程藝 張彥昀 黃婷 李亦奇 鄒元鋒

(1成都信息工程大學(xué)體育部，四川 成都 610207;四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2天然藥物研究中心；3動(dòng)物醫(yī)學(xué)院動(dòng)物疫病與人類(lèi)健康四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室)

黨參為桔梗科植物黨參、素花黨參或川黨參的干燥根〔1〕，為補(bǔ)益類(lèi)藥材，入藥歷史悠久，療效顯著。被納入國(guó)家衛(wèi)計(jì)委發(fā)布的“既是食品又是中藥材物質(zhì)”的名單。黨參具有補(bǔ)脾益肺，養(yǎng)血生津的作用，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明黨參具有抗氧化與衰老、免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗衰老、免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、調(diào)節(jié)血脂或血糖等多種作用，而多糖類(lèi)成分是其主要活性部位〔2～8〕，具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抗衰老、降血糖等藥理作用〔9〕。黨參為多基原品種，目前市場(chǎng)的主流為黨參和素花黨參。在傳統(tǒng)中醫(yī)藥中，道地藥材是一大特色，不同地域所產(chǎn)的同種藥材其質(zhì)量與療效差別很大,藥材的不同物種和不同產(chǎn)地決定了藥材的臨床藥效〔10～15〕。目前對(duì)于黨參多糖的研究報(bào)道雖然較多，但主要集中在提取工藝、結(jié)構(gòu)分析和藥理活性研究中，關(guān)于黨參多糖對(duì)于運(yùn)動(dòng)疲勞恢復(fù)的報(bào)道很少。本試驗(yàn)擬比較不同黨參粗多糖與水煎液對(duì)游泳小鼠疲勞的影響。

1 材料與方法

1.1試驗(yàn)動(dòng)物 SD雄性小鼠70只(體重18～22 g)，4周齡，購(gòu)于成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司。

1.2試驗(yàn)藥物 甘肅黨參主根：產(chǎn)自甘肅省白銀市，經(jīng)四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系鑒定為桔?？浦参稂h參的干燥根。素花黨參主根：產(chǎn)自四川省九寨溝縣，經(jīng)四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系鑒定為桔?？浦参锼鼗h參的干燥根。

1.3試驗(yàn)試劑 血乳酸測(cè)定試劑盒、肝/肌糖原試劑盒(北京奇松生物科技有限公司)；生理鹽水(百倫藥業(yè))、葡萄糖(西隴科學(xué)股份有限公司)、濃硫酸(西隴科學(xué)股份有限公司)、5%苯酚、85% 磷酸(H3PO4)、沒(méi)食子酸、無(wú)水乙醇、碳酸鈉(成都市科隆化學(xué)品有限公司)、福林酚(北京索萊寶科技有限公司)，以上均為分析純；牛血清蛋白(北京索萊寶科技有限公司)、考馬斯亮藍(lán)G-250(上海碧云天生物技術(shù)有限公司)。

1.4儀器 調(diào)溫型電熱套(北京中興偉業(yè)儀器有限公司)；RE-2000B旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)；FA2204A型電子天平(上海精天電子儀器有限公司)；SC-3614低速離心機(jī)(安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司)；BIO-RAD iMark 酶標(biāo)分析儀(上海珂淮儀器有限公司)；DK-98-ⅡA電熱恒溫水浴鍋(天津市泰斯特儀器有限公司)；LGJ冷凍干燥機(jī)(鄭州華豫兄弟制冷設(shè)備有限公司)。

1.5粗多糖的提取 取甘肅黨參主根、素花黨參主根各100 g，洗凈、烘干、剪切成長(zhǎng)約1 cm小塊，加入無(wú)水乙醇(料液比1∶50)提取5次，每次1 h，以去除單糖、色素等雜質(zhì)后，加入蒸餾水(料液比1∶30)微沸提取2次，每次2 h。將水提濾液濃縮至200 ml后加入無(wú)水乙醇至終濃度為80%，置于4 ℃冰箱中靜置過(guò)夜，3 500 r/min離心20 min，得到沉淀后凍干，即為粗多糖，稱(chēng)重并計(jì)算產(chǎn)率。通過(guò)苯酚-硫酸法〔16〕、考馬斯亮藍(lán)G-250法〔17〕及福林酚法〔18〕對(duì)粗多糖中多糖、蛋白、多酚含量進(jìn)行測(cè)定。

