羅佳佳，曹麗坤，楊 柳，謝 珍，謝乃亮，彭契六△

廣西國(guó)際壯醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣西南寧 530201

尿有形成分分析作為臨床實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目，常用于泌尿系統(tǒng)疾病及腎臟疾病的輔助診斷、鑒別診斷、藥物療效及預(yù)后判斷等，對(duì)健康人群的篩查也起到一定的作用[1]。傳統(tǒng)尿有形成分檢測(cè)手段操作繁雜、耗時(shí)長(zhǎng)、工作效率低、誤差大，不易于室內(nèi)質(zhì)量控制。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，尿有形成分分析儀相繼進(jìn)入醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室，尿液的檢測(cè)分析實(shí)現(xiàn)了自動(dòng)化、快速化、標(biāo)準(zhǔn)化。ISO 15189規(guī)定了尿有形成分分析儀性能驗(yàn)證內(nèi)容包括精密度、攜帶污染率及臨床可報(bào)告范圍[2]。儀器的性能驗(yàn)證及質(zhì)量監(jiān)督控制是實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證的重點(diǎn)[3-4]，為了確保報(bào)告的準(zhǔn)確性，更好地服務(wù)于臨床，本文按照ISO 15189及相關(guān)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)Mejer-1800尿有形成分分析儀的檢出限、穩(wěn)定性、精密度、符合率、假陰性率、攜帶污染率、線性范圍、生物參考區(qū)間等進(jìn)行驗(yàn)證，進(jìn)而評(píng)價(jià)本實(shí)驗(yàn)室Mejer-1800尿有形成分分析儀是否適用于臨床。

1 材料與方法

1.1材料 本次實(shí)驗(yàn)所用標(biāo)本均取自2020年2—5月本院門診和住院及體檢健康者隨機(jī)尿液標(biāo)本，標(biāo)本性狀均符合相應(yīng)實(shí)驗(yàn)要求。

1.2儀器及試劑 實(shí)驗(yàn)儀器為深圳美僑醫(yī)療科技有限公司生產(chǎn)的Mejer-1800尿有形成分分析儀，質(zhì)量控制品由美國(guó)伯樂試劑公司提供。

1.3方法

1.3.1檢出限 選取5個(gè)/微升的紅細(xì)胞(RBC)和白細(xì)胞(WBC)標(biāo)本，重復(fù)檢測(cè)20次，如果90%及以上的檢測(cè)結(jié)果大于0個(gè)/微升，則認(rèn)為驗(yàn)證通過。

1.3.2穩(wěn)定性 將陽性質(zhì)控配制成水平約為200個(gè)/微升的標(biāo)本，混勻后采取手動(dòng)進(jìn)樣模式分別在開機(jī)預(yù)熱后、4 h、8 h重復(fù)檢測(cè)10次，計(jì)算3個(gè)不同時(shí)間段的變異系數(shù)(CV)，CV≤15%即可認(rèn)為驗(yàn)證通過。

1.3.4符合率 單項(xiàng)結(jié)果與人工顯微鏡鏡檢結(jié)果的符合率。選取150份臨床尿液標(biāo)本，分別進(jìn)行Mejer-1800尿有形成分分析儀檢測(cè)和人工顯微鏡鏡檢，其中RBC病理標(biāo)本量不得低于90份，WBC病理標(biāo)本量不得低于90份，管型(CAST)病理標(biāo)本量不得低于30份，根據(jù)公式C=(t1+t2)+/t總×100%計(jì)算符合率，C為各有形成分符合率，人工顯微鏡鏡檢結(jié)果和Mejer-1800尿有形成分分析儀檢測(cè)均為陽性的標(biāo)本數(shù)記為t1，人工顯微鏡鏡檢結(jié)果和Mejer-1800尿有形成分分析儀檢測(cè)結(jié)果均為陰性的標(biāo)本數(shù)記為t2，總標(biāo)本數(shù)為t總。人工顯微鏡鏡檢結(jié)果陰性、陽性判定標(biāo)準(zhǔn)為紅細(xì)胞3個(gè)/HPF、白細(xì)胞5個(gè)/HPF、管型1個(gè)/LPF。

1.3.5假陰性率 對(duì)至少200份隨機(jī)選取的臨床尿液標(biāo)本進(jìn)行Mejer-1800尿有形成分檢測(cè)及人工顯微鏡鏡檢，以人工顯微鏡鏡檢結(jié)果為“金標(biāo)準(zhǔn)”，根據(jù)公式F=t0/t總×100%計(jì)算RBC、WBC和CAST的假陰性率，假陰性率記為F，RBC、WBC和CAST Mejer-1800尿有形成分分析儀檢測(cè)結(jié)果為陰性但人工顯微鏡鏡檢結(jié)果為陽性的標(biāo)本數(shù)量記為t0，總標(biāo)本量記為t總，假陰性率≤3%即可認(rèn)為驗(yàn)證符合要求。

