張邑帆，鄭 華，張素輝，翟少青通信作者

(1.重慶市畜牧科學(xué)院，重慶 榮昌 402460；2.重慶市獸用生物制品工程技術(shù)研究中心，重慶 榮昌 402460)

0 引言

豬圓環(huán)病毒3型是單鏈環(huán)狀DNA病毒，其基因組與PCV1和PCV2相似，可以在動(dòng)物體內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性免疫反應(yīng)。2015年6月PCV3在美國(guó)首次被發(fā)現(xiàn)，隨后在北美、亞洲、歐洲等3個(gè)大洲多個(gè)國(guó)家被檢出患病豬只的組織中含有PCV3。2017年，有學(xué)者通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)PCV3與PNDS和繁殖障礙相關(guān)[1]。目前該病主要引起仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征、腹瀉；母豬可引起流產(chǎn)[2]。PCV3已經(jīng)成為造成養(yǎng)豬業(yè)損失的重要病因之一[3]，并且還有加劇的趨勢(shì)。

獸醫(yī)研究所于2020年3—11月對(duì)重慶6個(gè)地區(qū)20個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)的814份豬全血樣品進(jìn)行PCV3檢測(cè)，并分析其陽(yáng)性率在不同地區(qū)及不同年齡段豬群感染的情況，揭示重慶地區(qū)豬群PCV3感染情況及流行特點(diǎn)，為有效防控PCV3提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品

814份全血樣品分別于2020年3—11月采自重慶6個(gè)地區(qū)20個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)。

1.1.2 主要試劑

DNA抽提試劑盒，DL2000 DNA Marker，2×Taq PCR Master Mix，購(gòu)自寶生物工程(大連)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 引物設(shè)計(jì)與合成

根據(jù)GenBank 發(fā)表的PCV3及相關(guān)病毒的基因序列，目的基因片段大小為649 bp，引物序列為：PCV3-F:5’-TTACTTAGAGAACGGACTTGTAACG-3’；PCV3-R:5’-AAATGAGACACAGAGCTATATTCAG-3’引物由生工生物工程(上海)有限公司合成。

1.2.2 PCR擴(kuò)增

DNA模板2 μL，上下游引物各1 μL，2×Taq PCR Master Mix 12.5 μL，ddH2O 8.5 μL。反應(yīng)條件：95℃ 5 min；循環(huán)95℃ 30 s、55℃ 30 s、72℃ 60 s，共35次；72℃延伸10 min。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，電泳緩沖液為1×TAE，電泳條件為110 V 25 min，凝膠成像系統(tǒng)拍照保存，陽(yáng)性對(duì)照片段大小為649 bp。

2 結(jié)果

2.1 不同地區(qū)PCV3檢測(cè)結(jié)果

由表1結(jié)果顯示，對(duì)重慶6個(gè)地區(qū)20個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)采集的814份豬全血樣品進(jìn)行PCV3檢測(cè)，PCV3的總樣品陽(yáng)性率為3.1%(25/814)。養(yǎng)殖場(chǎng)陽(yáng)性率為15%(3/20)。榮昌樣品陽(yáng)性率為0(0/195)，石柱樣品陽(yáng)性率為16.7%(20/120)，豐都樣品陽(yáng)性率為0(0/195)，南川樣品陽(yáng)性率為1.4%(3/210)，長(zhǎng)壽樣品陽(yáng)性率為0(0/195)，彭水樣品陽(yáng)性率為2.2%(2/90)，說(shuō)明重慶地區(qū)存在PCV3感染情況。

表1 不同地區(qū)PCV3檢測(cè)結(jié)果

2.2 不同生長(zhǎng)階段PCV3檢測(cè)結(jié)果

由表2結(jié)果顯示，不同階段感染率分別為：斷奶仔豬為1.9%(5/258)，育肥豬為0(0/412)，經(jīng)產(chǎn)母豬為0(0/124)后備母豬為100%(20/20)。說(shuō)明斷奶仔豬和后備母豬有感染情況，且后備母豬感染是100%。

表2 不同生長(zhǎng)階段樣品檢測(cè)結(jié)果

由圖1可知，待檢測(cè)的22個(gè)樣品中，有20個(gè)樣品PCV3陽(yáng)性(2～11、13～22)，這20個(gè)陽(yáng)性樣品都來(lái)自同一個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)，即石柱某養(yǎng)殖場(chǎng)的后備母豬。

3 結(jié)論與分析

自從2015年P(guān)CV3開(kāi)始檢出以來(lái)，PCV3已經(jīng)慢慢在國(guó)內(nèi)開(kāi)始流行，因此有必要進(jìn)一步關(guān)注PCV3流行趨勢(shì)，盡量減小PCV3可能給規(guī)?；i場(chǎng)帶來(lái)的風(fēng)險(xiǎn)。

此次調(diào)查的重慶地區(qū)20個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)，814份豬全血樣品，PCV3的總樣品陽(yáng)性率為3.1%(25/814)，總體陽(yáng)性率不高，和吉林，安徽，廣西[4-6]等地地區(qū)調(diào)查的結(jié)果相比相對(duì)較低。在榮昌、豐都和長(zhǎng)壽等地區(qū)皆未發(fā)現(xiàn)PCV3感染。2020年重慶市20個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)的PCV3感染程度較低，說(shuō)明重慶地區(qū)的防控體系有效。

注：24—PCV3陰性對(duì)照；12—PCV3陽(yáng)性對(duì)照；1～11、13～23檢測(cè)樣品；M—DL2000 DNA Marker。

斷奶仔豬有1.9%(5/258)感染PCV3，可能是母豬垂直傳播造成的，也可能是外界病原感染，因此豬場(chǎng)環(huán)境消毒等生物安全措施很重要。后備母豬感染PCV3達(dá)到100%(20/20)，由于采樣受限等問(wèn)題，這次后備母豬采集數(shù)量較少，且只采集了石柱某養(yǎng)殖場(chǎng)，因此不能說(shuō)明該地區(qū)感染的嚴(yán)重程度。但是可以說(shuō)明該豬場(chǎng)PCV3感染比較嚴(yán)重，應(yīng)該是該場(chǎng)的飼養(yǎng)管理不當(dāng)造成的。因此該場(chǎng)需要加強(qiáng)PCV3的系統(tǒng)性防控。

受時(shí)間和人力的限制，此次調(diào)查選擇的地區(qū)較少，可能與全市實(shí)際情況存在一定差異。今后，會(huì)持續(xù)開(kāi)展PCV3 感染情況調(diào)查，掌握PCV3在重慶地區(qū)的流行趨勢(shì)，為重慶地區(qū)的PCV3防控工作提供科學(xué)依據(jù)。