王雪峰,蒙 艷,秋 霞
肺炎克雷伯菌屬于兼性厭氧的條件致病菌,是醫(yī)院感染的主要病原菌之一,多發(fā)生于住院的體弱患者,尤其是ICU患者[1]。肺炎克雷伯菌可引起患者多部位發(fā)生感染,肺部最常見。因肺炎克雷伯菌對多種抗生素耐藥,所以感染者預(yù)后較差,病死率高[1-2],已成為影響患者生命安全的重要因素。因此,預(yù)防肺炎克雷伯菌感染、早期實施治療、準(zhǔn)確評估患者預(yù)后顯得尤為重要。濾泡輔助性T細(xì)胞(T follicular helper cell,Tfh)是一類位于淋巴濾泡的CD4+T細(xì)胞亞群,高表達(dá)趨化因子受體CXCR5,參與多種免疫與感染相關(guān)疾病發(fā)生過程[3-4]。既往研究顯示,肺炎克雷伯菌等病原菌感染與體液免疫有關(guān),而CD4+CXCR5+Tfh可參與免疫應(yīng)答[5-6]。因此,推測CD4+CXCR5+Tfh可能在肺炎克雷伯菌入侵人體后的疾病進展中發(fā)揮重要作用。本研究擬通過檢測147例患者外周血CD4+CXCR5+Tfh水平,分析其與肺炎克雷伯菌感染的相關(guān)性及對患者預(yù)后的影響,以期為肺炎克雷伯菌感染者預(yù)后改善提供參考。
1.1 對象 選取2017年7月—2019年5月于西寧市第二人民醫(yī)院ICU住院治療的147例患者為研究對象。患者入院時急性生理學(xué)與慢性健康狀況評分Ⅱ(acute physiology and chronic health evaluation Ⅱ,APACHE Ⅱ)均為5~12分(APACHEⅡ計算出急性生理學(xué)評分、年齡調(diào)整、慢性健康調(diào)整數(shù)據(jù),將數(shù)據(jù)相加獲得APACHE Ⅱ總評分,當(dāng)評分在5~15分之間為重癥,評分在16~35分之間為危重癥,評分>35分為極危重癥)[7]。根據(jù)患者入院后是否出現(xiàn)肺炎克雷伯菌感染將其分為感染組(69例)和未感染組(78例)。根據(jù)感染組患者1年內(nèi)生存情況,將其分為生存組(40例)和死亡組(29例)。
納入標(biāo)準(zhǔn):①肺炎克雷伯菌感染者均通過細(xì)菌培養(yǎng)確診[8];②病例資料齊全。排除標(biāo)準(zhǔn):①近1周內(nèi)使用抗炎藥物、免疫抑制劑者;②伴有其他血液系統(tǒng)及自身免疫疾病者;③妊娠期或哺乳期婦女。本研究經(jīng)我院臨床研究倫理委員會批準(zhǔn),所有研究對象均為自愿參加。
1.2 研究方法
1.2.1 外周血采集及保存 采集患者入院第2 d晨起空腹外周靜脈血,密度梯度離心法獲取單個核細(xì)胞,液氮冷凍保存待測。
1.2.2 CD4+CXCR5+Tfh水平測定 采用流式細(xì)胞術(shù)檢測外周血CD4+CXCR5+Tfh水平。用淋巴細(xì)胞分離液將外周血單個核細(xì)胞分離后放入流式管,加入2 ml PBS緩沖液,1500 r/min離心5 min,棄上清,重復(fù)3次,控制細(xì)胞濃度在5×105個/ml左右,向流式管中加入5 μl CD4抗體(貨號:251723,購自深圳市豪地華拓生物科技有限公司)和1.5 μl CXCR5抗體(貨號:H00000643-D01P,購自上海科敏生物科技有限公司)后混勻,室溫孵育30 min,洗滌后重懸細(xì)胞,使用流式細(xì)胞儀(型號:BDFACSAria,購自美國BD公司)檢測處理好的標(biāo)本,每份標(biāo)本至少獲取10 000個細(xì)胞進行分析,記錄CD4+CXCR5+Tfh占CD4+T細(xì)胞的百分比。
1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 利用SPSS 23.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析,計量資料符合正態(tài)分布,以±s表示,2組間比較行成組t檢驗。計數(shù)資料以例(%)表示,組間比較行四格表χ2檢驗。采用多因素Logistic回歸分析肺炎克雷伯菌感染者預(yù)后的影響因素。以P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
