劉晨龍 王寶維* 葛文華 凡文磊 孔 敏 張名愛 王煥森 邢 月 汪 超 王巧莉

(1.青島農(nóng)業(yè)大學優(yōu)質(zhì)水禽研究所，國家水禽產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系營養(yǎng)與飼料研究室，青島 266109；2.重慶市畜牧科學院，重慶 402460；3.青島普興生物科技有限公司，青島 266113)

葉酸又名喋酰谷氨酸，是參與動物生長發(fā)育的一種重要水溶性維生素。葉酸在機體營養(yǎng)代謝中發(fā)揮重要生理作用，為機體細胞生長和繁殖所必需的物質(zhì)，幫助蛋白質(zhì)的代謝，缺乏葉酸可導致機體同型半胱氨酸代謝和營養(yǎng)物質(zhì)利用率下降[1-2]。缺乏葉酸還會導致高同型半胱氨酸血癥，進而影響血管功能，增加卒中風險。研究發(fā)現(xiàn)，缺乏葉酸影響機體營養(yǎng)代謝，從而導致機體生長緩慢，母雞缺乏葉酸會引起產(chǎn)蛋量和孵化率下降，且死亡率升高[3]。試驗表明，缺乏葉酸可加重大腦中動脈閉塞(middle cerebral artery occlusion，MCAO)和再灌注后的DNA氧化損傷，增大缺血病灶體積[4]。Abas等[5]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧添加適宜水平的葉酸可提高羅曼蛋雞的產(chǎn)蛋量和蛋品質(zhì)。El-Husseiny等[6]研究表明，飼糧添加適宜水平的葉酸可以降低血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶的活性，并能提高肉雞的生長性能。夏偉光等[7]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧添加1.0 mg/kg 葉酸顯著提高了山麻鴨的蛋殼相對重量，且獲得較高的蛋殼厚度。飼糧中添加適宜水平的葉酸可降低育雛期仔鵝的死淘率[8]。目前，我國在種雞、種鴨葉酸需要量方面已有報道，但有關(guān)種鵝的葉酸需要量還未見報道。因此，本試驗通過研究飼糧葉酸添加水平對初產(chǎn)種鵝繁殖性能、蛋品質(zhì)及血清生殖激素和抗氧化指標的影響，旨在確定葉酸在初產(chǎn)種鵝飼糧中的適宜添加水平，為完善我國種鵝營養(yǎng)需要量數(shù)據(jù)庫提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料和試驗設(shè)計

試驗鵝(五龍鵝)由高密市銀河潤雁鵝業(yè)有限公司提供。葉酸由青島某生物科技有限公司提供，有效成分含量為98.0%。

選擇健康、體重相近的34周齡種鵝180只，隨機分成6個組，每組6個重復(fù)，每個重復(fù)5只鵝(1公4母)。各組(Ⅰ～Ⅵ組)種鵝分別飼喂葉酸添加水平為0、0.25、0.50、0.75、1.00和1.25 mg/kg的試驗飼糧。預(yù)試期1周，飼喂基礎(chǔ)飼糧；正試期10周。

1.2 試驗飼糧

基礎(chǔ)飼糧參照NRC(1994)家禽營養(yǎng)需要量中推薦的種鵝飼糧營養(yǎng)水平設(shè)計配方，其組成及營養(yǎng)水平見表1。采用高效液相色譜法[9]測定基礎(chǔ)飼糧中葉酸含量為0.50 mg/kg。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風干基礎(chǔ))

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗種鵝采用地面飼養(yǎng)方式，自由采食，自由飲水。試驗前鵝舍進行充分沖洗和嚴格消毒，試驗期內(nèi)每周消毒2次。每天08：00撿蛋，記錄產(chǎn)蛋數(shù)、蛋重、耗料量和合格蛋數(shù)。

1.4 測定指標及方法

1.4.1 繁殖性能和蛋品質(zhì)指標的測定

繁殖性能和蛋品質(zhì)指標的測定與計算方法按照農(nóng)業(yè)部推薦標準NY/T 823—2004進行。

1.4.2 血清生殖激素指標的測定

飼養(yǎng)試驗結(jié)束后采血，采血前斷料24 h，從6個組中每個重復(fù)隨機選擇2只種鵝，采用抗凝管翅靜脈采血，3 000 r/min離心15 min制備血清，分裝成3份，放入-40 ℃冰箱保存。血清孕酮、雌二醇、促卵泡素、催乳素含量采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗測定，試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.4.3 血清抗氧化指標的測定