1.3.6攜帶污染率 取臨床高濃度尿液標(biāo)本(RBC≥5 000個(gè)/微升、WBC≥5 000個(gè)/微升)，混勻后在Mejer-1800尿有形成分分析儀上采用手動(dòng)進(jìn)樣模式連續(xù)檢查3次，測(cè)定值分別為i1、i2、i3；再取低濃度尿液樣本(生理鹽水)采用手動(dòng)進(jìn)樣模式連續(xù)測(cè)定3次，測(cè)定值分別為j1、j2、j3，根據(jù)公式計(jì)算攜帶污染率T=(i1-i3)/(i3- j3)×100%，攜帶污染率≤0.05%即可認(rèn)為驗(yàn)證通過。

1.3.7生物參考區(qū)間驗(yàn)證 本實(shí)驗(yàn)室以美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)認(rèn)可的《室間內(nèi)確定、建立、驗(yàn)證生物參考區(qū)間：EP28-A3C》[4]文件進(jìn)行生物參考區(qū)間驗(yàn)證。選取20份參考個(gè)體的新鮮尿液標(biāo)本進(jìn)行儀器檢測(cè)，將檢測(cè)結(jié)果與本實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)用的參考區(qū)間作比較。評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：測(cè)定值至少90%落在參考區(qū)間，驗(yàn)證通過。

1.3.8線性范圍 選取高濃度臨床新鮮尿液標(biāo)本，要求細(xì)胞水平接近分析儀的檢測(cè)范圍上限(WBC接近3 000個(gè)/微升，RBC接近5 000個(gè)/微升)，兩份尿液標(biāo)本按一定比例量(原尿液∶生理鹽水)作1∶4、1∶16、1∶32、1∶128、1∶256的倍比稀釋，充分混勻后每個(gè)稀釋度重復(fù)測(cè)定3次，計(jì)算均值，即為各稀釋比例尿液標(biāo)本的實(shí)測(cè)值，理論值為原尿除以稀釋倍數(shù)，將各稀釋比例尿液標(biāo)本的實(shí)測(cè)值與理論值進(jìn)行比較，計(jì)算Y=aX+b。評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：0.95

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel2007進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述和直線回歸分析。

2 結(jié) 果

2.1檢出限 稀釋后的RBC和WBC標(biāo)本20次檢測(cè)中19次(95%)檢測(cè)結(jié)果均大于0個(gè)/微升，驗(yàn)證通過。

2.2穩(wěn)定性 在開機(jī)預(yù)熱后、4 h、8 h將配制成功的標(biāo)本重復(fù)檢測(cè)10次，計(jì)算所有數(shù)據(jù)均數(shù)為184.7，標(biāo)準(zhǔn)差為25.42，CV為13.76%，按照CV≤15%為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，Mejer-1800尿有形成分分析儀穩(wěn)定性驗(yàn)證通過。

2.3精密度 RBC和WBC的批內(nèi)精密度均通過驗(yàn)證，見表1。日間精密度符合評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，見表2。

表1 Mejer-1800各參數(shù)批內(nèi)精密度驗(yàn)證結(jié)果

表2 Mejer-1800日間精密度驗(yàn)證結(jié)果

2.4符合率 RBC、WBC和CAST的符合率驗(yàn)證結(jié)果見表3。

表3 Mejer-1800各參數(shù)符合率驗(yàn)證結(jié)果

2.5假陰性率 RBC、WBC和CAST的假陰性率驗(yàn)證結(jié)果見表4。

表4 Mejer-1800各參數(shù)假陰性率驗(yàn)證結(jié)果

2.6攜帶污染率 RBC和WBC的攜帶污染率驗(yàn)證結(jié)果見表5。

表5 Mejer-1800各參數(shù)攜帶污染率驗(yàn)證結(jié)果

2.7生物參考區(qū)間驗(yàn)證 20份參考個(gè)體的尿液標(biāo)本RBC檢測(cè)結(jié)果有18份(90%)落在參考區(qū)間內(nèi)，20份參考個(gè)體的尿液標(biāo)本W(wǎng)BC檢測(cè)結(jié)果有19份(95%)落在參考區(qū)間內(nèi)，表明該參考區(qū)間適用于本實(shí)驗(yàn)室。

2.8線性范圍 將倍比稀釋標(biāo)本連續(xù)檢測(cè)3次，均值與理論值比較，得出RBC線性回歸方程為Y=0.964 7X+94.371 0，見圖1。

圖1 線性范圍

3 討 論

實(shí)驗(yàn)室尿有形成分分析主要依靠人工顯微鏡檢查，人工顯微鏡檢查耗時(shí)長(zhǎng)且無法進(jìn)行大批量尿液標(biāo)本的檢測(cè)[5]。近年來，尿有形成分的檢測(cè)手段隨科技發(fā)展不斷更新，尿有形成分分析儀已普遍應(yīng)用于臨床實(shí)驗(yàn)室中，其分析速度快，多項(xiàng)目參數(shù)同時(shí)檢測(cè)，標(biāo)準(zhǔn)化操作易于進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量控制[6-7]。尿有形成分是尿液分析的重要組成部分，其分析儀的性能驗(yàn)證就顯得尤為重要。本實(shí)驗(yàn)按照ISO 15189的要求，同時(shí)結(jié)合相關(guān)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)本實(shí)驗(yàn)室中Mejer-1800尿有形成分分析儀的檢出限、穩(wěn)定性、精密度、符合率、假陰性率、攜帶污染率及臨床可報(bào)告范圍等指標(biāo)進(jìn)行驗(yàn)證。并確認(rèn)其生物參考區(qū)間是否適用于本實(shí)驗(yàn)室。

