庾建中 王靜儀 袁泳锨 黃梓慧 何建芳 李妤玲 梁遠秋

乳腺癌(breast cancer)是起源于乳腺上皮的一種惡性腫瘤［1］。隨著近幾年其發(fā)病率的不斷上升已成為女性群體中發(fā)病率最高的腫瘤,且死亡率也居高不下,嚴重威脅著女性的身心健康［2］。目前,臨床對于乳腺癌治療方案的選擇和預后評估大多取決于乳腺癌的分子分型,包括LuminalA、LuminalB、HER-2 過表達型以及三陰性乳腺癌等亞型［3］。近年來,隨著臨床治療方案的不斷更新,大部分非三陰性乳腺癌均獲得了較為理想的治療效果,但在三陰性乳腺癌的治療中,其臨床效果往往較差,嚴重影響著患者的生存與預后［4］。因此,為三陰性乳腺癌患者尋找更為有效的療效預測標志物及新的治療靶點已成為臨床關注的重要課題。據相關研究顯示,在三陰性乳腺癌患者的腫瘤組織及淋巴細胞中存在高表達的PD-L1［5］,對此,本文就PD-L1 在不同分子分型乳腺癌中的表達及其與病理參數和預后的關系進行分析,以期為乳腺癌患者的臨床診治提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2015 年1 月～2017 年12 月收治的115 例乳腺癌患者作為觀察組,其中三陰性乳腺癌45 例、非三陰性乳腺癌70 例；另選取同期40 例非乳腺癌患者作為對照組。兩組患者的乳腺樣本均經手術切除病理證實。

1.2 納入標準

1.2.1 觀察組 ①組織學分型均為乳腺浸潤性導管癌；②樣本信息完整；③在手術標本獲取前未接受過靶向藥物治療；④有足夠的組織標本可以用于免疫組織化學染色。

1.2.2 對照組 ①組織學分型均為良性病變(乳腺增生病、乳腺纖維腺瘤等)；②樣本信息完整；③有足夠的組織標本可用于免疫組織化學染色。

1.3 檢測方法 采用免疫組織化學染色檢測PD-L1蛋白的表達：通過石蠟包埋將樣本制成切片(4 μm),烤干后給予抗原修復、脫臘、沖洗,隨后滴加相應抗體,并于陰性對照上滴加PBS 緩沖液,放入孵育盒內,室溫孵育50 min 后,按順序將切片逐張采用PBS 緩沖液進行沖洗,并插回玻片架,隨后逐一滴加二抗,于孵育盒中室溫孵育30 min。完畢后,將切片逐一取出,滴加已配好的DAB 顯色液,顯色2～5 min 后通過顯微鏡適時終止顯色,沖洗后給予蘇木素染液復染1 min,隨后進行脫水、透明、封片,在顯微鏡下進行閱片。

依據多個視野范圍中的顯色細胞占比及其染色深淺進行分級計分判斷：①顯色細胞占比：0 分：<5%；1 分：5%～25%；2 分：26%～50%；3 分：51%～75%；4 分：>75%。②染色深淺：0 分：無顯色；1 分：淺黃色；2 分：棕色；3 分：深褐色。若顯色細胞占比與染色深淺計分乘積>1,則表示陽性,若≤1 則表示陰性［6］。

1.4 觀察指標 ①比較兩組患者的PD-L1 陽性表達情況；②比較不同臨床病理特征乳腺癌患者的PD-L1表達情況；③比較不同分子分型乳腺癌患者的生存率。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計分析。計數資料以率(%)表示,采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者的PD-L1 陽性表達情況比較 免疫組織化學染色結果顯示,觀察組三陰性乳腺癌患者的PD-L1 陽性表達率為35.6%(16/45),非三陰性乳腺癌患者的PD-L1 陽性表達率為18.6%(14/70),對照組患者的PD-L1 陽性表達為0。兩組患者的PD-L1 陽性表達率比較,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。其中,三陰性乳腺癌患者的PD-L1 陽性表達率高于非三陰性乳腺癌患者及對照組,非三陰性乳腺癌患者的PD-L1 陽性表達率高于對照組,差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組患者的PD-L1 陽性表達情況比較(n,%)

2.2 不同臨床病理特征乳腺癌患者的PD-L1 表達情況比較 不同分子分型、PR 表達狀態(tài)、陽性淋巴結個數、TNM 分期乳腺癌患者的PD-L1 表達情況比較,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；不同年齡、腫瘤大小、ER表達狀態(tài)乳腺癌患者的PD-L1 表達情況比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 不同臨床病理特征乳腺癌患者的PD-L1 表達情況比較(n)

2.3 不同分子分型乳腺癌患者的生存率比較 不同分子分型乳腺癌患者的生存率比較,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。非三陰性乳腺癌LuminalA 型患者的生存率高于三陰性乳腺癌患者,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 不同分子分型乳腺癌患者的生存率比較(n,%)

3 討論

PD-L1 是程序性死亡蛋白-1(PD-1)的重要配體之一［7］,可結合細胞毒性T 淋巴細胞相關抗原4(CTLA-4)及 B/T-淋巴細胞衰減因子(BTLA)等介導對免疫系統(tǒng)表達抑制信號,具有抑制T 淋巴細胞活性、下調免疫應答等的作用,已成為免疫檢查的重要部分［8-10］。通常情況下,PD-L1 多表達于腫瘤細胞及其相關的巨噬細胞、間充質干細胞中,可與PD-1 產生相互作用,以此抑制CD8+T 細胞的效應及功能［11］。據相關報道顯示,PD-L1 在腫瘤組織中的過度表達往往可導致不良的預后效果,PD-1/PD-L1 這一信號通路的激活可促使腫瘤出現免疫逃逸的現象,從而引起遠處轉移及復發(fā)的情況出現［12-14］。因此,通過PD-1/PD-L1 信號通路的阻斷,可有效促使腫瘤繼續(xù)處于T 細胞的免疫監(jiān)視中,繼而殺滅腫瘤細胞,從而保證機體免疫系統(tǒng)的長久穩(wěn)定［15,16］。目前,多項臨床研究顯示,針對PD-L1高表達的惡性腫瘤,采用阻斷PD-1/PD-L1 通路抑制劑進行治療具有確切的臨床療效［17］。因此,通過腫瘤組織中PD-L1 表達的檢測,利用PD-1/PD-L1 通路阻斷這一治療方式對乳腺癌等腫瘤疾病的臨床治療具有積極的應用價值［18］。

本研究對PD-L1 在不同分型乳腺癌中的表達及其與病理參數和預后的關系進行了探究,結果顯示：三陰性乳腺癌患者的PD-L1 陽性表達率高于非三陰性乳腺癌患者及對照組,非三陰性乳腺癌患者的PD-L1 陽性表達率高于對照組,差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。不同分子分型、PR 表達狀態(tài)、陽性淋巴結個數、TNM 分期乳腺癌患者的PD-L1 表達情況比較,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。不同分子分型乳腺癌患者的生存率比較,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。非三陰性乳腺癌LuminalA 型患者的生存率95.7%高于三陰性乳腺癌患者的71.1%,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

綜上所述,PD-L1 在不同分子分型乳腺癌中的表達存在明顯的差異,其中三陰性乳腺癌中的PD-L1 表達率最高；且PD-L1 的表達與乳腺癌患者的分子分型、PR 表達狀態(tài)、陽性淋巴結個數以及TNM 分期有關。臨床可將此作為乳腺癌治療的參考,為乳腺癌患者,尤其是目前缺乏后續(xù)治療手段的三陰性乳腺癌患者尋找更為可靠的療效預測標志物及治療方法。