李靜，伍英英，周智明，陳張好，肖樹雄

（廣東省藥品檢驗所，廣州 510663）

隨著人們生活水平的提高，種類繁多的化妝品已成為人類日常消費品之一，同時其安全性日益受到廣大消費者的關(guān)注。近年來由使用化妝品導(dǎo)致的皮膚問題在不斷增加，最為常見的是皮膚過敏，導(dǎo)致這類問題的主要原因是化妝品中存在各種非法添加物，例如抗生素、糖皮質(zhì)激素、重金屬等。抗組胺類藥物是濕疹、藥疹、接觸性皮炎及皮膚瘙癢等發(fā)癢性皮膚病的常用抗過敏藥，可能會被不法商家添加到化妝品中以防止皮膚過敏反應(yīng)的發(fā)生。長期使用含有抗組胺類藥物的化妝品會導(dǎo)致藥物依賴性皮炎。同時，還可能引起人體內(nèi)激素水平變化，造成內(nèi)分泌混亂，引起月經(jīng)不調(diào)等不良反應(yīng)［1］?！痘瘖y品安全技術(shù)規(guī)范》（2015年版）中明確規(guī)定抗組胺類藥物不得作為生產(chǎn)原料及組分添加到化妝品中［2］。

測量不確定度是定量說明測得量值可信程度的一個重要參數(shù)，是評價方法合理性、科學(xué)性的參考數(shù)據(jù)。一份完整的測量報告，除了應(yīng)該給出測量對象的測量值之外，還應(yīng)同時給出測量值的不確定度。進行測量不確定度評定可使不同檢驗機構(gòu)或?qū)嶒炇页鼍叩臄?shù)據(jù)更具有可信性、可比性與可用性，反映實驗室的專業(yè)技術(shù)水平［3］。

基于國家計量技術(shù)規(guī)范《測量不確定度評定與表示》（JJF 1059.1—2012）［4］及《常用玻璃量器檢定規(guī)程》（JJG 196—2006）［5］的要求，依據(jù)《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》（2015年版）地氯雷他定等15種組分測量方法，參考不確定度評價相關(guān)文獻［6–17］，筆者對化妝品中的抗組胺類藥物奮乃靜進行檢測，對實驗過程中各種影響因素進行逐一分析，對該方法的測量不確定度進行綜合評定，為評價檢測結(jié)果提供科學(xué)依據(jù)。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀：LCMS–8040型，配備SIL–30AC自動進樣器、SPD–M20A二極管陣列檢測器，日本島津公司。

電子天平：XS205DU型，感量為0.01 mg及0.1 mg，瑞士梅特勒–托利多公司。

奮乃靜標準品：純度（質(zhì)量分數(shù)）為99.9%，中國藥品生物制品檢定研究院。

甲醇、甲酸、甲酸銨：色譜純，霍尼韋爾（中國）有限公司。實驗量器為計量檢定合格的A級玻璃量器。實驗用水為Milli-Q自制超純水。

1.2 儀器工作條件

柱溫：30 ℃；電噴霧離子源；正離子檢測方式；噴霧電壓：4.5 kV；毛細管溫度：250 ℃；加熱板溫度：400 ℃；霧化氣流量：3 L／min；干燥氣流量：15 L／min；檢測離子：（1）404.2／171.1 Da，碰撞電壓為24 V，（2）404.2／143.2 Da，碰撞電壓為29 V。

1.3 實驗方法

稱取樣品0.2 g（精確至0.000 1 g），置于具塞比色管中，加入甲醇40 mL，渦旋振蕩30 s，使試樣與提取溶劑充分混勻，超聲提取20 min，用甲醇定容至50 mL，搖勻，取上清液，用0.22 μm濾膜過濾，濾液作為試樣溶液備用。

1.4 標準溶液配制

精密稱取奮乃靜對照品0.01 g，置于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至標線，得到標準貯備液Ⅰ。精密量取25 μL標準貯備液Ⅰ，用甲醇稀釋并定容至10 mL容量瓶中，得標準貯備液Ⅱ。精密量取1.0 mL標準貯備液Ⅱ，用甲醇稀釋并定容至50 mL，得標準溶液s5；再分別精密量取0.4、1.0、2.0、4.0 mL標準溶液s5，用甲醇分別稀釋并定容至10 mL，得s1、s2、s3、s4系列濃度標準溶液。

