樓美娟，蔣英華，羊潔芳，許菲菲

（義烏海關(guān)，浙江義烏 322000）

乙醇，俗稱酒精，可以滲透進(jìn)入細(xì)菌內(nèi)部，使蛋白質(zhì)凝固變性，破壞細(xì)菌結(jié)構(gòu)，從而達(dá)到滅菌消毒的效果。乙醇溶液作為常用消毒液被廣泛應(yīng)用于手和皮膚消毒及相關(guān)醫(yī)療用品消毒［1–2］。以乙醇為主要成分的消毒濕巾因具有攜帶方便、安全有效的特點(diǎn)而得到廣泛使用。然而乙醇濃度過(guò)高會(huì)導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性過(guò)快，使菌體表面迅速凝固形成一層保護(hù)膜，阻止乙醇滲透進(jìn)入細(xì)菌，不能徹底殺死細(xì)菌［3–5］；而乙醇濃度太低則無(wú)法使蛋白質(zhì)有效變性，因此需要使消毒濕巾中的乙醇體積分?jǐn)?shù)保持在（75±5）%。

目前《乙醇消毒劑衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》［6］和《消毒技術(shù)規(guī)范》［7］規(guī)定消毒劑中乙醇的檢測(cè)采用比重法和氣相色譜法。其中比重法適用于僅含乙醇和水的溶液，且需要溶液體積較大，抗干擾性差，測(cè)量誤差大，不適宜用于消毒濕巾的檢測(cè)；氣相色譜法則采用多點(diǎn)校正外標(biāo)法定量，需要配制多個(gè)乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，操作較為繁瑣?，F(xiàn)階段已報(bào)道的針對(duì)醫(yī)用消毒濕巾和消毒劑中乙醇含量的測(cè)定方法主要有氣相色譜外標(biāo)法［8］和氣相色譜內(nèi)標(biāo)法［9–12］，這兩種方法皆用多點(diǎn)法校正。

單點(diǎn)校正法是外標(biāo)法的一種，配制一份與被測(cè)組分含量接近的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在相同條件下進(jìn)樣分析，利用色譜峰面積和含量之比進(jìn)行定量，常用于氣相色譜檢測(cè)中，具有快速、簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確的特點(diǎn)［13–17］。單點(diǎn)法應(yīng)用于乙醇檢測(cè)較少，由于消毒濕巾具有已知乙醇濃度范圍的特點(diǎn)，故本法用單點(diǎn)法對(duì)樣品進(jìn)行定量，配制體積分?jǐn)?shù)75%的乙醇溶液作為標(biāo)準(zhǔn)溶液，選用Agilent DB–624型毛細(xì)管色譜柱進(jìn)行樣品分離，采用FID檢測(cè)器進(jìn)行對(duì)照定量分析，通過(guò)對(duì)升溫程序及儀器條件的優(yōu)化，建立了操作更為簡(jiǎn)便、快速的消毒濕巾中乙醇含量的檢測(cè)方法。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

氣相色譜儀：Agilent 7890A型，配置FID檢測(cè)器，美國(guó)安捷倫科技有限公司。

電子天平：AL204–IC型，感量為0.1 mg，梅特勒–托利多儀器（上海）有限公司。

無(wú)水乙醇：色譜純，含量（體積分?jǐn)?shù)）大于99.8%，西隴科學(xué)股份有限公司。

乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液：乙醇體積分?jǐn)?shù)為75%，取7.5 mL無(wú)水乙醇，加入2.5 mL超純水，混合均勻。

N，N-二甲基甲酰胺（DMF）：色譜純，含量（體積分?jǐn)?shù)）大于99.9%，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技有限公司。

正己烷：色譜純，含量（體積分?jǐn)?shù)）大于95.0%，霍尼韋爾（中國(guó)）有限公司。

異辛烷：色譜純，含量（體積分?jǐn)?shù)）大于99.5%，格里斯（天津）醫(yī)藥化學(xué)技術(shù)有限公司。消毒濕巾樣品：市售。實(shí)驗(yàn)室用水為二級(jí)水。

