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        ALDH2基因G487A位點多態(tài)性與2型糖尿病患者腦梗死風(fēng)險的關(guān)系*

        2021-09-01 02:08:24王少津許麗娃吉家釵
        關(guān)鍵詞:等位基因多態(tài)性位點

        王少津,許麗娃,吉家釵

        (??谑腥嗣襻t(yī)院全科醫(yī)學(xué),海南???70208)

        2 型糖尿病是由胰島素分泌不足或胰島素抵抗引起的血糖升高疾病,若血糖濃度長期無法控制,會引起心、腦、腎的嚴(yán)重并發(fā)癥[1]。2 型糖尿病有很多慢性并發(fā)癥,其中腦梗死較常見[2],嚴(yán)重影響患者身心健康。ALDH2 是一種ALDH 同工酶,位于線粒體內(nèi),是催化乙醛等多種醛類物質(zhì)氧化代謝的關(guān)鍵酶[3]。而乙醇作為一種神經(jīng)麻醉劑,可引發(fā)心率失常,降低腦血流量,與腦梗死的發(fā)生有關(guān)。有報道稱,ALDH2基因多態(tài)性是急性腦梗死的危險因素之一[4],但ALDH2基因多態(tài)性與2 型糖尿病患者腦梗死風(fēng)險的關(guān)系研究較少。本研究探討2 型糖尿病患者腦梗死風(fēng)險與ALDH2基因多態(tài)性的關(guān)系,旨在對其發(fā)生腦梗死的風(fēng)險評估提供依據(jù)。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料

        選取2019年1月—2020年1月海口市人民醫(yī)院收治的116 例2 型糖尿病患者為研究對象,根據(jù)是否發(fā)生腦梗死分為腦梗死組71例和非腦梗死組45例。腦梗死組男性42 例,女性29 例;年齡50~79 歲,平均(64.16±6.82)歲。非腦梗死組男性24 例,女性21 例;年齡50~78 歲,平均(63.24±7.36)歲。兩組患者性別、年齡比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審批,患者及家屬知情并簽訂知情同意書。

        1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

        1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn)①符合2 型糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)[5];②符合腦梗死相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[6],并經(jīng)CT 證實。

        1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn)①合并惡性腫瘤;②自身免疫性疾??;③重度肝、腎功能異常;④冠狀動脈粥樣硬化性心臟?。ㄒ韵潞喎Q冠心病)、心肌梗死等疾病。

        1.3 主要試劑與儀器

        DNA 快速抽提試劑盒(上海喬羽生物科技有限公司,貨號:QY-MY296J),基因組DNA 擴增試劑盒(上海機純實業(yè)有限公司,貨號:JC-A78139)。ExF24086V 和分光光度儀(Nanodrop 2000)購自美國賽默飛世爾科技有限公司,CFX96 qRT-PCR 儀(德國Bio-Rad 公司)。

        1.4 觀察指標(biāo)

        記錄所有研究對象的吸煙史、飲酒史等資料,采用全自動生化分析儀檢測患者血清甘油三酯(Triglyceride, TG)、總膽固醇(total cholesterol, TC)、低密度脂蛋白膽固醇(low-density lipoproteincholesterol, LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(highdensity lipoprotein-cholesterol,HDL-C)水平。

        1.5 基因組DNA提取及擴增

        收集所有患者抗凝血液標(biāo)本,常溫解凍,嚴(yán)格按血液基因組DNA 快速抽提試劑盒說明操作,提取外周血基因組DNA。ALDH2基因多態(tài)性位點G487A 引物根據(jù)Gen bank 公布序列用Primer 5.0 生物軟件設(shè)計。采用限制性片段長度多態(tài)性聚合酶鏈反應(yīng)(PCR-RELP) 對ALDH2基因進行分型。PCR 反應(yīng)體系:滅菌雙蒸水14.2 μl,10×PCR 緩沖液2 μl,dNTP 1.6 μl,Taq 酶0.2 μl,DNA 模板1 μl,正反向引物各0.5 μl。PCR 反應(yīng)條件:95℃預(yù)變性3 min,95℃變性30 s,60℃退火45 s、72℃延伸30 s,共計35 次循環(huán),72℃繼續(xù)延伸10 min。結(jié)束后離心并純化產(chǎn)物。G487A正向引物序列:5′-GTCAACTGCTATGATGTGTTTGG-3′;反向引物序列:5′-CCACCAGCAGACCCTCAAG-3′,長度200 bp。由蘇州吉瑪生物技術(shù)有限公司提供目的因片段測序,判斷ALDH2基因的多態(tài)性。

        1.6 統(tǒng)計學(xué)方法

        數(shù)據(jù)分析采用SPSS 25.0 統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料以構(gòu)成比或率(%)表示,比較用χ2檢驗;計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,比較用t檢驗;影響因素的分析用多因素Logistic 回歸模型。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 兩組一般資料比較

        腦梗死組與非腦梗死組性別、年齡、飲酒及吸煙比例、HDL-C 水平比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);兩組TC、TG、LDL-C 水平比較,經(jīng)t檢驗,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),腦梗死組高于非腦梗死組。見表1。

        表1 兩組患者一般資料比較

        2.2 Hardy-Weinberg平衡定律檢驗

        根據(jù)Hardy-Weinberg 平衡定律,非腦梗死組與腦梗死組ALDH2基因G487A 位點基因型的期望值和觀察值均符合遺傳平衡定律(P>0.05)。見表2。

