李 凡，余大為，楊成明，馮 宇，楊俊克，劉林林，關(guān)真平，張永福

內(nèi)臟利什曼病(visceral leishmaniasis,VL)又稱黑熱病(kata-azar),是一種通過白蛉叮咬傳播的人獸共患的寄生蟲病[1-2]。中國的黑熱病分為犬源型、人源型和自然疫源型[3-4]，甘肅是犬源型黑熱病主要的流行區(qū)[5-6]。人和犬的感染是利什曼病犬將利什曼原蟲傳播給健康的人和犬而導致[7]，人類病例往往集中在犬利什曼病發(fā)病率較高的地區(qū)[8]，而犬的感染往往先于人的感染[9]。一些國外學者開展了利什曼原蟲感染家犬的危險因素研究，但不同地點取得的研究結(jié)果差異很大[10]。課題組于2018-2019年在甘肅黑熱病流行區(qū)開展了以養(yǎng)犬家庭為基礎的調(diào)查，旨在了解犬源型黑熱病流行區(qū)犬感染的相關(guān)因素，為探討適合我國犬源型黑熱病防控的新方法提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 調(diào)查地點 選取近年來黑熱病病例較多的隴南市文縣中寨鎮(zhèn)興隆村和甘南州迭部縣洛大鎮(zhèn)洛大村作為調(diào)查現(xiàn)場。2個調(diào)查現(xiàn)場均位于河谷，生態(tài)環(huán)境相似、地理位置封閉，不易受其他村莊流動犬干擾。

1.2 調(diào)查方法 采用問卷方式對調(diào)查現(xiàn)場所有養(yǎng)犬家庭開展調(diào)查，調(diào)查犬主的年齡、性別、黑熱病防治知識知曉情況等內(nèi)容，記錄犬的位置、犬生活場所周圍的房屋條件，犬的來源、犬生活場所附近有無綠植等信息。同時采集受調(diào)查家庭犬靜脈血5 mL，注入加有乙二胺四乙酸鹽(EDTA)的采血管中，充分搖勻后4 ℃冷藏保存。所有受調(diào)查的犬主均同意調(diào)查資料和犬血液樣本在研究中使用。

1.3 檢測方法 采用PCR法進行血樣檢測。試劑盒采用德國Qiagen公司DNeasy Blood &Tissue Kit，按照產(chǎn)品說明書步驟提取DNA。以RV1(5′-CTTTTCTGGTCCCGCGGGTAGG-3′)和RV2(5′-CCACCTGGCCTATTTTACACCA-3′)為引物擴增動基體基因，擴增產(chǎn)物大小145 bp。取5 μL擴增產(chǎn)物于2%瓊脂糖凝膠電泳進行鑒定觀察。檢測以病原學檢測確定的病犬靜脈血抽提DNA作為陽性對照，以在非流行區(qū)采集的家犬血液樣本作為陰性對照。

1.4 統(tǒng)計學分析 采用EpiData3.1建立數(shù)據(jù)庫，采用IBM SPSS 23.0進行統(tǒng)計分析。分類數(shù)據(jù)采用例數(shù)和率[n(%)]描述并采用卡方檢驗，α=0.05；將檢驗有意義的變量納入多元Logistic回歸分析，變量的篩選采用條件向后逐步回歸法。

2 結(jié) 果

2.1 基本情況 中國疾病預防控制信息系統(tǒng)統(tǒng)計結(jié)果顯示，2009-2017年文縣中寨鎮(zhèn)共報告黑熱病病例27例，迭部縣洛大鎮(zhèn)共報告26例。興隆村和洛大村海拔分別為1 400 m、1 680 m；年均溫度分別為5～15 ℃、8～11 ℃；人口分別有1 845人和1 640人。在2村共調(diào)查養(yǎng)犬戶445戶，取得調(diào)查問卷445份，并采集了537只犬的靜脈血。

2.1 PCR檢測 對現(xiàn)場采集的537只犬靜脈血進行PCR檢測，利什曼原蟲PCR檢測陽性221只，陽性率41.15%(221/537)。其中文縣PCR檢測陽性率64.63%(95/147)，迭部縣PCR檢測陽性率32.31%(126/390)。

2.2 調(diào)查犬居住環(huán)境單因素分析 受調(diào)查的537只犬中有283只犬位置分布在村中央，有254只犬位置分布在村邊緣，分布在村中央和村邊緣的犬陽性率分別為33.92%(96/283)和49.21%(125/254)，兩者之間具有統(tǒng)計學差異(χ2=12.923，P<0.05)。379只犬居住場所附近房屋墻面為磚混/粉刷墻壁，158只犬居住場所附近為土坯/石片墻壁，兩種條件犬的陽性率分別為30.99%(110/355)和60.99%(111/182)，兩者之間具有統(tǒng)計學差異(χ2=44.723，P<0.05)。而犬舍與房屋距離遠近、犬只來源方式及犬居住周邊環(huán)境有無綠植這3種因素與犬陽性率之間無統(tǒng)計學差異，見表1。