1.2 儀器工作條件

色 譜 柱：Agilent DB–624型 毛 細(xì) 管 柱（30 m×250 μm，1.4 μm，美國(guó)安捷倫科技有限公司）；進(jìn)樣口溫度：200 ℃；升溫程序：初始溫度為30 ℃，保持1 min，以20 ℃／min升溫至190 ℃，保持1 min；載氣：高純氮?dú)?，流量?.5 mL／min；進(jìn)樣方式：分流進(jìn)樣，分流比為99∶1；檢測(cè)器溫度：240 ℃。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

稱取0.2 g（精確至0.000 1 g）乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液于50 mL容量瓶中，用DMF定容至標(biāo)線，輕輕搖勻。取適量進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜峰面積。取未開(kāi)封消毒濕巾，打開(kāi)后迅速取出其中的溶液，按照上述方法定容，作為樣品溶液，取適量進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜峰面積。按照下式計(jì)算濕巾樣品中乙醇的體積分?jǐn)?shù)：

式中：φ——樣品中乙醇的體積分?jǐn)?shù)，%；

φ0——標(biāo)準(zhǔn)溶液中乙醇的體積分?jǐn)?shù)，%；

m0——乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液取樣質(zhì)量，g；

A0——乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液6次測(cè)定色譜峰面積平均值；

m1——樣品溶液取樣質(zhì)量，g；

A1——樣品溶液的色譜峰面積。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜柱的選擇

乙醇是極性化合物，一般選用極性色譜柱分析，常用的極性色譜柱固定相有聚乙二醇、二苯基-二甲基聚硅氧烷、氰丙基苯基-二甲基聚硅氧烷。美國(guó)安捷倫科技有限公司的HP-innowax型色譜柱（30 m×250 μm，1.4 μm）以聚乙二醇為固定相，具有強(qiáng)極性；DB–624型毛細(xì)管柱以6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷為固定相，適用于揮發(fā)性化合物分析。以上兩種色譜柱均適用于乙醇分析。

試驗(yàn)對(duì)比了DB–624型和HP-innowax型兩種色譜柱對(duì)乙醇和定容溶劑DMF的分離情況。結(jié)果表明兩者均能較好的將乙醇分離，而DB–624型毛細(xì)管柱更適宜于分析揮發(fā)性有機(jī)物，故采用DB–624型毛細(xì)管柱進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

2.2 色譜條件的選擇

參考香水中乙醇測(cè)定的色譜條件［18］，根據(jù)濕巾組分較為簡(jiǎn)單的特點(diǎn)適當(dāng)提高程序升溫速率，進(jìn)樣所得被測(cè)物色譜峰面積、色譜峰形、分離度、精密度均符合實(shí)驗(yàn)要求，最終確定色譜條件見(jiàn)1.2。

2.3 溶劑的選擇

乙醇是極性分子，易溶于水、DMF、正己烷、異辛烷，由于水對(duì)毛細(xì)管柱有較大損傷，分別選用DMF、正己烷、異辛烷為溶劑進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)，3種試劑條件下乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜峰面積列于表1，色譜圖分別如圖1～圖3所示。結(jié)果表明，乙醇溶于正己烷與異辛烷后，色譜峰面積相對(duì)較小且與溶劑的保留時(shí)間相近，且因正己烷與異辛烷的弱極性，進(jìn)入氣相色譜柱后造成色譜柱固定相流失，出現(xiàn)一些雜峰；而DMF用作溶劑時(shí)與乙醇的分離情況較好，基線平穩(wěn)，故選用DMF為溶劑。

