程 潔張成香孫 杰李世芬王玉邦環(huán) 飛*

(1.江蘇省醫(yī)藥農(nóng)藥獸藥安全性評價與研究中心,南京 211166;2.南京醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院,南京 211166)

鐵皮石斛主要成分有大量多糖、生物堿、氨基酸、微量元素等,其主要藥理作用有提高免疫力,降血糖、降血脂、降血壓、抗腫瘤、抗氧化、延緩衰老、抗疲勞[1]。蝙蝠蛾擬青霉菌從冬蟲夏草中分離純化后所得麥角菌科蝙蝠蛾擬青霉菌株,研究表明其具有提高免疫活性和抗疲勞作用[2-3]。人參提取物中的主要功效成分為人參皂甙、多糖,還含有少量黃酮、多肽、甾醇、氨基酸、蛋白質(zhì)、生物堿、有機(jī)酸以及木質(zhì)素等多種化學(xué)成分。人參具有增強(qiáng)免疫力、改善記憶力、改善心血管功能、抗腫瘤和延緩衰老等藥理作用[4-5]。干姜作為傳統(tǒng)常用藥食同源的中藥材,其性熱味辛,功效為溫中散寒,回陽通脈,溫肺化飲[6],干姜理化作用為解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎、抑菌、改善心血管功能、還具有保護(hù)胃黏膜、抗?jié)円约氨８卫懙茸饔肹7]。

干姜和鐵皮石斛作為“藥食同源”的中藥材,本身食用安全,研究表明鐵皮石斛、人參、蝙蝠蛾擬青霉菌及其制劑均未發(fā)現(xiàn)毒性、食用安全,可進(jìn)一步開發(fā)利用復(fù)配成具保健功能的食品[8-12]。不同植物多糖對免疫調(diào)節(jié)功效不同[13],同時根據(jù)健康需求和藥性配伍不同的中藥材,達(dá)到協(xié)同作用,提高保健食品的功效,將鐵皮石斛和人參提取物,并輔以蝙蝠蛾擬青霉菌粉、干姜提取物為原料配伍制成石斛人參蝙蝠蛾姜膠囊。本實(shí)驗(yàn)對石斛人參蝙蝠蛾姜膠囊的功效成分測定及其對小鼠免疫系統(tǒng)影響的研究,旨在為進(jìn)一步開發(fā)利用鐵皮石斛、人參提取物、蝙蝠蛾擬青霉菌粉、干姜提取物復(fù)方的保健功能提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

選擇8~10周齡(體重為19.0~21.7 g)的SPF級雌性小鼠200只,品系為CI/F1(BALB/c與ICR雜交一代),由上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動物有限公司[SCXK(滬)2018-0006]提供。動物飼養(yǎng)于南京醫(yī)科大學(xué)衛(wèi)生分析檢測中心屏障系統(tǒng)[SYXK(蘇)2020-0006],并按實(shí)驗(yàn)動物使用的3R原則給予人道的關(guān)懷,倫理審批經(jīng)南京醫(yī)科大學(xué)衛(wèi)生分析檢測中心實(shí)驗(yàn)動物倫理委員會審核通過(GZ01020160063-3)。

1.2 主要試劑與儀器

石斛人參蝙蝠蛾姜膠囊由某公司提供,主要成分包括鐵皮石斛133 g、人參提取物45 g、蝙蝠蛾擬青霉菌粉111 g、干姜提取物24 g、微晶纖維素32 g和二氧化硅5 g按比例混后制成膠囊,人體推薦劑量為每人每天3.15 g。

培養(yǎng)基(RPMI1640,Gibco公司,美國);刀豆蛋白A(ConA,Sigma公司,美國);胎牛血清(浙江天杭生物科技股份有限公司);吩嗪二甲酯硫酸鹽(NP40,Fluka公司,美國);2,4-二硝基氟苯(DNFB,醫(yī)藥集團(tuán)(上海)化學(xué)試劑公司);四甲基偶氮哇(MTT,Amresco公司,美國);印度墨汁(北京篤信精細(xì)制劑廠);無菌脫纖維羊血(SRBC,江蘇博達(dá)生物工程有限公司);雞紅細(xì)胞懸液為實(shí)驗(yàn)室自制。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 功能成分含量測定