1.6水煎液的制備 各取50 g甘肅黨參及素花黨參主根干品，按1∶8比例加蒸餾水，小火煎煮2次，1 h/次，取煎煮液濃縮定容至藥液濃度0.5 g/ml。

1.7試驗(yàn)分組及給藥 小鼠按體重隨機(jī)分為分別為空白組、甘肅黨參水煎液組、甘肅黨參粗多糖高(200 mg/kg)、低劑量組(100 mg/kg)、素花黨參水煎液組、素花黨參粗多糖高(200 mg/kg)、低劑量組(100 mg/kg)。適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d后，每天按體重定時(shí)灌胃給藥一次，體積為0.1 ml/10 g，空白組灌給生理鹽水。連續(xù)灌胃7 d，灌胃期間自由攝食飲水。

1.8小鼠負(fù)重游泳試驗(yàn) 在第7天灌胃結(jié)束30 min后，稱(chēng)重后在小鼠尾部綁上鉛絲負(fù)重(按其體重的5%)，后于水槽(水溫25 ℃、水深30 cm)中游泳至力竭(即小鼠沉入水中10 s不能浮出水面)，記錄小鼠從開(kāi)始游泳到力竭的時(shí)間〔19〕。

1.9臟器指數(shù)的測(cè)定 給力竭小鼠采血后，脫臼處死，75%酒精浸泡消毒，剖開(kāi)胸腔和腹腔，取出肝臟、脾臟和胸腺，用濾紙吸干表面血液后稱(chēng)重，并計(jì)算各臟器指數(shù)〔16〕。

1.10血清中乳酸含量測(cè)定 力竭小鼠眼球取血，裝入4 ml EP管中，靜置后，3 500 r/min離心10 min，取上清液于-20℃冷凍保存，具體檢測(cè)方法參照血乳酸測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.11肝糖原的測(cè)定 肝臟稱(chēng)重后，用密封袋和錫箔紙包好迅速放入液氮中。將所有肝臟用研缽在液氮中磨粉后，用電子分析天平精確稱(chēng)取肝臟粉末0.1 g，再用生理鹽水稀釋10倍，3 500 r/min離心10 min，取其上清液于4℃冰箱保存，即備用的待測(cè)樣品液〔17〕。檢測(cè)方法參照試劑盒說(shuō)明書(shū)。

1.12統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS23.0軟件進(jìn)行單因素方差分析及LSD-t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1黨參粗多糖的產(chǎn)率及多糖、多酚和蛋白的測(cè)定 素花黨參的總多糖含量(50.96%)高于甘肅黨參(20.73%)。甘肅、素花黨參粗多糖均含有少量總多酚(0.06%、0.14%)，甘肅黨參粗多糖不含蛋白，而素花黨參粗多糖含少量蛋白(0.50%)。

2.2黨參粗多糖及水煎液對(duì)臟器指數(shù)的影響 與空白組比，甘肅黨參主根粗多糖高劑量組能顯著增加肝臟指數(shù)和脾臟指數(shù)(P<0.05)；素花黨參主根粗多糖高劑量組能顯著增加胸腺指數(shù)(P<0.05)。其余各組間無(wú)顯著差異(P>0.05)。見(jiàn)表1。

2.3黨參粗多糖及水煎液對(duì)負(fù)重游泳時(shí)間的影響 與空白組比較，甘肅黨參主根粗多糖高劑量組，素花黨參主根粗多糖高、低劑量組負(fù)重游泳時(shí)間顯著延長(zhǎng)(P<0.05)。與甘肅黨參水煎液組比較，素花黨參主根粗多糖高、低劑量組負(fù)重游泳時(shí)間顯著增長(zhǎng)(P<0.05)。與素花黨參水煎液比較，甘肅黨參主根粗多糖高劑量組和素花黨參粗多糖高、低劑量組負(fù)重游泳時(shí)間顯著延長(zhǎng)(P<0.05)。見(jiàn)表1。

2.4黨參粗多糖及水煎液對(duì)血清中乳酸含量的影響 與空白組比較，除甘肅黨參粗多糖高劑量組外，各給藥組均能降低血清中乳酸含量，其中甘肅、素花黨參水煎液組顯著降低(P<0.05)。與甘肅黨參和素花黨參水煎液組比較，黨參多糖組血清乳酸含量均顯著升高(P<0.05)。見(jiàn)表1。