Mejer-1800尿有形成分分析儀檢出限驗(yàn)證中，RBC和WBC標(biāo)本20次檢測(cè)中19次結(jié)果均大于0個(gè)/微升，驗(yàn)證通過，和廠家給出的檢出限范圍一致。開機(jī)預(yù)熱后、4 h、8 h對(duì)配制的標(biāo)本重復(fù)檢測(cè)10次，計(jì)算所有數(shù)后得出CV為13.76%，按照CV≤15%為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，Mejer-1800尿有形成分分析儀穩(wěn)定性驗(yàn)證通過，提示儀器長(zhǎng)時(shí)間運(yùn)行對(duì)穩(wěn)定性有一定的影響，為保證結(jié)果的準(zhǔn)確性，Mejer-1800尿有形成分分析儀每日應(yīng)關(guān)機(jī)并定期保養(yǎng)。Mejer-1800尿有形成分分析儀RBC和WBC的精密度性能良好，因采用的伯樂質(zhì)控品只有WBC、RBC 2種有形成分，所以本研究只驗(yàn)證了WBC和RBC 2項(xiàng)參數(shù)，研究顯示該分析儀精密度符合廠家要求，且檢測(cè)系統(tǒng)重復(fù)性較好。本研究中攜帶污染率、線性范圍也符合Mejer-1800尿有形成分分析儀的儀器要求。生物參考區(qū)間的驗(yàn)證研究中，20份參考個(gè)體的尿液標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果中，RBC有18份落在參考區(qū)間內(nèi)， WBC檢測(cè)結(jié)果有19份落在參考區(qū)間內(nèi)，表明該生物參考區(qū)間適用于本實(shí)驗(yàn)室。按照相關(guān)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)需要對(duì)待測(cè)儀器的識(shí)別率驗(yàn)證，本研究對(duì)單項(xiàng)參數(shù)(RBC、WBC、CAST)與人工顯微鏡鏡檢進(jìn)行比較，結(jié)果表明各項(xiàng)參數(shù)符合率均驗(yàn)證合格；RBC假陰性率為2.5%，WBC假陰性率為1.0%，CAST假陰性率為1.0%，各參數(shù)假陰性率驗(yàn)證合格，表明Mejer-1800尿有形成分分析儀識(shí)別率符合要求。

另外，有文獻(xiàn)指出，伯樂質(zhì)控品影響精密度的檢測(cè)[8]，由于伯樂質(zhì)控品包含RBC、WBC及結(jié)晶等多種成分，在高濃度水平檢測(cè)分析時(shí)，儀器會(huì)把部分RBC歸入WBC欄或者未能識(shí)別分類，CV過大，需要人工修正，主觀因素導(dǎo)致驗(yàn)證過程中不確定度的增加，進(jìn)而影響精密度的檢測(cè)。另外由于質(zhì)控品的局限性，在后續(xù)研究中可加入其他參數(shù)如CAST的精密度驗(yàn)證。此外，Mejer-1800尿有形成分分析儀是依據(jù)尿液中細(xì)胞體積、核染色及顆粒大小進(jìn)行形態(tài)識(shí)別，干擾因素不可避免。在實(shí)際工作中，Mejer-1800尿有形成分分析儀易把酵母菌識(shí)別成RBC，同時(shí)也存在把黏液絲、上皮細(xì)胞等誤認(rèn)為透明管型的現(xiàn)象；另外，當(dāng)尿液中磷酸鹽結(jié)晶增多時(shí)，RBC檢測(cè)會(huì)出現(xiàn)假陰性的情況，并且儀器常會(huì)把附著有磷酸鹽結(jié)晶的黏液絲誤認(rèn)為是顆粒管型；其次，Mejer-1800尿有形成分分析儀結(jié)晶圖譜尚未完善，目前只能識(shí)別草酸鈣結(jié)晶，對(duì)臨床常出現(xiàn)的尿酸結(jié)晶等暫無識(shí)別能力。因此，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況嚴(yán)格制訂尿有形成分分析儀的復(fù)檢規(guī)則，將分析儀檢測(cè)和人工顯微鏡鏡檢相結(jié)合，提高復(fù)檢率，降低假陰性率，確保尿液結(jié)果的準(zhǔn)確性[9]。

綜上所述，本研究中Mejer-1800尿有形成分分析儀的檢出限、穩(wěn)定性、精密度、攜帶污染率、線性范圍及生物參考區(qū)間等符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求，必要時(shí)將尿有形成分分析儀和人工顯微鏡鏡檢結(jié)合，可以為臨床提供更好的服務(wù)。