(1)人參皂甙

供試品采用水超聲30 min,定容后搖勻,放置后吸取上清液備用進(jìn)行柱層析[14]。采用3 cm的Amberlite-XAD-2大孔樹脂和1 cm中性氧化鋁作為層析柱,先后用70%乙醇與水洗柱,棄去洗脫液,加入1 mL已處理好的實(shí)驗(yàn)溶液,先用25 mL水洗柱,棄去洗脫液,再用25 mL 70%乙醇洗脫人參皂甙,收集洗脫液,60℃揮干;加入0.2 mL 5%香草醛冰乙酸溶解,再加0.8 mL高氯酸,混勻后60℃水浴10 min,冷卻后加入冰乙酸5 mL搖勻,采用分光光度計于560 nm波長處與標(biāo)準(zhǔn)管一起進(jìn)行比色測定,以人參皂甙Re為對照品。

(2)多糖測定

供試品采用水加熱回流2 h[15],定容,混勻,濾過;取濾液2 mL,加入無水乙醇定容至10 mL,搖勻,冷藏1 h后離心(4000 r/min,20 min),棄去上清液,沉淀加80%乙醇洗滌2次,離心,棄去上清液,沉淀加熱水溶解,冷卻,定容后待測備用;取1 mL待測溶液后加入5%苯酚溶液1 mL,搖勻、加硫酸5 mL后搖勻、置沸水浴中加熱20 min,冷卻后采用分光光度計于488 nm波長處與標(biāo)準(zhǔn)管一起進(jìn)行比色測定,以無水葡萄糖為對照品。

(3)腺苷測定

供試品采用水超聲提取10 min后[14],定容混勻后離心(3000 r/min,3 min),經(jīng)0.45μm濾膜過濾后采用液相色譜測定,色譜柱為C18柱,以1 mol/L磷酸二氫鉀∶甲醇=90∶10為流動相,流量1.0 mL/min,檢測波長為254 nm。

1.3.2 小鼠調(diào)節(jié)免疫功能實(shí)驗(yàn)

設(shè)定小鼠劑量分別為260 mg/kg、530 mg/kg和1580 mg/kg 3個劑量組[13],根據(jù)體表面積將小鼠劑量換算為人體等效劑量分別為21.1 mg/kg、43.1 mg/kg、128.4 mg/kg;陰性對照組(0 mg/kg,無菌水)。200只小鼠根據(jù)初始體重隨機(jī)分組,先分成5個大組,再按受試物給予劑量分成4個組,總計20組,每組10只小鼠。各免疫功能實(shí)驗(yàn)分組情況見表1。

表1 分組表Table 1 Grouping table

每天同一時間段給予受試物,連續(xù)30 d,各組小鼠按10 mL/kg灌胃給予受試物,30 d后測定調(diào)節(jié)免疫的各項(xiàng)指標(biāo)。

(1)體重和免疫器官相對重量

連續(xù)給予受試物30 d后,取用于小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)(第4大組)的40只小鼠,稱量終未體重,頸椎脫臼法處死小鼠,無菌條件下摘取脾和胸腺,并稱量臟器重量,按公式:相對重量=臟器絕對重量(mg)/小鼠體重(g),計算各自免疫器官相對重量。

(2)小鼠淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)(ConA誘導(dǎo)的脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn))及NK細(xì)胞活性測定

連續(xù)給予受試物30 d后,取第1大組的40只小鼠,稱量終末體重,頸椎脫臼法處死小鼠,無菌條件下摘取脾,研磨脾,無菌細(xì)胞篩網(wǎng)過濾,用Hank’s液洗2次,每次離心10 min(1000 r/min),制成單個細(xì)胞懸液,取部分細(xì)胞用RPMI1640培養(yǎng)液將調(diào)整濃度,24孔培養(yǎng)板加入1 mL濃度為每毫升3×106個細(xì)胞懸液,平行兩孔,一孔加濃度為100μg/mL的ConA溶液75μL,另一孔細(xì)胞作為對照,置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72 h。培養(yǎng)結(jié)束前4 h,吸去上清液0.7 mL,加入0.7 mL不含胎牛血清的培養(yǎng)液,每孔加入50μL濃度為5 mg/mL的MTT,繼續(xù)培養(yǎng)4 h后每孔加入1 mL酸性異丙醇,混勻,使紫色結(jié)晶溶解,將溶解液轉(zhuǎn)移至96孔培養(yǎng)板測定各孔光密度值,酶標(biāo)儀測定波長為570 nm,按公式:淋巴細(xì)胞增殖能力=含有ConA的組光密度值-無ConA的組光密度值。

