◎ 姚少芳

（1.廣東省食品工業(yè)研究所有限公司，廣東 廣州 511442；2.廣東省食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)站，廣東 廣州 511442；3.廣東省食品工業(yè)公共實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 511442）

鄰苯二甲酸酯類（PAEs）又稱增塑劑，一般指鄰苯二甲酸與4～15個(gè)碳的醇形成的酯，可降低塑料材料的硬度、脆化溫度和軟化溫度，提高柔韌性和曲撓性[1]，因此在塑料生產(chǎn)中被廣泛應(yīng)用。PAEs與塑料基質(zhì)間沒有形成共價(jià)鍵，當(dāng)接觸到油脂、水等物質(zhì)時(shí)極易溶出，從而擴(kuò)散到環(huán)境或食物中[2]。研究表明，PAEs可能會(huì)對(duì)人體的神經(jīng)系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)等產(chǎn)生毒性[3]。

魚油是一種較為特殊的脂肪性食品，大眾接受度極高。受原料、生產(chǎn)工藝、包裝工藝等因素的影響，PAEs的溶入風(fēng)險(xiǎn)較高，但是魚油中富含二十碳五烯酸（EPA）和二十二碳六烯酸（DHA）等多種n-3多不飽和脂肪酸，根據(jù)GB/T 5009.271—2016[4]的前處理方法并不能得到有效凈化。目前文獻(xiàn)報(bào)道的油脂中的PAEs檢測(cè)方法有氣相色譜法[5]、氣相色譜-質(zhì)譜法[6-8]、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[9]、高效液相色譜法[10-12]以及液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[13-14]等，其中質(zhì)譜法具有靈敏度高、抗干擾能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，在PAEs的檢測(cè)中應(yīng)用廣泛。本研究結(jié)合GC-MS對(duì)易揮發(fā)化合物有優(yōu)良的定性定量檢測(cè)性能，通過(guò)優(yōu)化樣品前處理方法，建立魚油膠囊7種PAEs的氣相色譜－質(zhì)譜的檢測(cè)方法。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

魚油膠囊（市售）。

鄰苯二甲酸酯及其內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品（純度均高于95%）：鄰苯二甲酸二甲酯（DMP）、鄰苯二甲酸二乙酯（DEP）、鄰苯二甲酸二異丁酯（DIBP）、鄰苯二甲酸二正丁酯（DBP）、鄰苯二甲酸二甲氧乙酯（DMEP）、鄰苯二甲酸二乙氧基乙基酯（DEEP）、鄰苯二甲酸二戊酯（DPP）、鄰苯二甲酸二甲酯-D4（DMP-D4）、鄰苯二甲酸二乙酯-D4（DEP-D4）、鄰苯二甲酸二異丁酯-D4（DIBP-D4）、鄰苯二甲酸二正丁酯-D4（DBP-D4）、鄰苯二甲酸二甲氧基乙酯-D4（DMEP-D4）、鄰苯二甲酸二乙氧基乙基酯-D4（DEEP-D4）以及鄰苯二甲酸二戊酯-D4（DPP-D4），均購(gòu)于德國(guó)Dr.Ehrenstorfer公司。

氯化鈉（分析純，廣州化學(xué)試劑廠）；PSA粉（40～60 μm，天津博納艾杰爾科技有限公司）；C18粉（40～63 μm，上海安譜儀器公司）；乙腈、正己烷（色譜純，美國(guó)Honeywell公司）。

Agilent 7890B-5977B氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國(guó)Agilent公 司，配EI離 子 源）、SIGMA 3K15臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（德國(guó)SIGMA公司）、IKA MS3 basic渦旋混合器（德國(guó)IKA公司）、HWS-26電熱恒溫水浴鍋（上海一恒科技有限公司）、ME204E萬(wàn)分之一天平（廣州市東南科技創(chuàng)科技有限公司）。

1.2 測(cè)定方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱，DB-5MS石英毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；進(jìn)樣口溫度260 ℃；傳輸線溫度290 ℃；進(jìn)樣量1 μL；載氣：氦氣（純度≥99.999%），流速1 mL·min-1，進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣；升溫程序：60 ℃保持1 min，以20 ℃·min-1升至220 ℃，保持1 min，以5 ℃·min-1升至260 ℃，保持1 min，以20 ℃·min-1升至290 ℃，保持8 min。

1.2.2 質(zhì)譜條件

電子轟擊離子源（EI）：電離能量70 eV，離子源溫度230 ℃，四級(jí)桿溫度150 ℃，溶劑延遲時(shí)間5 min；質(zhì)譜監(jiān)測(cè)方式：選擇離子掃描模式（SIM）。7種鄰苯二甲酸酯類化合物及其內(nèi)標(biāo)的特征離子見表1。

表1 7種鄰苯二甲酸酯類化合物及其內(nèi)標(biāo)的特征離子表

1.2.3 樣品前處理方法

取整顆魚油膠囊稱取質(zhì)量（精確至0.000 1 g）置于帶刻度玻璃比色管中，加水定容至20 mL，60 ℃水浴至完全溶解，取出渦旋混勻，放冷至室溫；取2 mL于玻璃離心管中，加5 mL正己烷飽和的乙腈，渦旋1 min，加2 mL乙腈飽和的正己烷和1 g氯化鈉，渦旋30 s，4 000 r·min-1離心10 min；取乙腈層于另一玻璃離心管，加2 mL乙腈飽和的正己烷，渦旋30 s，4 000 r·min-1離心5 min，棄去正己烷層，重復(fù)以上操作；乙腈層中加入500 mg C18粉、500 mg PSA粉，渦旋1 min，4 000 r·min-1離 心5 min，上 清 液 供GC-MS分析。