2 測量模型

以高效液相色譜–串聯(lián)質(zhì)譜法測定化妝品中的奮乃靜含量，利用標準曲線法進行定量，按照式(1)計算奮乃靜的含量：

式中：w——化妝品中奮乃靜的質(zhì)量分數(shù)，ng／g；

ρ——利用標準曲線計算所得奮乃靜的質(zhì)量濃度，ng／mL；

V——樣品定容體積，mL；

m——取樣質(zhì)量［2］，g。

3 測量不確定度來源

本實驗測量結(jié)果相對標準不確定度的來源主要有：

（1）標準品引入的相對標準不確定度ur，s。包括標準品的純度引入的相對標準不確定度ur，s(P)、標準品的稱量引入的相對標準不確定度ur，s(m)、標準儲備液定容引入的相對標準不確定度ur，s(Vs)、系列標準工作溶液的稀釋引入的相對標準不確定度ur，s(D)、標準曲線擬合引入的相對標準不確定度ur，s(f)。

（2）樣品引入的相對標準不確定度ur。包括樣品稱量引入的相對標準不確定度ur(m)、樣品溶液的定容引入的相對標準不確定度ur(V)。

（3）高效液相色譜–串聯(lián)質(zhì)譜儀測量引入的相對標準不確定度ur，Q。

（4）測量重復(fù)性引入的相對標準不確定度ur，R。

合成相對標準不確定度表達式為：

4 不確定度評定與合成

4.1 奮乃靜標準品引入的相對標準不確定度ur，s

4.1.1 純度引入的不確定度ur，s(P)

對表1中各容量移液器移液體積的相對標準不確定度進行合成，得移液體積引入的相對標準不確定度ur，s(D1)=0.014 11。

表1 配制標準工作溶液時移液器引入的不確定度

（2）溫差引入的相對標準不確定度ur，s(D2)。按照4.1.3（2）過程評定，由校準溫度與使用溫度不同引入的體積的相對標準不確定度ur，s(D2)=0.001 902。

4.1.5 標準曲線擬合引入的相對標準不確定度ur，s(f)

按標準操作［2］，取奮乃靜標準儲備液適量，配制成一定濃度的系列標準工作溶液，每種濃度的標準工作溶液各測定6次（n=6），系列標準工作溶液的質(zhì)量濃度及對應(yīng)色譜峰面積見表2。10 ng／mL空白加標溶液對應(yīng)的色譜峰面積、標準曲線上對應(yīng)的質(zhì)量濃度列于表3。

表2 標準曲線擬合數(shù)據(jù)

表3 10 ng／mL加標溶液色譜峰面積及對應(yīng)質(zhì)量濃度

以系列標準工作溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標，6次測定色譜峰面積平均值為縱坐標，繪制標準曲線，得線性回歸方程：Y=47 262.3X–8 566.2，相關(guān)系數(shù)r=0.999 9。色譜峰面積測量的標準偏差：

稱取空白樣品，按標準操作，添加標準工作溶液，使質(zhì)量濃度為10 ng／mL，重復(fù)測定6次。則標準曲線擬合引入的標準不確定度：

式中：s——色譜峰面積測量值的標準偏差；

b——標準曲線的斜率；

p——試樣的測定次數(shù)，p=10；

n——標準溶液的測定次數(shù)，n=30；

Sxx——標準溶液濃度差的平方和，Sxx=1 515；

ρ0——試樣中奮乃靜的平均質(zhì)量濃度，ρ0=10.16 ng／mL；

ρ——系列標準工作溶液中奮乃靜的平均質(zhì)量濃度，ρ=17.4 ng／mL。

4.2 樣品引入的相對標準不確定度ur

4.2.1 樣品稱量引入的相對標準不確定度ur(m)

4.3 高效液相色譜–串聯(lián)質(zhì)譜儀引入的相對標準不確定度ur，Q

4.4 樣品測量重復(fù)性引入的相對標準不確定度ur，R

表4 樣品中奮乃靜質(zhì)量分數(shù)測定結(jié)果

4.5 合成相對標準不確定度、擴展不確定度

將上述各項不確定度分量代入式(2)，合成測定值的相對標準不確定度：ur(w)=0.023 73。將相關(guān)數(shù)據(jù)代入式(1)，得樣品中奮乃靜的質(zhì)量 分 數(shù)：w=2.475 6 mg／kg，其 標 準 不 確 定 度：u(w)=w×ur(w)=0.058 75 mg／kg，依據(jù)JJF 1059.1—2012，取k=2（P=95%），擴展不確定度U=k×u(w)=0.117 5 mg／kg。

5 不確定度報告

樣品中奮乃靜的質(zhì)量分數(shù)w=(2.475 6±0.117 5)mg／kg，k=2。