楊瑞鈺,屈勇剛,李 靜,常軍帥,何高明
(石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院,新疆 石河子 832000)
乳制品,尤其是牛奶,是人們最基本的食物來(lái)源之一[1]。全球?qū)θ橹破返男枨笕找嬖鲩L(zhǎng),促使人們需要提高單頭奶牛的平均產(chǎn)奶量。牛奶產(chǎn)量的增加是由于遺傳選擇以及奶牛營(yíng)養(yǎng)和管理改善雙重影響的結(jié)果。影響高產(chǎn)奶量的最大問(wèn)題之一是乳房健康不佳,尤其是奶牛乳房炎。根據(jù)目前的研究表明,奶牛乳房炎的發(fā)病原因多為細(xì)菌感染,常見的致病菌為金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和鏈球菌[2]。有研究顯示,金黃色葡萄球菌感染引發(fā)的奶牛乳房炎常發(fā)生于泌乳高產(chǎn)期的患病奶牛[3];鏈球菌引發(fā)的奶牛乳房炎常發(fā)生于干乳早期[4];大腸桿菌引發(fā)的奶牛乳房炎多見于產(chǎn)后泌乳高峰期[5]。本研究擬對(duì)新疆石河子地區(qū)奶牛場(chǎng)引起奶牛乳房炎的病原菌情況展開研究,以期掌握該地區(qū)致病菌及耐藥的分布情況,為奶牛乳房炎治療的新方法奠定基礎(chǔ)。
血瓊脂平板、LB液體培養(yǎng)基、LB固體培養(yǎng)基、BHI液體培養(yǎng)基、BHI固體培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂平板、高鹽甘露醇培養(yǎng)基和革蘭氏染色液;主要試劑包括牛肉高、瓊脂粉、蛋白胨、氯化鈉等,均為國(guó)產(chǎn)分析純;生化鑒定管和藥敏紙片購(gòu)于杭州天和微生物試劑有限公司,藥敏紙片包括青霉素G、氧氟沙星、卡那霉素、克林霉素、萬(wàn)古霉素、氨芐西林、紅霉素、諾氟沙星、慶大霉素、鏈霉素、復(fù)方新諾明、頭孢噻污、環(huán)丙沙星等。
1.2.1 奶樣采集
2020年5—7月采集石河子地區(qū)周邊奶牛場(chǎng)確診臨床型奶牛乳房炎的奶牛奶樣,使用滅菌離心管收集,4℃?zhèn)溆?,共采集樣?21份。
1.2.2 病原菌的分離
使用接種環(huán)蘸取奶樣劃線接種于BHI瓊脂平板上,37℃過(guò)夜培養(yǎng),觀察菌落形態(tài)特點(diǎn);挑取單個(gè)菌落分別接種于LB瓊脂平板、血瓊脂平板、高鹽甘露醇平板、麥康凱瓊脂平板,37℃培養(yǎng)過(guò)夜;繼續(xù)挑取單個(gè)菌落,進(jìn)行多次純化培養(yǎng)。
1.2.3 病原菌的鑒定
觀察菌落形態(tài)、革蘭氏染色鏡檢,利用生化鑒定管采取不同的生化鑒定方法。
1.2.4 耐藥性試驗(yàn)
采用Kirby-Bauer法檢測(cè)分離菌的藥物敏感性。
金黃色葡萄球菌在LB瓊脂平板上的菌落特性為黃色圓形中等大小,表面光滑濕潤(rùn)、邊緣整齊,在血瓊脂平板上形成濕潤(rùn)、光滑、較大的菌落隆起,表現(xiàn)為明顯的β溶血,鏡檢結(jié)果為革蘭氏陽(yáng)性,呈葡萄串狀排列。大腸桿菌在普通瓊脂平板上形成圓形凸起、光滑、濕潤(rùn)、半透明、灰白色的大菌落,表現(xiàn)為波浪形蔓延生長(zhǎng),在血瓊脂平板上部分菌株有溶血現(xiàn)象,在麥康凱瓊脂平板上形成紅色菌落,鏡檢結(jié)果為格蘭仕陰性,桿狀,兩端鈍圓。鏈球菌在普通瓊脂平板上不生長(zhǎng),在血瓊脂平板上形成灰白色、半透明、表面光滑、圓形隆起的小菌落,一般能夠產(chǎn)生α或β溶血。
金黃色葡萄球菌、鏈球菌和大腸桿菌的生化鑒定試驗(yàn)結(jié)果如表1、表2、表3所示。
表1 鏈球菌的生化特性鑒定結(jié)果
表2 鏈球菌生化特性鑒定結(jié)果
表3 大腸桿菌的生化試驗(yàn)結(jié)果
對(duì)121份樣品中分離出的203株病原菌的分離鑒定結(jié)果如下:金黃色葡萄球菌97株、大腸桿菌33株、鏈球菌43株。
幾種病原菌對(duì)常用抗菌素的耐藥性,具體如表4所示。
表4 抗生素耐藥檢測(cè)結(jié)果
本研究主要從患臨床型乳房炎的奶牛奶樣中分離出203株病原菌,對(duì)其進(jìn)行分離鑒定,主要為金黃色葡萄球菌、大腸桿菌及鏈球菌,為引起奶牛乳房炎的主要致病菌,該結(jié)果與其他學(xué)者的研究結(jié)果相似[6-7]。據(jù)不同研究結(jié)果顯示,金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和鏈球菌是分離到最多的菌株。在不同飼養(yǎng)環(huán)境和不同地域的奶牛乳房炎病原菌表現(xiàn)出不同的特點(diǎn)[8]。
不同地區(qū)的病原菌對(duì)相同抗菌藥物所表現(xiàn)出的耐藥性也有不同[9];同一菌種的不同菌株對(duì)某種藥的耐藥性也有不同。該種情況的出現(xiàn)很大程度上與抗生素的濫用有關(guān)。根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示,該奶牛場(chǎng)的細(xì)菌對(duì)多種不同抗菌素產(chǎn)生了耐藥,出現(xiàn)對(duì)復(fù)方新諾明、青霉素和萬(wàn)古霉素的多重耐藥性。為在實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用中選用合適的抗生素提供了一定的依據(jù)。