中國(guó)文化經(jīng)歷了自大、危機(jī)、自卑、自覺和自信的曲折過(guò)程,讓人清楚地看到,科學(xué)文化始終充當(dāng)著中國(guó)文化發(fā)展的增量,還源源不斷地修正作為存量的中國(guó)傳統(tǒng)文化,為中國(guó)文化現(xiàn)代轉(zhuǎn)型保駕護(hù)航,理應(yīng)是當(dāng)下中國(guó)特色社會(huì)主義先進(jìn)文化的不可或缺的組成部分。

1.2.4 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

分別稱取PAEs及其內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品10 mg（精確至0.1 mg），用正己烷定容至10 mL容量瓶，配制成1 000 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于-18 ℃避光保存。使用前稀釋得到0.01 μg·mL-1、0.02 μg·mL-1、0.05 μg·mL-1、0.1 μg·mL-1以及0.2 μg·mL-1且內(nèi)標(biāo)濃度為0.1 μg·mL-1混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

2 結(jié)果與分析

2.1 魚油膠囊溶解溫度的選擇

魚油膠囊殼的基質(zhì)大多數(shù)為明膠，并添加著色劑、遮光劑、甘油等輔料制成。明膠具有親水性，用溫水溶解以完全釋放出樣品中的目標(biāo)物質(zhì)，如果水溫過(guò)低，膠囊殼無(wú)法充分溶解，如果水溫過(guò)高，容易損失目標(biāo)物質(zhì)[15]。比較了30 ℃、40 ℃、50 ℃、60 ℃4種溫度水浴溶解魚油膠囊后提取凈化的結(jié)果，7種鄰苯二甲酸酯類化合物及其內(nèi)標(biāo)損失均不明顯，故采用60 ℃溶解魚油膠囊。

2.2 試劑的選擇

2.2.1 提取試劑的選擇

鄰苯二甲酸酯水溶性低，易溶于大多有機(jī)溶劑。比較了實(shí)驗(yàn)室常用的二氯甲烷、乙腈、丙酮、正己烷作為提取試劑的效果，結(jié)果表明，由于魚油內(nèi)容物雜質(zhì)過(guò)多，丙酮、二氯甲烷提取效果差，采用乙腈提取，正己烷脫脂除雜效果最好。

2.2.2 正己烷脫脂除雜次數(shù)的選擇

用正己烷進(jìn)行3次脫脂除雜，比較正己烷脫脂除雜第1次、第2次、第3次后的結(jié)果可知，7種鄰苯二甲酸酯類化合物及其內(nèi)標(biāo)損失均不明顯，

DMP、DMP-D4、DEP、DEP-D4、DIBP、DIBP-D4、DMEP、DMEP-D4、DEEP及DEEP-D4分離效果差異不大，但DBP、DBP-D4、DPP及DPP-D4由于魚油的干擾，隨著正己烷除雜次數(shù)的增加，其分離效果越好，如圖1和圖2所示。故采用3次正己烷除雜方式。

圖1 DBP和DBP-D4除雜的次數(shù)及分離效果圖

圖2 DPP和DPP-D4除雜的次數(shù)及分離效果圖

2.2.3 試劑提取使用量的選擇

分別使用5 mL、8 mL、10 mL乙腈對(duì)陽(yáng)性樣品進(jìn)行提取，對(duì)比其回收率發(fā)現(xiàn)提取量影響不大，見表2。

表2 不同用量乙腈對(duì)陽(yáng)性樣品進(jìn)行提取的回收率表

2.3 方法的線性范圍和檢出限

本方法采用內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行定量，建立以各目標(biāo)化合物的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，響應(yīng)值為縱坐標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性范圍、檢出限、回歸方程和相關(guān)系數(shù)見表3。

表3 7種PAEs的線性范圍、檢出限、回歸方程和相關(guān)系數(shù)表

由表3可知，線性相關(guān)系數(shù)均高于0.999。在優(yōu)化的色譜條件下，對(duì)基體進(jìn)行添加回收試驗(yàn)，按照信噪比（S/N）為3計(jì)算7種鄰苯二甲酸酯類化合物的方法的檢出限（LOD）為0.002 5～0.25 mg·kg-1。

2.4 方法的精密度和準(zhǔn)確度測(cè)定

按照1.2.3的步驟，選取陰性樣品進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，驗(yàn)證方法的精密度和準(zhǔn)確度。加標(biāo)水平分別為0.075 μg、0.15 μg和0.75 μg，每個(gè)加標(biāo)水平重復(fù)3次，扣除本底值后計(jì)算加標(biāo)回收率，如表4所示。

表4 不同加標(biāo)濃度的加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差表（n=6）

結(jié)果顯示，7種鄰苯二甲酸酯類化合物平均加標(biāo)回收率為86.4%～108.7%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.8%～4.8%（n=6），其精密度和準(zhǔn)確度能夠滿足分析需求。

3 結(jié)論

本文采用乙腈提取，3次正己烷脫脂除雜，PSA和C18凈化，GC-MS的檢測(cè)方法同時(shí)測(cè)定魚油膠囊中7種鄰苯二甲酸酯類化合物，該方法中7種鄰苯二甲酸酯類化合物含量在0.01～0.20 μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均加標(biāo)回收率為86.4%～108.7%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）均不大于4.8%（n=6），方法檢出限為0.002 5～0.25 mg·kg-1。