取小鼠淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)中制成的單個細(xì)胞懸液,離心10 min(1000 r/min)棄上清后加入滅菌水裂解紅細(xì)胞20 s,加入Hank’s液混勻后離心,棄上清用含10%胎牛血清完全培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度。取濃度為每毫升2×107個的脾細(xì)胞懸液100μL和濃度為每毫升4×105個的YAC-1細(xì)胞懸液100μL加入96孔培養(yǎng)板(U型),混勻后置于5%CO2、37℃的條件下培養(yǎng)4 h,離心,取上清液100μL轉(zhuǎn)移至96孔培養(yǎng)板(平底)中,與100μL的LDH基質(zhì)液反應(yīng)10 min,加終止液30μL(1 mol/L的HCl)后測定各孔光密度值,酶標(biāo)儀測定波長為490 nm,按公式:NK細(xì)胞活性(%)=(反應(yīng)孔OD值-自然釋放孔OD值)/(最大釋放孔OD值-自然釋放孔OD值)×100,計算NK細(xì)胞活性。

(3)DNFB誘導(dǎo)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)

連續(xù)給予受試物30 d后,取第2大組的40只小鼠腹部去毛,范圍約3 cm×3 cm,用濃度10 mg/mL DNFB溶液50μL均勻涂抹誘導(dǎo)致敏,5 d后于小鼠右耳雙面涂均勻抹10μL激發(fā),激發(fā)后24 h頸椎脫臼法處死小鼠,左右耳各剪下直徑為8 mm的圓形耳片,稱重。按公式:耳重差(mg)=右耳重(mg)-左耳重(mg),計算右耳腫脹程度,以反映受試物對DNFB誘導(dǎo)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)影響程度。

(4)抗體生成細(xì)胞檢測和血清溶血素測定

連續(xù)給予受試物30 d后,取第3大組的40只小鼠腹腔注射0.2 mL的2%壓積SRBC懸液,4 d后所有小鼠從眼內(nèi)眥靜脈叢采集血液并離心血清備用(用于溶血素測定)。頸椎脫臼法處死小鼠,摘取脾,研磨脾,無菌細(xì)胞篩網(wǎng)過濾,用Hank’s液洗2次,每次離心10 min(1000 r/min),制成單個細(xì)胞懸液備用。將表層培養(yǎng)基加熱溶解后與等量2倍濃度的Hank’s液混勻,按每管0.5 mL分裝,再向管內(nèi)加50μL的10%壓積SRBC,25μL的脾細(xì)胞懸液,混勻后倒在已刷瓊脂糖薄層的玻片上,5%CO2、37℃條件下培養(yǎng)1.5 h,然后加入補(bǔ)體,繼續(xù)培養(yǎng)1.5 h后,計數(shù)溶血形成的空斑數(shù)。用緩沖液1∶200稀釋已離心好的血清,常規(guī)方法測定SRBC半數(shù)溶血時的光密度值,酶標(biāo)儀測定波長為540 nm。按公式:半數(shù)溶血值HC50=樣品光密度值/SRBC半數(shù)溶血時的光密度值×稀釋倍數(shù),計算半數(shù)溶血值。

(5)小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)

連續(xù)給予受試物30 d后,取第4大組的40只小鼠尾靜脈注入印度墨汁,2 min和10 min后取血,用0.1%Na2CO3溶液稀釋100倍,于600 nm波長處測光密度值,取肝、脾、胸腺并稱重,通過光密度值、肝、脾重量計算吞噬指數(shù)a。公式如下:

(6)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

連續(xù)給予受試物30 d后,取第5大組的40只小鼠。處死動物前4 d給每只小鼠腹腔注射0.2 mL的2%壓積SRBC,激活小鼠巨噬細(xì)胞。頸椎脫臼法處死小鼠,每只小鼠腹腔注射加4 mL含胎牛血清的Hank’s液,按揉腹部20次洗出腹腔巨噬細(xì)胞,吸取腹腔洗液0.5 mL與0.5 mL 1%雞血紅細(xì)胞懸液混勻。取0.5 mL混合液,加有玻片的瓊脂圈內(nèi)。放置孵箱內(nèi)37℃孵育20 min。孵育結(jié)束用生理鹽清洗,常規(guī)固定與Giemsa染色,鏡檢。按公式:吞噬百分率(%)=吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)/計數(shù)的巨噬細(xì)胞數(shù)×100,吞噬指數(shù)=被吞噬的雞紅細(xì)胞總數(shù)/計數(shù)的巨噬細(xì)胞數(shù),計算數(shù)吞噬率和吞噬指數(shù)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

