王 鵬

（浙江國邦藥業(yè)有限公司 浙江·紹興 312369）

膠囊是臨床中常用的固體劑類型，膠囊實(shí)際由兩部分組成，分別是膠囊外衣和內(nèi)部填充物，內(nèi)部填充物為藥物和輔助填充物的混合物，其中內(nèi)部填充物是膠囊藥理活性的來源，膠囊外衣則是膠囊制劑的外部包裝物，一般不具備藥理作用，是為了維持內(nèi)部填充物混合狀態(tài)或?qū)⑺幬锼椭撂囟ú课坏乃幬镙d體。

膠囊外衣通常由明膠和輔助料制作而成，分為帽和體兩部分，內(nèi)部具有一定的容納空間，可以將活性物質(zhì)填充在內(nèi)，內(nèi)部填充物可以為固體、晶體、粉末、藥片、半固體等物質(zhì)。膠囊外衣一般無藥理活性，主要負(fù)責(zé)輸送內(nèi)部活性物質(zhì)，是一種較為穩(wěn)定的、可靠的藥物包裝、藥物載體。一方面，膠囊外衣能夠?qū)⑻囟ㄙ|(zhì)量的活性物質(zhì)容納在內(nèi)，實(shí)現(xiàn)藥品的定量、定容制備，便于藥物的出售和服用，另一方面則是相較于無外衣的藥片、粉末而言，膠囊更容易通過水送服，藥物通過食道的過程中不會(huì)對(duì)患者上消化道產(chǎn)生刺激。此外通過調(diào)整膠囊外衣成分可以控制外衣崩解部位和崩解時(shí)間，從而實(shí)現(xiàn)高效用藥。

大部分藥品對(duì)保存條件有特殊要求，其中避光保存是較為常見的藥物保存條件，因此大部分膠囊在制作時(shí)會(huì)加入人工合成色素成分以提高膠囊的遮光能力，從而避免內(nèi)部活性成分在光照下發(fā)生分解，最大化保留藥效。但膠囊畢竟會(huì)通過口服的方式進(jìn)入人體消化系統(tǒng)，人工色素的少量攝入不會(huì)對(duì)健康造成影響，但大量的攝入可引起代謝不足導(dǎo)致人工色素在人體內(nèi)的堆積，從而對(duì)人體健康造成不利影響。因此我們要做好膠囊外衣人工色素的檢驗(yàn)與測(cè)定工作，完善膠囊的合格檢驗(yàn)與鑒定，實(shí)現(xiàn)藥品安全。

基于上述背景，本文采用高效液相色譜法對(duì)膠囊人工合成色素含量進(jìn)行檢驗(yàn)和測(cè)定，以期為相關(guān)藥物研究、藥品制備和藥品管理工作提供數(shù)據(jù)參考。

1 材料與試劑

1.1 材料

從醫(yī)院藥品庫中抽調(diào)一批藥用明膠空心膠囊外衣為本次研究的研究材料。應(yīng)用于研究前該批空心膠囊均處于正常保存狀態(tài)下，外包裝密封良好，確保研究時(shí)為首次拆封。

1.2 試劑

色素試劑準(zhǔn)備如下：檸檬黃，純度90；誘惑紅，純度83；胭脂紅，純度70；亮藍(lán)，純度97.3；赤蘚紅，純度91.6；莧菜紅，純度93.6；色素試劑均為藥用膠囊人工合成常用色素標(biāo)準(zhǔn)品，試劑均為首次拆封。同時(shí)準(zhǔn)備色譜研究用甲醇。所有試劑均在分析提純后備用。

1.3 儀器設(shè)備

液相色譜儀型號(hào)：SupersilODS-B；色譜柱：4.6mm*250mm（5m）；流動(dòng)相：0.02mmol/L；A相：乙酸銨溶液；B相：甲醇；梯度洗脫：0min，90%A 相、10%B相；4min，80%A相、20%B 相；5min，65%A相、35%B相；15min，2%A相、98%B相；波長：254nm；柱溫：35；流速：1.0ml/min；進(jìn)樣量 10l。

