陳 俊

（羅山縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河南 信陽 464200）

高致病性禽流感是由A型流感病毒引起的禽類的一種急性、烈性、高度致死性傳染病。對(duì)于養(yǎng)禽業(yè)來說幾乎是毀滅性的，危害巨大。目前，由H5、H7亞型毒株引起的禽流感稱為高致病性禽流感，主要特征是突然死亡，頭部和面部水腫，流淚，呼吸困難，經(jīng)常甩頭，常發(fā)出“咯咯”聲，腳鱗出血，雞冠和肉髯發(fā)紺，有的病雞驚厥、打滾或轉(zhuǎn)圈，發(fā)病率和死亡率可達(dá)100%。高致病性禽流感已被我國納入強(qiáng)制免疫計(jì)劃，并要求采用重組禽流感病毒（H5+H7）三價(jià)滅活疫苗（H5N1Re—11株和Re—12株，H7N9H7—Re3株）春秋兩季集中強(qiáng)制免疫。為了解羅山縣高致病性禽流感免疫效果，開展疫苗免疫效果評(píng)估工作，及時(shí)掌握羅山縣高致病性禽流感防控動(dòng)態(tài)，2020年10月，羅山縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心組織開展免疫抗體檢測(cè)，以便為羅山縣高致病性禽流感監(jiān)測(cè)預(yù)警提供參考。

1 抽樣檢測(cè)地點(diǎn)

選取高店、楠桿、周黨、子路、莽張、朱堂、彭新、東卜、廟仙、靈山等10個(gè)家禽養(yǎng)殖大鄉(xiāng)作為檢測(cè)調(diào)查地點(diǎn)。

2 材料與方法

2.1 采樣材料

采樣箱、5ml采血器、酒精棉球、干棉球、記號(hào)筆、采樣單、試管架、密封袋等。

2.2 檢測(cè)材料

離心機(jī)、離心管、移液槽、移液器、滴頭、1%紅細(xì)胞、一次性微孔板、高致病性禽流感血凝抑制試驗(yàn)抗原、PBS液等。

2.3 采樣方法

結(jié)合羅山縣春秋兩季強(qiáng)制免疫實(shí)際情況，對(duì)10個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)在集中免疫21d后進(jìn)行了抽樣抗體檢測(cè)，每個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)隨機(jī)抽取3個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)、1個(gè)散養(yǎng)戶和1個(gè)活禽交易市場(chǎng)。采取簡(jiǎn)單隨機(jī)抽樣方式，每個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)和交易市場(chǎng)各抽取30份血樣，散養(yǎng)戶每戶抽取10份血樣。此次監(jiān)測(cè)共采集樣品分布如下：30個(gè)家禽養(yǎng)殖場(chǎng)900份，10個(gè)散養(yǎng)戶100份，10個(gè)活禽交易市場(chǎng)300份，在50個(gè)場(chǎng)群中共采集樣品1300份。所有樣品嚴(yán)格按照操作規(guī)程采取翅靜脈采集血液，每只1.5～2ml，以3000rpm離心5min，析出血清，完善編號(hào)與登記，置于-20℃保存?zhèn)錂z。

2.4 檢測(cè)方法及依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)

嚴(yán)格按照《高致病性禽流感診斷技術(shù)》（GB/T18936-2003）血凝抑制試驗(yàn)（HI）檢測(cè)H5、H7亞型禽流感免疫抗體。判斷標(biāo)準(zhǔn)按照個(gè)體HI抗體效價(jià)≥24免疫合格個(gè)體，群體免疫抗體合格率≥70%為免疫合格群體，H5、H7群體免疫抗體合格率≥70%為免疫合格場(chǎng)群。檢測(cè)試劑禽流感H5亞型病毒（Re-11株）、（Re-12株）血凝抑制試驗(yàn)抗原，批號(hào)均為：2019005，H7N9（H7-Re3株）抗原批號(hào)：20200901，以上三種抗原試劑均為哈爾濱維科生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品。