圖1 DMF為溶劑時(shí)乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

圖2 正己烷為溶劑時(shí)乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

圖3 異辛烷為溶劑時(shí)乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

表1 不同溶劑試驗(yàn)乙醇色譜峰面積測(cè)定結(jié)果

2.4 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

色譜系統(tǒng)適應(yīng)性主要包括理論塔板數(shù)、分離度、拖尾因子和重復(fù)性等指標(biāo)。理論塔板數(shù)用于評(píng)價(jià)色譜柱的分離效能，毛細(xì)管柱理論塔板數(shù)一般不小于5 000；分離度評(píng)價(jià)的是目標(biāo)物質(zhì)峰與相鄰峰的分離程度，應(yīng)大于1.5；拖尾因子則反映目標(biāo)組分色譜峰形是否對(duì)稱。

在1.2儀器工作條件下，分析乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，記錄色譜圖，計(jì)算乙醇和溶劑DMF的理論塔板數(shù)、分離度和色譜峰對(duì)稱因子，結(jié)果列于表2。由表2可知，在當(dāng)前條件下色譜柱柱效較高，乙醇和DMF分離良好，乙醇峰峰形沒(méi)有明顯前伸和拖尾，均滿足實(shí)驗(yàn)要求。

表2 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)數(shù)據(jù)

2.5 外標(biāo)法驗(yàn)證

準(zhǔn)確量取0.20 mL消毒濕巾樣品擠出液于50 mL容量瓶中，用DMF定容至標(biāo)線，輕輕搖勻，制備6份，取適量于進(jìn)樣瓶中待測(cè)。用無(wú)水乙醇分別配制體積分?jǐn)?shù)為10%、20%、40%、60%、80%、100%的乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，取0.20 mL于50 mL容量瓶中，用DMF定容至標(biāo)線，輕輕搖勻。分別取上述系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和待測(cè)樣品溶液，按1.2儀器工作條件進(jìn)樣分析，用色譜峰面積外標(biāo)法定量。10%乙醇溶液的信噪比為130，線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)見(jiàn)表3。由表3可知，體積分?jǐn)?shù)在10%～100%范圍內(nèi)的乙醇溶液線性關(guān)系滿足要求，用單點(diǎn)法定量可行。

表3 線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)

2.6 精密度試驗(yàn)

取同一份消毒濕巾樣品，按照1.3方法制備6份樣品溶液，在1.2儀器工作條件下進(jìn)樣分析，以單點(diǎn)法定量，結(jié)果列于表4。由表4可知，乙醇體積分?jǐn)?shù)6次測(cè)定的平均值為72.6%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.46%。表明本方法精密度較高。

表4 單點(diǎn)法精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.7 加標(biāo)回收試驗(yàn)

準(zhǔn)確配制體積分?jǐn)?shù)分別為70%、75%、80%的乙醇溶液，每種濃度配制6份，按1.2儀器工作條件進(jìn)樣分析，以單點(diǎn)法定量，測(cè)定結(jié)果列于表5。由表5可知，乙醇回收率為96.6%～102.3%。表明本法準(zhǔn)確度較高。

表5 加標(biāo)回收試驗(yàn)乙醇體積分?jǐn)?shù)測(cè)定結(jié)果 %

2.8 驗(yàn)證試驗(yàn)

利用外標(biāo)法對(duì)精密度試驗(yàn)中6份樣品進(jìn)行平行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果列于表6。由表6可知，外標(biāo)法測(cè)定平均值為71.4%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.17%，與單點(diǎn)法定量結(jié)果基本一致。

表6 外標(biāo)法精密度試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)語(yǔ)

試驗(yàn)結(jié)果表明，用DMF溶劑提取，DB–624毛細(xì)管色譜柱分離，F(xiàn)ID檢測(cè)器分析，能有效分離并定量測(cè)定消毒濕巾中的乙醇。該方法所需樣品量小，且抗干擾，測(cè)量誤差小。用單點(diǎn)法定量，檢測(cè)過(guò)程中只需配制單點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)溶液，相對(duì)于外標(biāo)法和內(nèi)標(biāo)法具有操作簡(jiǎn)便快速、測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定的特點(diǎn)，對(duì)于體積分?jǐn)?shù)為70%～80%的乙醇溶液樣品，用體積分?jǐn)?shù)為75%的乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液?jiǎn)吸c(diǎn)定量準(zhǔn)確度和精密度均較高。