所有實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用SPSS 22.0軟件計算與分析,小鼠各周體重、免疫器官相對重量、淋巴細(xì)胞增殖能力、耳殼增重、溶血空斑數(shù)、血清半數(shù)溶血值等指標(biāo)采用SPSS軟件對各實(shí)驗(yàn)組原始數(shù)據(jù)進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn),符合方差齊的要求的數(shù)據(jù)資料用單因素方差分析方法中多個實(shí)驗(yàn)組與一個對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計處理;對方差不齊的數(shù)據(jù)采用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計處理;對并將吞噬百分率和NK細(xì)胞活性需經(jīng)sin-1P1/2(P表示為吞噬百分率或NK細(xì)胞活性,將百分率轉(zhuǎn)化成小數(shù)表示)轉(zhuǎn)化,符合方差齊的要求后進(jìn)行統(tǒng)計處理。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05,P＜0.05具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 功能成分含量測定

石斛人參蝙蝠蛾姜膠囊的功效成分人參皂甙、多糖和腺苷的含量測定結(jié)果見表2。

表2 石斛人參蝙蝠蛾姜膠囊功效成分測定結(jié)果Table 2 Determination results of effective components in Dendrobium-ginseng-paecilomyces batmoth-ginger Capsule

2.2 小鼠調(diào)節(jié)免疫功能實(shí)驗(yàn)

2.2.1 石斛人參蝙蝠蛾姜膠囊對小鼠各周及終末體重和免疫器官相對重量的影響

石斛人參蝙蝠蛾姜膠囊各劑量組的小鼠各周及終末體重與陰性對照組比無顯著差異;免疫器官相對重量與陰性對照組比無顯著性差異(表3)。

表3 石斛人參蝙蝠蛾姜膠囊對小鼠胸腺和脾相對重量的影響(±s,n=10)Table 3 Effects of Dendrobium-ginseng-paecilomyces batmothginger Capsule on relative weight of thymus and spleen in mice

表3 石斛人參蝙蝠蛾姜膠囊對小鼠胸腺和脾相對重量的影響(±s,n=10)Table 3 Effects of Dendrobium-ginseng-paecilomyces batmothginger Capsule on relative weight of thymus and spleen in mice

劑量(mg/kg)Dose胸腺/體重(%)Thymus gland/body weight脾/體重(%)Spleen/body weight 00.192±0.0210.385±0.0252600.197±0.0200.390±0.0385300.208±0.0320.396±0.03915800.191±0.0210.381±0.018

2.2.2 石斛人參蝙蝠蛾姜膠囊對小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖能力、右耳腫脹程度的影響

由表4結(jié)果可見,1580 mg/(kg·d)組中含有ConA小鼠脾淋巴細(xì)胞孔光密度值與無ConA孔的差值高于0 mg/(kg·d)組,比較有顯著差異(P＜0.05),顯示石斛人參蝙蝠蛾姜膠囊對ConA誘導(dǎo)的脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化有增加作用,提高脾淋巴細(xì)胞增殖能力;1580 mg/(kg·d)組耳重差增重高于0 mg/(kg·d)組,比較有顯著差異(P＜0.05),顯示石斛人參蝙蝠蛾姜膠囊對DNFB誘導(dǎo)小鼠耳腫脹程度明顯增強(qiáng),反映小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)增強(qiáng)。脾淋巴細(xì)胞增殖能力增加和遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)增強(qiáng)均反映石斛人參蝙蝠蛾姜膠囊對小鼠細(xì)胞免疫功能、特異性免疫功能有增強(qiáng)作用。

表4 石斛人參蝙蝠蛾姜膠囊對脾淋巴細(xì)胞增殖能力、右耳腫脹程度的影響(±s,n=10)Table 4 Effects of Dendrobium-ginseng-paecilomyces batmoth-ginger Capsule on spleen lymphocyte proliferation and right ear swelling

表4 石斛人參蝙蝠蛾姜膠囊對脾淋巴細(xì)胞增殖能力、右耳腫脹程度的影響(±s,n=10)Table 4 Effects of Dendrobium-ginseng-paecilomyces batmoth-ginger Capsule on spleen lymphocyte proliferation and right ear swelling

注:與對照組比較,*P＜0.05。下同。Note.Compared with the control group,*P＜0.05.The same as below.