汽車駛出中甸壩子，來到金沙江邊。江水從豐滿的稻谷邊洶涌流過。在江岸的公路上，就可以看見日尼神山，這是奔子欄最大的神山，當?shù)厝苏J為日尼神山是世界神山之首，在眾神的隱秘世界里有著無上的權(quán)威，能呼風喚雨、統(tǒng)攝眾神、救護子民。光從地貌上看，日尼神山也有著攝人心魂的氣勢，在江岸的山群中赫然聳立著，似乎其余的高山和河流，都為了維護他的氣勢而壓低山頭、改變流向。

血清總蛋白(TP)含量采用考馬斯亮藍法測定，血清總超氧化物歧化酶(T-SOD)活性采用羥胺法測定，血清丙二醛(MDA)含量采用硫代巴比妥酸反應(yīng)(TBA)法測定，血清谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性采用比色法測定，以上指標均用試劑盒(南京建成生物工程研究所)測定。

1.5 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析

采用SPSS 22.0軟件對數(shù)據(jù)進行單因素方差分析(one-way ANOVA)，差異顯著者進行Duncan氏法多重比較。數(shù)據(jù)均以平均值和均值標準誤(SEM)表示。P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著，并采用二次曲線模型擬合葉酸需要量。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼糧葉酸添加水平對初產(chǎn)種鵝繁殖性能的影響

由表2可知，飼糧葉酸添加水平對初產(chǎn)種鵝的產(chǎn)蛋率、合格率、健雛率和料蛋比影響不顯著(P>0.05)，但對種鵝蛋的受精率和孵化率有顯著或極顯著影響(P<0.05或P<0.01)。Ⅴ和Ⅵ組種鵝蛋的受精率顯著高于Ⅰ組(P<0.05)，Ⅵ組種鵝蛋的孵化率顯著高于Ⅰ、Ⅱ組(P<0.05)。

表2 飼糧葉酸添加水平對初產(chǎn)種鵝繁殖性能的影響

通過對受精率和孵化率(Y)分別與飼糧葉酸添加水平(X)進行二次曲線擬合，建立回歸方程：Y(受精率)=92.093+1.241X-0.516X2(R2=0.637，PQ<0.001)，Y(孵化率)=95.578+0.914X-0.415X2(R2=0.586，PQ=0.006)。根據(jù)回歸方程可以得出飼糧葉酸添加水平為1.22 mg/kg時受精率最高，飼糧葉酸添加水平為1.10 mg/kg時孵化率最高。Ⅳ組與Ⅴ組孵化率沒有顯著差異(P>0.05)，雖然從經(jīng)濟效益來看，飼糧葉酸添加水平為0.75 mg/kg時最好；但是，從繁殖性能考慮，建議飼糧葉酸添加水平為1.00～1.25 mg/kg。

2.2 飼糧葉酸添加水平對初產(chǎn)種鵝蛋品質(zhì)的影響

由表3可知，飼糧葉酸添加水平對初產(chǎn)種鵝的蛋重、蛋形指數(shù)、蛋殼厚度、蛋白高度、蛋黃顏色和蛋黃比率影響不顯著(P>0.05)，但對蛋殼強度有顯著影響(P<0.05)。Ⅴ組蛋殼強度顯著高于Ⅰ、Ⅳ、Ⅵ組(P<0.05)。

表3 飼糧葉酸添加水平對初產(chǎn)種鵝蛋品質(zhì)的影響

通過對蛋殼強度(Y)與飼糧葉酸添加水平(X)進行二次曲線擬合，建立回歸方程：Y(蛋殼強度)=5.058+0.014X-0.007X2(R2=0.441，PQ=0.008)，根據(jù)回歸方程可以得出飼糧葉酸添加水平為1.01 mg/kg時蛋殼強度最大。以上結(jié)果表明，飼糧葉酸添加水平與蛋殼強度密切相關(guān)，且在葉酸添加水平為1.01 mg/kg時達到最大。