        表2 Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗結(jié)果

        2.3 ALDH2基因G487A位點多態(tài)性分析

        兩組ALDH2基因G487A 位點GG 型比例比較,經(jīng)χ2檢驗,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),腦梗死組低于非腦梗死組;兩組AG 型、AA 型比例比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),腦梗死組高于非腦梗死組。兩組ALDH2基因G487A 位點A 等位基因頻率分布比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),腦梗死組高于非腦梗死組。見表3。

        表3 ALDH2基因G487A位點多態(tài)性分析 例(%)

        2.4 2 型糖尿病患者發(fā)生腦梗死的影響因素分析

        以2 型糖尿病患者是否發(fā)生腦梗死為因變量,以TC、TG、HDL-C、LDL-C、ALDH2基因G487A位點野生GG 型、雜合子AG 型、純合子突變AA型為自變量,進行多因素Logistic 回歸分析,結(jié)果顯示:TG[=2.396(95%CI:1.029,5.531)]、LDL-C[=2.512(95% CI:1.012,3.238)]、ALDH2基因G487A 位點(以野生GG 型為參照)雜合子AG 型[=3.107(95% CI:1.456,6.634)]、純合子突變AA型[=3.464(95% CI:1.594,7.528)]是2 型糖尿病患者發(fā)生腦梗死的獨立危險因素(P<0.05)。見表4。

        表4 2型糖尿病患者發(fā)生腦梗死的多因素Logistic回歸分析參數(shù)

        續(xù)表4

        3 討論

        腦梗死發(fā)病率近年來不斷攀升,其發(fā)生與遺傳、環(huán)境等因素相關(guān)[7]。2 型糖尿病患者腦部出現(xiàn)明顯的血液循環(huán)障礙,腦組織缺血性壞死是發(fā)生腦梗死的病變基礎(chǔ)[8]。ALDH2與心肌缺血性損傷和腦缺血性損傷有關(guān)。已有研究發(fā)現(xiàn),ALDH2基因多態(tài)性是2 型糖尿病患者并發(fā)冠心病的影響因素[9]。但ALDH2基因多態(tài)性是否影響2 型糖尿病發(fā)生腦梗死仍未有定論。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展,ALDH2基因及其基因突變與2 型糖尿病發(fā)生腦梗死風(fēng)險越來越受到關(guān)注。

        ALDH2是乙醛脫氫酶家族的重要成員,位于人類第12 號染色體上(12q24.2),其有13 個外顯子,在外顯子12 中有一個突變位點,G→A,可使整個分子結(jié)構(gòu)發(fā)生變化,導(dǎo)致ALDH2 喪失催化活性。ALDH2 是乙醇的重要代謝酶,主要分布在線粒體中,在乙醛氧化成乙酸的過程中起非常重要的作用,ALDH2等位基因的突變使第504 位谷氨酸變?yōu)橘嚢彼醄10]。機體無法降解乙醇是心、腦血管疾病的主要誘因之一,其在血管疾病的發(fā)生中扮演著重要角色,隨著全球飲酒人數(shù)不斷增加,酒精相關(guān)性疾病發(fā)生率逐年提升[11]。乙醇在人體代謝存在個體差異。有研究發(fā)現(xiàn),ALDH2基因多態(tài)性與肝炎、肝硬化、酒精性心肌病及其他酒精相關(guān)疾病有關(guān)[12-14]。有研究發(fā)現(xiàn),ALDH2基因多態(tài)性與心血管疾病相關(guān)[15]。吳和弟等[16]研究發(fā)現(xiàn),ALDH2基因型多態(tài)性與老年2 型糖尿病患者冠狀動脈狹窄及其嚴(yán)重程度均有密切關(guān)系。侯經(jīng)遠等[17]調(diào)查中國南方客家人群發(fā)現(xiàn)ALDH2基因AG/AA 基因型可增加該群體急性心肌梗死發(fā)生的風(fēng)險性。劉春苗等[18]研究發(fā)現(xiàn)ALDH2基因檢測結(jié)果分為3 種,GG 型、AG型和AA 型,H 型高血壓腦梗死組患者AA/AG 型及A 等位基因的頻率明顯高于H 型高血壓患者的非腦梗死組患者,說明A 等位基因可能增加H 型高血壓腦梗死的危險。Hardy-Weinberg 平衡定律分析顯示本研究樣本具有群體遺傳學(xué)代表性。本研究結(jié)果顯示,2 型糖尿病腦梗死組患者AA/AG 型及A 等位基因的頻率高于2 型糖尿病非腦梗死組患者,提示2 型糖尿病患者腦梗死與ALDH2基因多態(tài)性有關(guān)。鐘偉清等[4]研究發(fā)現(xiàn)腦梗死患者血清TC、TG、LDL-C 水平顯著高于非腦梗死者。本研究結(jié)果表明,腦梗死組2 型糖尿病患者TC、TG、LDL-C 水平高于非腦梗死組,提示TC、TG、LDL-C 可能參與2 型糖尿病患者發(fā)生腦梗死。多因素Logistic 回歸分析結(jié)果顯示,TG、LDL-C、ALDH2基因G487A位點雜合子AG 型、純合子AA 型突變是2 型糖尿病患者發(fā)生腦梗死的獨立危險因素,提示A 等位基因可能是2 型糖尿病患者發(fā)生腦梗死的危險因素。

        綜上所述,ALDH2基因?qū)Χ鄳B(tài)性與2 型糖尿病患者發(fā)生腦梗死有關(guān)。但本研究是小樣本量研究,可能結(jié)果存一定的偏倚性,仍需進一步擴大地區(qū)和樣本進行深入探討。

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