2.1 2組外周血CD4+CXCR5+Tfh水平比較 感染組外周血CD4+CXCR5+Tfh水平為(17.62±2.13)%,顯著高于未感染組的(5.86±0.91)%,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表1。
表1 感染組與未感染組外周血CD4+CXCR5+Tfh水平比較(±s)Table 1 Comparison of CD4+CXCR5+Tfh levels in peripheral blood between infection group and non-infection group(±s)
表1 感染組與未感染組外周血CD4+CXCR5+Tfh水平比較(±s)Table 1 Comparison of CD4+CXCR5+Tfh levels in peripheral blood between infection group and non-infection group(±s)
組別 例數(shù) CD4+CXCR5+Tfh(%)未感染組 78 5.86±0.91感染組 69 17.62±2.13 t值 44.409 P值 0.000
2.2 肺炎克雷伯菌感染的單因素分析 感染組的住院時間、入住ICU時間、入住ICU時APACHE II評分、機械通氣時間及心血管疾病、多器官功能障礙綜合征(multiple organ dysfunction syndrome,MODS)、接受手術(shù)、惡性腫瘤患者的比例均高于未感染組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05);2組年齡、性別、入院病因及慢性腎功能衰竭患者比例比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05),見表2。
表2 肺炎克雷伯菌感染的單因素分析Table 2 Univariate analysis on Klebsiella pneumoniae infection
2.3 2組預(yù)后情況比較 分析感染組與未感染組患者1年內(nèi)生存情況,結(jié)果顯示,感染組1年病死率為42.03%(29/69),高于未感染組的19.23%(15/78),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=9.073,P=0.003)。
2.4 肺炎克雷伯菌感染者預(yù)后的單因素分析 感染組中,死亡患者外周血CD4+CXCR5+Tfh水平、住院時間、入住ICU時間、入住ICU時APACHE II評分、機械通氣時間及碳青霉烯類耐藥、慢性腎功能衰竭、心血管疾病、MODS、接受手術(shù)、惡性腫瘤患者比例均高于生存患者,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05);此外,死亡患者與生存患者年齡、性別、入院病因比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05),見表3。
表3 肺炎克雷伯菌感染者預(yù)后的單因素分析Table 3 Univariate analysis on prognosis of patients with Klebsiella pneumoniae infection
2.5 肺炎克雷伯菌感染者預(yù)后的多因素Logistic回歸分析 結(jié)合既往文獻[9]進行變量篩選,將慢性腎功能衰竭、心血管疾病、住院時間排除在模型外。將肺炎克雷伯菌感染者是否死亡作為因變量,以CD4+CXCR5+Tfh、是否碳青霉烯類耐藥、是否出現(xiàn)MODS、是否接受手術(shù)、是否有惡性腫瘤、入住ICU時間、入住ICU時APACHE II評分、機械通氣時間作為自變量進行Logistic回歸分析,結(jié)果顯示CD4+CXCR5+Tfh、碳青霉烯類耐藥、入住ICU時APACHE II評分是影響肺炎克雷伯菌感染者死亡的獨立危險因素(P均<0.05),見表4。