1.4 溶液制備

1.4.1 對(duì)照溶液

對(duì)照品制備，稱取各類型色素試劑樣品5mg，使用10ml容量瓶盛放，加水稀釋至刻度線并搖勻，取上層溶液，加水稀釋成50g/ml的對(duì)照樣品，備用。

1.4.2 供試溶液

精確稱取空心明膠膠囊0.5g，加入10ml清水，使用檸檬酸鈉稀釋為6pH溶液，60℃恒溫水浴。同時(shí)精確稱取2g聚酰胺粉，加入10ml清水調(diào)成粥狀后與水浴樣品進(jìn)行混合，漏斗過濾后69℃溫水沖洗，然后依次使用甲酸甲醇溶液（4:6）進(jìn)行10ml、5ml、5ml沖洗，加入清水調(diào)節(jié)為pH7溶液，再使用乙醇-氨水-水（7:2:1）進(jìn)行洗滌，最后收集清洗液并蒸發(fā)至近干，加入適當(dāng)水振蕩溶解后擴(kuò)容至10ml，呈于容量瓶后搖勻，備用。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 專屬實(shí)驗(yàn)

以水為對(duì)照溶液，掃描對(duì)照溶液進(jìn)行對(duì)比對(duì)照觀察，波長范圍設(shè)定值在200-400nm，直接觀察人工色素對(duì)紫外吸收情況；同時(shí)取10ml對(duì)照溶液和10l明膠溶液進(jìn)行對(duì)比對(duì)照觀察，波長設(shè)定為200-400nm，通過觀察和對(duì)比分析明膠對(duì)色譜測(cè)定結(jié)果的影響。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線建立

取6種不同人工色素對(duì)照溶液分別稀釋為1、5、10、25、50、75、100g/ml的溶液，取10l進(jìn)行液相色譜檢測(cè)，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果建立主藥峰面積與濃度的線性回歸圖像并依據(jù)圖像繪制相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線，其中采用3倍噪聲極限作為標(biāo)準(zhǔn)。

2.3 回收率實(shí)驗(yàn)

回收率=（實(shí)測(cè)量/加入量）*100%。具體操作如下：取適量人工合成色素對(duì)照品按照供試溶液配置方法配置成 1、50、100g/ml溶液，分別于不同濃度取樣品，高效液相色譜檢測(cè)合成色素回收水平。

2.4 精密度實(shí)驗(yàn)

2.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

在精密度實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，分別于配置后0h、12h、24h、48進(jìn)樣，分別進(jìn)行高效液相色譜檢測(cè)，評(píng)價(jià)色素溶液的穩(wěn)定性。

3 結(jié)果

3.1 色譜條件和波長

以水為對(duì)照，掃描常用人工合成色素溶液波長，于200-400nm進(jìn)行掃描，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，本實(shí)驗(yàn)中所選的常用的六種要用人工合成色素在254nm左右的信號(hào)響應(yīng)值最佳，因此研究中色譜柱波長鎖定為254nm。

同時(shí)就所選波長進(jìn)行檢驗(yàn)，取對(duì)照溶液和供試溶液，結(jié)果顯示人工合成色素分離度較高，分離度均在1.5以上，滿足研究所需。

3.2 線性范圍

根據(jù)主藥峰面積和濃度的線性回歸關(guān)系，提示人工合成色素在1-100g/ml內(nèi)線性良好，因此研究色譜柱線性范圍選定為1-100g/ml，同時(shí)就檢出限進(jìn)行觀察，結(jié)果提示人工色素的檢出限為0.05g/ml。

3.3 回收率

根據(jù)回收率實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，分別配置了低中高三種濃度供試溶液，根據(jù)液相色譜儀檢測(cè)結(jié)果，提示三種濃度供試溶液中人工色素的回收率均在99%以上，RSD小于5%，提示該法回收情況良好，符合研究需求。

3.4 精密度檢驗(yàn)

根據(jù)反復(fù)檢驗(yàn)和評(píng)價(jià)，液相色譜儀結(jié)果提示通過高效液相色譜法檢測(cè)膠囊人工色素水平準(zhǔn)確率較高，標(biāo)準(zhǔn)偏差值均在2%以內(nèi)，提示該法測(cè)定膠囊人工色素精密度較高，符合研究需求。