2.5黨參粗多糖及水煎液對(duì)肝糖原含量的影響 與空白組相比，甘肅黨參和素花黨參水煎液組和粗多糖低劑量組均能顯著降低肝臟中肝糖原含量(P<0.05)，但給藥組間無(wú)顯著差異(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 各組臟器指數(shù)及負(fù)重游泳時(shí)間、血清乳酸及肝臟肝糖原含量

3 討 論

疲勞主要由體內(nèi)能量消耗過(guò)多和乳酸等代謝物質(zhì)的累積導(dǎo)致〔20,21〕。運(yùn)動(dòng)耐力是疲勞最客觀直接的檢測(cè)指標(biāo)，一般由負(fù)重游泳時(shí)間來(lái)體現(xiàn)〔22〕。這是由于負(fù)重游泳至機(jī)體力竭的時(shí)間反映出運(yùn)動(dòng)耐力的大小，而運(yùn)動(dòng)耐力提高表明機(jī)體的抗疲勞能力在增強(qiáng)〔23〕。本研究提示了黨參粗多糖和水煎液均能提高小鼠的運(yùn)動(dòng)耐力，具有一定的抗疲勞作用，其中以素花黨參粗多糖最好，且呈劑量依賴(lài)性。同時(shí)素花黨參粗多糖含量明顯高于甘肅黨參，故素花黨參粗多糖可作為一種運(yùn)動(dòng)中的抗疲勞藥物進(jìn)行進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用。檢測(cè)疲勞的生化指標(biāo)通常為肝糖原、血清尿素氮和乳酸等含量的測(cè)定〔24〕。長(zhǎng)時(shí)間的劇烈運(yùn)動(dòng)將導(dǎo)致乳酸的產(chǎn)生速度加快與消除速度減少，從而導(dǎo)致體內(nèi)乳酸大量的積累。乳酸濃度增加使肌肉H+和無(wú)機(jī)磷堆積，導(dǎo)致肌肉組織內(nèi)的pH值下降，改變肌肉組織內(nèi)環(huán)境，是導(dǎo)致疲勞產(chǎn)生的一個(gè)主要因素〔25,26〕。因此，血乳酸水平是反映機(jī)體有氧代謝能力及疲勞產(chǎn)生和消除速度的重要指標(biāo)〔27〕。而糖原是機(jī)體運(yùn)動(dòng)時(shí)主要的能量來(lái)源之一，研究表明，運(yùn)動(dòng)時(shí)體力衰竭是由于運(yùn)動(dòng)促進(jìn)了糖原的消耗，機(jī)體為了維持血糖水平，導(dǎo)致肝糖原的分解加快，因此，肝糖原含量可以有效地體現(xiàn)機(jī)體的疲勞程度〔28〕。褚海濱等〔29〕通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，不同劑量的黨參多糖均能延長(zhǎng)小鼠的負(fù)重游泳力竭時(shí)間，降低運(yùn)動(dòng)疲勞小鼠血清中的乳酸含量；Cai等〔30〕研究，黨參根多糖通過(guò)降低血乳酸水平改善肝臟和肌肉中糖原含量。本研究結(jié)果推測(cè)水煎液中含有除了多糖外的其他化學(xué)成分，如黃酮、黨參堿和皂苷等成分綜合作用所致〔16,31～33〕。很多植物多糖具有抑制肝臟肝糖原合成的藥理活性，推測(cè)黨參粗多糖和水煎液在一定劑量上，有抑制肝糖原合成的作用；也可能與動(dòng)物的應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)。胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)是用來(lái)檢查免疫器官生長(zhǎng)和免疫細(xì)胞功能的指標(biāo)。胸腺、脾臟作為中樞和重要的外周免疫器官，其萎縮、質(zhì)量的降低或功能衰退均可使免疫功能降低〔34～36〕。肝臟是身體內(nèi)以代謝功能為主的一個(gè)器官，起著去氧化、儲(chǔ)存肝糖、分泌性蛋白質(zhì)的合成等作用，其指數(shù)也可間接反映肝糖原的儲(chǔ)備情況〔37〕。本研究提示甘肅黨參主根粗多糖具有增強(qiáng)免疫和提高肝糖原儲(chǔ)備能力的作用，素花黨參粗多糖具有一定免疫增強(qiáng)作用。

本試驗(yàn)結(jié)果表明不同黨參粗多糖和水煎液都具有抗疲勞作用，素花黨參粗多糖抗疲勞效果最好，有關(guān)其抗疲勞作用機(jī)制及臨床應(yīng)用仍有待深入研究。