表4 肺炎克雷伯菌感染者預(yù)后的多因素Logistic回歸分析Table 4 Multivariate Logistic regression analysis on prognosis of patients with Klebsiella pneumoniae infection
肺炎克雷伯菌是一種腸桿菌科革蘭陰性桿菌,可引起消化道、泌尿道、手術(shù)切口、皮膚軟組織等多部位感染[10-11]。病原體一般可通過患者上呼吸道、霧化器、人工呼吸器及其他侵入式導(dǎo)管進入人體[12]。近年來,隨著肺炎克雷伯菌耐藥性增加,其臨床治療越來越困難,感染者病死率隨之增加[13-14]。Tfh是B細(xì)胞中的一員,其功能異常與免疫系統(tǒng)及多種疾病的發(fā)生有關(guān)[15-16]。研究表明,Tfh是淋巴濾泡趨化因子CXCL13的受體,可被CXCL13趨化,進而募集到淋巴濾泡,最終對B淋巴細(xì)胞增殖與分化產(chǎn)生刺激,形成生發(fā)中心,此外Tfh還可促使免疫球蛋白發(fā)生類別轉(zhuǎn)換[17-18]。因此,探究CD4+CXCR5+Tfh與肺炎克雷伯菌感染與預(yù)后的關(guān)系,對預(yù)防患者肺炎克雷伯菌感染、降低患者病死率具有重要意義。
本研究結(jié)果顯示,肺炎克雷伯菌感染組外周血CD4+CXCR5+Tfh水平顯著高于未感染組,與申衛(wèi)紅等[19]研究結(jié)果一致。上述研究結(jié)果提示,臨床研究中外周血CD4+CXCR5+Tfh水平的異常升高對評估肺炎克雷伯菌感染有重要意義,早期評估感染發(fā)生風(fēng)險可有效降低感染率。此外,本研究發(fā)現(xiàn),肺炎克雷伯菌感染組中死亡患者外周血CD4+CXCR5+Tfh水平顯著高于生存患者,進一步表明CD4+CXCR5+Tfh是肺炎克雷伯菌感染者死亡的獨立危險影響因素,提示CD4+CXCR5+Tfh可能通過異常高表達(dá)在肺炎克雷伯菌感染過程中發(fā)揮重要作用,推測其可能機制為:肺炎克雷伯菌侵入人體后,成纖維細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等炎癥細(xì)胞釋放增多,大量炎性因子產(chǎn)生,CXCL13水平升高,CXCL13趨化Tfh,進而募集到淋巴濾泡,進一步向生發(fā)中心和B淋巴細(xì)胞遷移,促進B淋巴細(xì)胞在生發(fā)中心增殖產(chǎn)生大量的免疫球蛋白,最終參與機體免疫應(yīng)答反應(yīng)。因此,CD4+CXCR5+Tfh水平增加不僅能提示患者發(fā)生感染,而且對評估患者感染程度有重要意義,有利于臨床醫(yī)師及時調(diào)整治療方案。
本研究結(jié)果表明,肺炎克雷伯菌感染及其不良預(yù)后均與患者是否患心血管疾病、是否患MODS、是否接受手術(shù)、是否有惡性腫瘤、住院時間、入住ICU時間、入住ICU時APACHE II評分、機械通氣時間有關(guān),與唐麗玲等[20]研究結(jié)果部分一致。陳菲等[21]及田艷麗等[22]研究結(jié)果顯示,肺炎克雷伯菌耐藥性嚴(yán)重,其中耐碳青霉烯類肺炎克雷伯菌引起的醫(yī)院感染已引起重視。本研究多因素Logistic回歸分析結(jié)果表明,碳青霉烯類耐藥、入住ICU時APACHE II評分也是肺炎克雷伯菌感染者死亡的獨立危險影響因素。上述結(jié)果提示,臨床要對伴有基礎(chǔ)疾病、接受過手術(shù)治療、住院時間較長、入住ICU時APACHE II高評分等患者予以重視,密切關(guān)注其是否存在感染情況,同時要嚴(yán)格掌握碳青霉烯類等藥物的使用指征,必要時可與抗生素聯(lián)合使用,降低耐藥率和病死率。本研究存在樣本量偏小、因素分析不全面等不足,今后須進一步增大樣本量、增加時間跨度、納入更多影響因素進行深入分析。
綜上所述,外周血CD4+CXCR5+Tfh水平在肺炎克雷伯菌感染者中顯著升高,CD4+CXCR5+Tfh可能通過參與機體免疫應(yīng)答影響感染者的預(yù)后。檢測CD4+CXCR5+Tfh水平不僅對判斷感染者的免疫狀態(tài)有重要意義,也可為肺炎克雷伯菌感染者治療提供依據(jù)。