3 結(jié)果與分析

在50個(gè)家禽場(chǎng)群中，使用了重組禽流感病毒（H5+H7）三價(jià)滅活疫苗的有38個(gè)場(chǎng)群，占場(chǎng)群數(shù)量的76%，使用其他禽流感類型疫苗或未免疫的有12個(gè)場(chǎng)群。在50個(gè)場(chǎng)群的1300份檢測(cè)樣品中，H5亞型病毒（Re-11株）個(gè)體抗體合格率為84.1%（1093/1300）；H5亞型病毒（Re-12株）個(gè)體抗體免疫合格率為83.8%（1090/1300）；H7N9（H7-Re3株）個(gè)體抗體免疫合格率為82.5%（1072/1300）。在采用（H5+H7）三價(jià)滅活疫苗免疫的38個(gè)場(chǎng)群中（包括30個(gè)家禽養(yǎng)殖場(chǎng)、7個(gè)活禽交易市場(chǎng)、1個(gè)散養(yǎng)戶共1120份血樣），H5亞型病毒（Re-11株）個(gè)體抗體合格率為90.3%（1011/1120）；H5亞型病毒（Re-12株）個(gè)體抗體免疫合格率為89.6%（1004/1120）；H7N9（H7-Re3株）個(gè)體抗體免疫合格率為89.5%（1002/1120）。通過檢測(cè)結(jié)果顯示，對(duì)于使用重組禽流感病毒（H5+H7）三價(jià)滅活疫苗的養(yǎng)殖場(chǎng)群體合格率和個(gè)體合格率均高于使用其他疫苗和未免疫的場(chǎng)群，且差異較大（具體比率詳見表1至表3）。

表1 免疫場(chǎng)群比例

表2 50個(gè)場(chǎng)群樣品抗體合格率

表3 38個(gè)免疫場(chǎng)群樣品抗體合格率

在50個(gè)場(chǎng)群的1300份樣品中，雞樣品為1117份，鴨樣品為155份，鵝樣品為28份。其中雞、鴨、鵝H5亞型病毒（Re-11株）個(gè)體抗體合格率分別為85.6%（956/1117）、78.7%（122/155）、53.6%（15/28）；H5亞型病毒（Re-12株）個(gè)體抗體免疫合格率分別為84.9%（948/1117）、83.2%（129/155）、46.4%（13/28）；H7N9（H7-Re3株）個(gè)體抗體免疫合格率為83.2%（929/1117）、84.5%（131/155）、42.9%（12/28）。結(jié)果顯示，雞、鴨、鵝個(gè)體抗體合格率依次降低，雞、鴨抗體合格率明顯高于鵝。（個(gè)體免疫合格率見下表4）

表4 雞、鴨、鵝個(gè)體免疫合格率

4 小結(jié)與討論

此次共抽查羅山縣10個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)50個(gè)家禽養(yǎng)殖場(chǎng)，通過血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果表明，家禽養(yǎng)殖場(chǎng)使用重組禽流感病毒（H5+H7）三價(jià)滅活疫苗完全可以達(dá)到免疫保護(hù)水平，而且效果顯著。羅山縣大多數(shù)鄉(xiāng)鎮(zhèn)普遍免疫較好，H5、H7亞型場(chǎng)群合格率和個(gè)體合格率均高于70%，僅個(gè)別場(chǎng)、戶未檢測(cè)到H7亞型禽流感免疫抗體。

從此次檢測(cè)數(shù)據(jù)和調(diào)查情況來看，羅山縣秋防場(chǎng)群免疫密度未達(dá)到100%。究其原因是個(gè)別家禽養(yǎng)殖戶對(duì)該病重視程度不夠，防控力度不強(qiáng)，有一些養(yǎng)殖場(chǎng)、戶沒有替換使用（H5+H7）三價(jià)滅活疫苗，甚至個(gè)別散養(yǎng)戶根本就未免疫。建議畜牧部門加大宣傳力度，普及家禽養(yǎng)殖場(chǎng)、戶嚴(yán)格按照免疫程序，使用重組禽流感病毒（H5+H7）三價(jià)滅活疫苗進(jìn)行春秋兩季集中強(qiáng)制免疫，同時(shí)做好抽樣檢測(cè)工作，對(duì)免疫不合格的場(chǎng)群及時(shí)進(jìn)行補(bǔ)免，確保羅山縣家禽養(yǎng)殖業(yè)健康穩(wěn)定發(fā)展。