3.5 穩(wěn)定性

分別就3種不同的濃度溶液在不同時(shí)間內(nèi)的穩(wěn)定性進(jìn)行色譜分析，結(jié)果顯示人工合成色素溶液在48h內(nèi)的穩(wěn)定性均較良好，符合研究需求。

3.6 測(cè)定結(jié)果

根據(jù)測(cè)定結(jié)果，明膠空心膠囊中有明顯的色素殘留，各種色素殘留情況如表1所示，其中赤蘚紅是最容易殘留的人工合成色素，莧菜紅則是殘留濃度最高的人工合成色素。

表1：膠囊中不同人工合成色素含量

4 討論

膠囊制劑是臨床中使用頻率最高的藥物類型，膠囊的外衣既是膠囊的包裝物也是保護(hù)膠囊內(nèi)藥物活性的保護(hù)材料，在藥物藥效發(fā)揮、藥物保存中均有著重要作用。我國臨床中所用膠囊大多為明膠膠囊，明膠是一種天然的可食用分子增稠劑，因此口服后無毒副作用，被廣泛應(yīng)用于藥品外衣。但膠囊外衣不僅僅有明膠一種成分，通常還會(huì)添加人工合成色素賦予膠囊顏色以遮蔽光照達(dá)到避光保存藥物的目的。但是人工合成色素中很大一部分并不能被人體吸收或代謝，持續(xù)攝入可對(duì)人體健康造成不利影響，因此膠囊人工色素殘留殘留問題一直是食品藥品監(jiān)督部門關(guān)注的重點(diǎn)。

人工色素屬于化工產(chǎn)品，其是經(jīng)過一系列復(fù)雜的鹵化反應(yīng)、硝化反應(yīng)等一系列郵寄化合反應(yīng)制作而來，其不僅僅能夠?yàn)槭乘幤诽砑宇伾?，還具有表層保護(hù)的功能，是品種最常用的添加劑類型。但是人工合成色素與天然色素相比，其進(jìn)入人體循環(huán)后容易發(fā)生雜質(zhì)殘留，難以被人體吸收和代謝，會(huì)隨著時(shí)間推移逐漸累積，當(dāng)人工合成色素在人體中累積到一定程度時(shí)就會(huì)對(duì)人體正常代謝產(chǎn)生不利影響，長時(shí)間服用還可成為心腦血管疾病的誘發(fā)因素。

本研究旨在通過高效液相色譜法對(duì)膠囊人工合成色素殘留情況進(jìn)行測(cè)定，一方面是檢測(cè)常見藥用空心膠囊色素殘留情況，為膠囊制劑制備和藥品管理工作提供數(shù)據(jù)參考，另一方面則是評(píng)價(jià)高效液相色譜法在膠囊人工合成色素殘留檢測(cè)中的有效性和可靠性，為藥用膠囊人工合成色素檢測(cè)工作提供經(jīng)驗(yàn)參考，以促進(jìn)我國食品藥品監(jiān)督工作質(zhì)量提升。在研究中，應(yīng)用清水、色素對(duì)比液和膠囊供試液進(jìn)行高效色譜分析，在進(jìn)行供試液色譜分析前先就高效液相色譜法對(duì)人工合成色素的監(jiān)測(cè)情況進(jìn)行評(píng)價(jià)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)高效液相色譜法在人工合成色素檢測(cè)中的精確度、回收率、線性范圍、穩(wěn)定性均較好，符合研究需要。最后就空心明膠膠囊的色素殘留進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果提示膠囊色素殘留中赤蘚紅是最容易殘留的人工合成色素，莧菜紅則是殘留濃度最高的人工合成色素。

本研究證明了，高效液相色譜法在藥用膠囊人工合成色素測(cè)定中應(yīng)用效果良好，操作簡單、高效便捷、準(zhǔn)確有效，測(cè)定結(jié)果可信度、準(zhǔn)確度均較高。