2.3 飼糧葉酸添加水平對初產(chǎn)種鵝血清生殖激素和抗氧化指標的影響

由表4可知，飼糧葉酸添加水平對初產(chǎn)種鵝血清雌二醇、促卵泡素和催乳素含量影響不顯著(P>0.05)，但對血清孕酮含量有極顯著影響(P<0.01)。Ⅴ組血清孕酮含量顯著或極顯著高于Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ組(P<0.05或P<0.01)。

表4 飼糧葉酸添加水平對初產(chǎn)種鵝生殖激素指標的影響

通過對血清孕酮含量(Y)與飼糧葉酸添加水平(X)進行二次曲線擬合，建立回歸方程：Y(血清孕酮含量)=141.565+0.235X-0.124X2(R2=0.648，PQ=0.009)，根據(jù)回歸方程可以得出飼糧葉酸添加水平為1.05 mg/kg時血清孕酮含量最高。以上結(jié)果表明，葉酸有提高初產(chǎn)種鵝血清孕酮含量的效果，但Ⅳ組和Ⅴ組血清孕酮含量沒有顯著差異，從經(jīng)濟效益上來看，建議飼糧葉酸添加水平為0.75 mg/kg。

由表5可知，飼糧葉酸添加水平對初產(chǎn)種鵝血清T-SOD和GSH-Px活性無顯著影響(P>0.05)，但對血清TP和MDA含量有顯著或極顯著影響(P<0.05或P<0.01)。Ⅴ組血清TP含量顯著或極顯著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅵ組(P<0.05或P<0.01)，Ⅵ組血清MDA含量顯著低于Ⅰ和Ⅱ組(P<0.05)。

表5 飼糧葉酸添加水平對初產(chǎn)種鵝血清抗氧化指標的影響

通過對血清TP和MDA含量(Y)分別與飼糧葉酸添加水平(X)進行二次曲線擬合，建立回歸方程：Y(血清TP含量)=59.315+0.123X-0.061X2(R2=0.438，PQ=0.017)，Y(血清MDA含量)=52.172-6.564X+3.647X2(R2=0.606，PQ=0.003)，根據(jù)回歸方程可以得出飼糧葉酸添加水平為1.12 mg/kg時抗氧化性能最好。Ⅴ組和Ⅳ組血清MDA含量沒有顯著差異(P>0.05)，但從經(jīng)濟效益上來看，飼糧葉酸添加水平為0.75 mg/kg時最好。以上結(jié)果表明，飼糧葉酸添加水平為1.00～1.25 mg/kg時，可顯著提高初產(chǎn)種鵝血清TP含量，顯著降低初產(chǎn)種鵝血清MDA含量。

3 討 論

3.1 飼糧葉酸添加水平對初產(chǎn)種鵝繁殖性能的影響

支麗慧[10]研究發(fā)現(xiàn)，肉仔雞孵化期不同胚齡注射葉酸極顯著影響了各組種蛋孵化率。劉安之等[11]研究表明，飼糧葉酸添加水平為1.5 mg/kg時可極顯著提高48周齡星雜579蛋雞受精率和孵化率。Roth-Maier等[12]和Ryu等[13]研究表明，飼糧葉酸添加水平為3.6 mg/kg時白萊航母雞的生產(chǎn)性能最好，飼糧葉酸添加水平為2.0 mg/kg時白萊航母雞的受精率達到最大值。本試驗結(jié)果表明，隨飼糧葉酸添加水平的提高初產(chǎn)種鵝蛋的受精率和孵化率有上升趨勢，表明飼糧添加葉酸可提高初產(chǎn)種鵝蛋的受精率和孵化率。飼糧葉酸添加水平對初產(chǎn)種鵝的產(chǎn)蛋率、合格率、健雛率和料蛋比的影響不顯著。由二次擬合曲線得出當飼糧葉酸添加水平分別為1.22和1.10 mg/kg時初產(chǎn)種鵝的受精率和孵化率最高，建議飼糧葉酸添加水平為1.00～1.25 mg/kg。這表明初產(chǎn)種鵝蛋的受精率和孵化率受飼糧中葉酸添加水平的影響，可能是葉酸添加水平影響了種鵝的生殖激素的分泌。本試驗結(jié)果與前人研究結(jié)果基本一致，但是葉酸添加水平存在差異，是否與鵝種品種和飼養(yǎng)方式有關(guān)，還有待于進一步研究證實。