劑量(mg/kg)Dose加ConA孔與不加ConA孔吸光度的差值Difference of absorbance between hole with and without ConA耳重差(mg)Ear weight difference 00.095±0.03910.9±1.72600.109±0.03111.6±3.25300.117±0.04113.0±2.215800.148±0.066* 13.7±1.3*

2.2.3 石斛人參蝙蝠蛾姜膠囊對小鼠抗體生成細(xì)胞水平和半數(shù)溶血值的影響

由表5結(jié)果可見,1580 mg/(kg·d)組小鼠溶血形成的空斑數(shù)高于0 mg/(kg·d)組,比較有顯著差異(P＜0.05),顯示石斛人參蝙蝠蛾姜膠囊對促進(jìn)小鼠抗體生成細(xì)胞水平升高。260 mg/(kg·d)、530 mg/(kg·d)、1580 mg/(kg·d)組小鼠HC50與0 mg/(kg·d)組比較無顯著性差異(P＜0.05)。雖然石斛人參蝙蝠蛾姜膠囊對HC50升高影響沒有顯著性差異,結(jié)合溶血空斑數(shù)的升高,表明石斛人參蝙蝠蛾姜膠囊可在一定程度上增強(qiáng)小鼠的體液免疫功能。

表5 石斛人參蝙蝠蛾姜膠囊對小鼠抗體生成細(xì)胞水平和半數(shù)溶血值的影響(±s,n=10)Table 5 Effects of Dendrobium-ginseng-paecilomyces batmoth-ginger Capsule on antibody producing cells and half hemolytic value of mice

表5 石斛人參蝙蝠蛾姜膠囊對小鼠抗體生成細(xì)胞水平和半數(shù)溶血值的影響(±s,n=10)Table 5 Effects of Dendrobium-ginseng-paecilomyces batmoth-ginger Capsule on antibody producing cells and half hemolytic value of mice

劑量(mg/kg)Dose溶血空斑數(shù)(103個/全脾細(xì)胞)Number of hemolytic plaque(103/whole spleen cells)HC50 011.8±1.678±1926012.9±1.578±2753013.7±2.777±15158014.8±2.2* 91±20

2.2.4 石斛人參蝙蝠蛾姜膠囊對小鼠單核/巨噬細(xì)胞吞噬能力的影響

由表6結(jié)果可見,1580 mg/(kg·d)組的吞噬指數(shù)a高于0 mg/(kg·d)組,比較有顯著差異(P＜0.05);1580 mg/(kg·d)組的吞噬百分率及吞噬指數(shù)均高于0 mg/(kg·d)組,比較有顯著差異(P＜0.05);吞噬指數(shù)a升高表明石斛人參蝙蝠蛾姜膠囊對小鼠單核細(xì)胞吞噬能力(即碳廓清的能力)有增強(qiáng)作用,吞噬百分率及吞噬指數(shù)的升高表明石斛人參蝙蝠蛾姜膠囊對增強(qiáng)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬能力有增強(qiáng)作用,單核/巨噬細(xì)胞吞噬能力增強(qiáng)反映石斛人參蝙蝠蛾姜膠囊具有增強(qiáng)小鼠非特異性免疫功能。

表6 石斛人參蝙蝠蛾姜膠囊對小鼠單核-巨噬功能的影響(±s,n=10)Table 6 Effects of Dendrobium-ginseng-paecilomyces batmoth-ginger Capsule on mononuclear andmegaphagocytic function in mice

表6 石斛人參蝙蝠蛾姜膠囊對小鼠單核-巨噬功能的影響(±s,n=10)Table 6 Effects of Dendrobium-ginseng-paecilomyces batmoth-ginger Capsule on mononuclear andmegaphagocytic function in mice

劑量(mg/kg)Group吞噬指數(shù)a Phagocytic index a吞噬百分率(%)Phagocytosis percentage吞噬指數(shù)Phagocytic index 05.68±0.7422.5±3.50.28±0.042605.58±0.8424.7±4.10.30±0.045305.61±1.0324.7±4.10.31±0.0515806.70±0.92* 26.5±2.4* 0.33±0.05*

2.2.5 石斛人參蝙蝠蛾姜膠囊對小鼠NK細(xì)胞活性的影響

由表7結(jié)果可見,260 mg/(kg·d)、530 mg/(kg·d)、1580 mg/(kg·d)組小鼠NK細(xì)胞活性與0 mg/(kg·d)組比較無顯著性差異(P＞0.05)。表明石斛人參蝙蝠蛾姜膠囊對NK細(xì)胞活性沒有調(diào)節(jié)作用。

