(fā)生及病情進(jìn)展存在一定關(guān)系[8]。另有研究通過(guò)病理學(xué)證實(shí)，在腎中均有淋巴細(xì)胞，并浸潤(rùn)于腎小球、腎間質(zhì)[9]。T淋巴細(xì)胞亞群以CD4+、CD8+、CD4+/CD8+表示，若上述免疫臨床指標(biāo)出現(xiàn)異常，則提示T細(xì)胞亞群失去平衡，細(xì)胞因子發(fā)生異常，導(dǎo)致免疫功能失調(diào)。本研究結(jié)果顯示，B組CD3+、CD4+、CD8+、Th22均高于A組，CD4+/CD8+低于A組，提示IgA腎病患者發(fā)病可能與T淋巴細(xì)胞有關(guān)。另有研究根據(jù)IgA腎病患者臨床特征水平將患者分為中高危組與低危組，對(duì)其外周血Th細(xì)胞亞群水平進(jìn)行探討，結(jié)果表明，患者外周血T細(xì)胞亞群CD4+細(xì)胞水平明顯升高，且CD4+/CD8+比值也增加[10]。

綜上所述，IgA腎病患者臨床特征可表現(xiàn)為血尿、蛋白尿、腎小球過(guò)濾率下降等，伴外周血CD3+、CD4+、CD8+、Th22升高，CD4+/CD8+降低。