3.2 飼糧葉酸添加水平對初產(chǎn)種鵝蛋品質(zhì)的影響

Hebert等[14]研究表明，在大麥-豆粕型飼糧中添加不同水平(0、2、4、8、16、32、64、128 mg/kg)的葉酸，對蛋雞的蛋重、采食量和料蛋比均無顯著影響。Tactacan等[15]在小麥-豆粕型飼糧中分別添加10和100 mg/kg的葉酸飼喂蛋雞21 d，結(jié)果發(fā)現(xiàn)添加10和100 mg/kg的葉酸對蛋雞的蛋重和產(chǎn)蛋量均無顯著影響。本試驗結(jié)果表明，飼糧葉酸添加水平對初產(chǎn)種鵝蛋重、蛋形指數(shù)、蛋殼厚度、蛋白高度、蛋黃顏色和蛋黃比率影響不顯著，蛋殼強度隨葉酸添加水平的增加有增加趨勢，說明飼糧添加適宜水平葉酸可以提高初產(chǎn)種鵝蛋的蛋殼強度。初產(chǎn)種鵝蛋的蛋殼強度的增加可能是葉酸影響了初產(chǎn)種鵝血清孕酮含量，孕酮不僅能夠增加蛋殼厚度，而且可以增強蛋殼強度[16]。由二次擬合曲線得出，當飼糧葉酸添加水平為1.01 mg/kg時初產(chǎn)種鵝的蛋殼強度最大。

3.3 飼糧葉酸添加水平對初產(chǎn)種鵝血清生殖激素和抗氧化指標的影響

Yang等[17]研究表明，隨時間的變化各個階段血清生殖激素含量不同，血清孕酮含量在四季鵝產(chǎn)蛋最高期達到最高[18]。夏偉光[7]等研究發(fā)現(xiàn)，隨飼糧葉酸添加水平的提高，血清孕酮含量有升高趨勢，且在飼糧葉酸添加水平為2.0 mg/kg時血清孕酮含量最高。本研究表明，初產(chǎn)種鵝飼糧添加葉酸可以提高血清孕酮含量，初產(chǎn)種鵝的產(chǎn)蛋量與血清孕酮含量有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，孵化期3、11胚齡注射不同水平葉酸對肉仔雞血漿白蛋白含量無顯著影響，但是顯著升高了血漿TP含量[10]。葉酸可顯著降低小鼠血清MDA含量[19]，血清TP通過限制自由基的產(chǎn)生從而在機體內(nèi)具有一定的抗氧化力[20]。飼糧添加15 mg/kg的葉酸可以顯著提高山羊血清TP、白蛋白含量[21]。研究發(fā)現(xiàn)，如果機體內(nèi)有大量的氧化自由基，會造成血清T-SOD活性下降，抗氧化能力下降，生成大量的MDA，造成機體的損傷[22]。因此血清MDA含量也可反映機體的抗氧化能力。GSH-Px是機體抗氧化能力指標之一[23]。本試驗中，雖然飼糧葉酸添加水平對初產(chǎn)種鵝血清T-SOD和GSH-Px活性無顯著影響，但血清T-SOD和GSH-Px活性有增加趨勢。這可能是飼糧葉酸添加水平降低了初產(chǎn)種鵝血清MDA含量，從而影響了血清T-SOD和GSH-Px活性。飼糧添加葉酸提高了初產(chǎn)種鵝血清TP含量，血清TP在機體內(nèi)有一定的抗氧化能力；飼糧添加葉酸降低了初產(chǎn)種鵝血清MDA含量，從而反映出初產(chǎn)種鵝的抗氧化能力隨飼糧葉酸添加水平的增加而提高。根據(jù)二次擬合曲線，初產(chǎn)種鵝的抗氧化能力在飼糧葉酸添加水平為1.00～1.25 mg/kg時較大。這表明飼糧葉酸添加水平與初產(chǎn)種鵝抗氧化能力密切相關(guān)，葉酸對抗氧化能力的影響機理目前尚未明確，其有關(guān)分子調(diào)控機理有待于繼續(xù)研究。

4 結(jié) 論

飼糧添加葉酸有利于提高初產(chǎn)種鵝的受精率、孵化率、蛋殼強度和抗氧化能力。初產(chǎn)種鵝的飼糧葉酸適宜添加水平為1.00～1.25 mg/kg。