表7 石斛人參蝙蝠蛾姜膠囊對小鼠NK細(xì)胞活性的影響(±s,n=10)Table 7 Effects of Dendrobium-ginseng-paecilomyces batmoth-ginger Capsule on NK cell activity in mice

表7 石斛人參蝙蝠蛾姜膠囊對小鼠NK細(xì)胞活性的影響(±s,n=10)Table 7 Effects of Dendrobium-ginseng-paecilomyces batmoth-ginger Capsule on NK cell activity in mice

劑量(mg/kg)Group NK細(xì)胞活性(%)NK cell activity 032.9±7.626031.0±5.953037.6±8.4158027.5±5.0

3 討論

雄性小鼠好動,群養(yǎng)時的好斗習(xí)性容易影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,本研究僅選用雌性小鼠,符合保健食品檢驗(yàn)與評價技術(shù)規(guī)范(2003年版)單一性別的要求,同時也滿足了3R原則。本實(shí)驗(yàn)觀察石斛人參蝙蝠蛾姜膠囊對小鼠細(xì)胞免疫、體液免疫、單核-巨噬細(xì)胞功能三個方面均有明顯作用。細(xì)胞免疫方面:石斛人參蝙蝠蛾姜膠囊1580 mg/kg組可增強(qiáng)脾淋巴細(xì)胞增殖能力和增強(qiáng)DNFB誘導(dǎo)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng),均提示其具有明顯的細(xì)胞免疫的功能;單核-巨噬細(xì)胞功能方面:石斛人參蝙蝠蛾姜膠囊1580 mg/kg組小鼠碳廓清吞噬指數(shù)a、小鼠腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的吞噬百分率及吞噬指數(shù)均有顯著性增加,提示其具有增強(qiáng)單核巨噬細(xì)胞的吞噬能力;而且細(xì)胞免疫、單核巨噬細(xì)胞的吞噬能力是衡量機(jī)體非特異性免疫功能的重要標(biāo)準(zhǔn),石斛人參蝙蝠蛾姜膠囊具有明顯的增加機(jī)體非特異性免疫功能;體液免疫方面:石斛人參蝙蝠蛾姜膠囊1580 mg/kg組的小鼠組抗體生成細(xì)胞水平有明顯提高,該膠囊可在一定程度上調(diào)節(jié)小鼠體液免疫功能,屬于特異性免疫功能增強(qiáng)。

石斛人參蝙蝠蛾姜膠囊是鐵皮石斛、人參提取物、蝙蝠蛾擬青霉菌粉、干姜提取物為主要原料所制成,調(diào)節(jié)免疫功能作用的功效成分主要為人參皂甙、多糖和腺苷,以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果與文獻(xiàn)報道一致,陳星星等[16]研究表明鐵皮石斛能有效協(xié)同脂多糖(LPS)和刀豆蛋白(ConA)水平促進(jìn)免疫制型小鼠脾T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞增殖;Liu等[17]對BALB/c小鼠口服不同劑量的鐵皮石斛及其多糖對巨噬細(xì)胞的吞噬能力有顯著增強(qiáng);滕偉卓[3]研究表明蝙蝠蛾擬青霉菌粉可增強(qiáng)小鼠機(jī)體非特異性免疫功能和使遲發(fā)型超敏反應(yīng)加劇,使淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率增加;人參皂苷Rg1及其代謝產(chǎn)物可在體內(nèi)直接激活T細(xì)胞增殖、抑制活化狀態(tài)的T細(xì)胞,并提高巨噬細(xì)胞吞噬及釋放NO的能力[18];王華慶等[19]研究發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rg3不僅能明顯促進(jìn)淋巴細(xì)胞的增殖,還可以提高自然殺傷細(xì)胞活性和T細(xì)胞亞群的活性水平[16];人參多糖能夠促進(jìn)T、B淋巴細(xì)胞增殖,激活脾細(xì)胞[20];有研究表明人參多糖除了能促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖速度還能增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬能力[21];鐵皮石斛、人參等復(fù)合配方產(chǎn)品的研究表明,其可提高機(jī)體的特異性和非特異性免疫功能[22-23]。

綜上所述,石斛人參蝙蝠蛾姜膠囊具有免疫調(diào)節(jié)功能,主要功效與人參和鐵皮石斛中的各種植物多糖、人參中皂甙、蝙蝠蛾擬青霉菌粉中腺苷有關(guān)。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果可為以后人參、鐵皮石斛等中藥材的開發(fā)和配方優(yōu)化提供部分?jǐn)?shù)據(jù)。