表1 犬利什曼原蟲感染環(huán)境單因素分析

2.3 犬主黑熱病防治知曉情況單因素分析 共調(diào)查犬主445人，有210人家中存在陽性犬。其中家庭存在陽性犬的犬主中，知曉犬是黑熱病傳染源的占42.96%(58/135)，不知曉占49.03%(152/310)，兩者之間無統(tǒng)計學差異(χ2=1.390，P>0.05)；知曉黑熱病傳播途徑的占為51.43%(72/140)，不知曉占45.25%(138/305)，兩者之間無統(tǒng)計學差異(χ2=1.472，P>0.05)；知曉黑熱病傳播媒介的占42.70%(76/178)，不知曉占50.19%(134/267)，兩者之間無統(tǒng)計學差異(χ2=2.405，P>0.05)，見表2。

表2 有陽性犬家庭犬主黑熱病防治知曉情況的單因素分析

2.4 犬感染利什曼原蟲多因素分析 根據(jù)調(diào)查犬居住環(huán)境和犬主黑熱病防治知曉情況單因素分析中χ2檢驗結(jié)果，將具有統(tǒng)計學意義的變量犬的位置、犬舍附近房屋條件納入多元Logistic回歸模型中分析，篩選變量采用向后逐步法，納入標準為P=0.05，排除標準為P=0.10。擬合結(jié)果顯示犬的位置、犬主房屋條件被納入多因素回歸模型，見表3。

表3 犬感染利什曼原蟲影響因素的Logistic多因素分析

3 討 論

文縣和迭部縣是甘肅黑熱病主要流行區(qū)，兩縣地處甘肅南部，植被豐富，氣候溫和，是旅游、商業(yè)貿(mào)易的重要通道和目的地。黑熱病傳播季節(jié)外來人員多，流動頻繁，健康人感染風險很大。因此了解犬源型黑熱病流行區(qū)犬感染的相關(guān)危險因素，有助于減少黑熱病的感染和傳播。

調(diào)查結(jié)果顯示在村莊邊緣位置的犬感染利什曼原蟲的風險較高，這可能與當?shù)孛浇榘昨攘曅杂嘘P(guān)。甘肅本地的黑熱病傳播媒介中華白蛉具有野棲習性[11-12]，它們主要棲息于野外洞穴，黃昏時飛入村莊內(nèi)，吸血后再飛回野外。由于白蛉有飛行距離短的特點，使得分布在村莊邊緣的犬更容易被白蛉叮咬從而增加感染風險。本調(diào)查還發(fā)現(xiàn)房屋條件較差的土坯/石片墻壁家庭的犬感染率更高，其感染風險是磚混/粉刷墻壁居住條件犬的2.5倍，分析原因主要是土坯/石片墻壁表面粗糙、遍布孔洞縫隙，為白蛉躲藏和棲息提供良好的場所，增加了白蛉叮咬犬的機會。本次調(diào)查未發(fā)現(xiàn)陽性犬與周邊環(huán)境有無較多綠植之間存在相關(guān)性，與國外研究證明綠植豐富的環(huán)境會增加犬利什曼病感染風險的結(jié)果不同[13]，可能與研究地點植物多為果樹，村民使用農(nóng)藥噴灑果樹有關(guān)。本次調(diào)查雖然發(fā)現(xiàn)陽性犬主對黑熱病防治知識的知曉率偏低，但未發(fā)現(xiàn)犬主防治知識知曉率與犬陽性率有關(guān)。

本次調(diào)查的缺憾是沒有對媒介白蛉開展密度調(diào)查，但根據(jù)熊光華研究結(jié)果，在甘肅南部白蛉密度隨著海拔的增高而遞減[14]，低溫能夠抑制白蛉卵發(fā)育，溫度對白蛉發(fā)育生長和種群分布有很大影響[15]。根據(jù)以上研究結(jié)果，文縣調(diào)查點海拔(1 400 m)較迭部縣調(diào)查點海拔(1 680 m)低，年均溫度(5～15 ℃)較迭部縣調(diào)查點(8～11 ℃)高，更有利于中華白蛉孳生繁育。1999年甘肅省疾控中心曾在迭部洛大村采用燈誘法在居民家開展媒介調(diào)查，中華白蛉密度0.5只/h。2006年，顧燈安等在文縣中寨采用同樣方法開展媒介調(diào)查，最多捕獲中華白蛉112只，密度14只/h[16]。以上研究資料均表明文縣白蛉數(shù)量比迭部縣多，密度高，因此這可能是文縣調(diào)查現(xiàn)場犬PCR檢測陽性率較迭部縣高的主要原因。

綜上所述，分布在村邊緣、犬居住環(huán)境為土坯/石片墻壁是影響犬感染利什曼原蟲的因素，這些因素充分說明環(huán)境因素在利什曼原蟲感染過程中的重要性。針對以上因素，在甘肅省犬源型黑熱病流行的地區(qū)，要向當?shù)厝罕娦麄骱跓岵》乐浦R；督促居住在村邊緣的養(yǎng)犬戶經(jīng)常用殺蟲劑對犬舍和周邊墻壁進行噴灑，重點噴灑土坯/石片墻壁，達到驅(qū)避和殺滅白蛉，減少白蛉對犬叮咬的目的；研究表明夏秋季晚間戶外活動頻率高的居民受感染風險增加[17]，針對外來流動人員要開展預防白蛉叮咬的健康教育，讓流動人員夏季晚間外出要穿長袖衣服，涂抹防蚊驅(qū)避劑，盡量減少戶外活動以避免白蛉叮咬，減少黑熱病的傳播。

利益沖突：無