賈文玉，楊麗萍，張 霆

(1.高臺(tái)縣羅城鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)工作站 ，甘肅 高臺(tái) 734300;2.張掖市畜牧獸醫(yī)局；3.高臺(tái)縣巷道鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)工作站)

1865年2月，意大利組織學(xué)家Enrico Sertoli首先就睪丸支持細(xì)胞及其結(jié)構(gòu)進(jìn)行描述，并認(rèn)為它與生精過(guò)程有關(guān)，稱(chēng)為Sertoli 細(xì)胞。1996年5月，R. Horn進(jìn)一步分析支持細(xì)胞及其與生精細(xì)胞發(fā)育之間的關(guān)系，認(rèn)為支持細(xì)胞對(duì)生精細(xì)胞的生精過(guò)程起著至關(guān)重要的作用。后來(lái)許多學(xué)者對(duì)睪丸支持細(xì)胞做了大量的研究，表明支持細(xì)胞為生精細(xì)胞的發(fā)育提供多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，維持生精小管內(nèi)睪酮的水平。并且參與形成血睪屏障，使生精細(xì)胞受到良好保護(hù)的功能。另外還具有吞噬、消化精子形成過(guò)程中脫落在管腔的殘余胞質(zhì)和在發(fā)育中部分退化的生精細(xì)胞的功能。

本研究對(duì)湖羊1～5月齡羔羊睪丸進(jìn)行組織學(xué)觀察和研究，根據(jù)支持細(xì)胞發(fā)育特征、生精小管管徑的變化，以及支持細(xì)胞與生精細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育關(guān)系的比較分析，以認(rèn)識(shí)羔羊睪丸支持細(xì)胞功能、發(fā)育組織學(xué)變化以及成熟的過(guò)程。探討其發(fā)育形態(tài)變化規(guī)律，為深入研究羔羊生殖系統(tǒng)和支持細(xì)胞提供組織學(xué)基礎(chǔ)資料。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

甘肅省張掖市高臺(tái)縣南華鎮(zhèn)天啓定點(diǎn)屠宰場(chǎng)采集湖羊1月齡、2月齡、3月齡、4月齡、5月齡羔羊睪丸。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器與藥品

包埋機(jī)、溫箱、精密輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)、攤片機(jī)、烘片機(jī)、10%福爾馬林、梯度酒精、無(wú)水酒精、苯酒、二甲苯、包埋石蠟、蘇木精染液、鹽酸分化液、伊紅染液。

1.3 樣品采集、組織處理及H.E染色

外科手術(shù)取出右側(cè)睪丸并放入pH 7.4聚甲醛固定液，經(jīng)75%酒精脫水、二甲苯透明、浸蠟，石蠟包埋操作。然后用石蠟切片制作5 μm厚的連續(xù)切片。每間隔5張取一張組織切片做H.E染色，H.E染色切片經(jīng)75%酒精脫水，二甲苯透明中性樹(shù)脂封片。

1.4 組織切片顯微觀察與測(cè)量及細(xì)胞計(jì)數(shù)

顯微觀察1～5月齡羔羊睪丸生精小管及支持細(xì)胞的形態(tài)特征和變化。每月齡的組織切片顯微鏡照相后，在圖片上選取10個(gè)正圓形的生精小管和細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰的支持細(xì)胞，利用顯微測(cè)微系統(tǒng)測(cè)量每個(gè)月齡睪丸生精小管直徑、支持細(xì)胞的面積，統(tǒng)計(jì)支持細(xì)胞與生精細(xì)胞的數(shù)目，求取平均數(shù)。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，統(tǒng)計(jì)結(jié)果用“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)”表示。

2 結(jié)果

2.1 羔羊睪丸解剖特點(diǎn)

睪丸除附睪緣外，均被覆一層漿膜。漿膜下面是致密的結(jié)締組織構(gòu)成的白膜、漿膜、白膜構(gòu)成睪丸的被膜，又稱(chēng)為固有鞘膜。在睪丸頭外，白膜的結(jié)締組織伸入睪丸內(nèi)部形成結(jié)締組織縱膈，稱(chēng)睪丸縱膈。自睪丸縱膈上分出呈放射狀排列的結(jié)締組織隔，并與白膜相連，稱(chēng)睪丸小隔。它將睪丸分成許多睪丸小葉。此外，在生精小管間的疏松結(jié)締組織構(gòu)成睪丸的間質(zhì)。

解剖學(xué)特征參數(shù)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明，羔羊左、右兩側(cè)的單體睪丸存在一定差異性(表1)。

表1 1～5月齡羔羊睪丸重量和體積變化 cm3 ，g

圖11 1～5月齡羔羊睪丸重量和體積變化

本結(jié)果表明：隨著月齡的增加，左右兩個(gè)睪丸重量不斷增大，但是左側(cè)睪丸始終大于右側(cè)睪丸。另睪丸的體積也在不斷增大，左側(cè)睪丸始終大于右側(cè)睪丸，兩者的變化不夠成線性關(guān)系(表1、表2)。在3月齡睪丸體積和重量增長(zhǎng)顯著(P>0.05)

表2 1～5月齡羔羊睪丸支持細(xì)胞和生精細(xì)胞變化統(tǒng)計(jì) μm，個(gè)

2.2 睪丸支持細(xì)胞的組織學(xué)特點(diǎn)

顯微鏡下各月齡睪丸的生精小管內(nèi)僅有支持細(xì)胞和生精細(xì)胞兩種細(xì)胞，支持細(xì)胞結(jié)構(gòu)呈高柱狀，但輪廓不清，細(xì)胞核呈卵圓形，染色淺而清晰、核仁明顯有1～2個(gè)。細(xì)胞基部附著在基膜上，頂部伸至生精小管腔面。1月齡，睪丸支持細(xì)胞的胞體較小，核多不規(guī)則，核仁清晰。生精細(xì)胞零星可見(jiàn)，支持細(xì)胞與生精細(xì)胞之間的界線不明顯[表4]2月齡，睪丸支持細(xì)胞和生精細(xì)胞的數(shù)目都有增加，單個(gè)支持細(xì)胞呈高度不規(guī)則的錐體形。生精細(xì)胞緊貼基膜，圓形，較小，細(xì)胞核染色質(zhì)較細(xì)，核仁長(zhǎng)靠近基膜3月齡時(shí)，支持細(xì)胞與生精細(xì)胞界限明顯，位于基膜附近的支持細(xì)胞體積進(jìn)一步增大4月齡，生精小管中有更多發(fā)育中的生精細(xì)胞，支持細(xì)胞和生精細(xì)胞體積顯著增大。支持細(xì)胞體積較前增大，核圓或卵圓，色淡5月齡，睪丸支持細(xì)胞的寬度和高度達(dá)到最大，但高度和寬度變化不成比例。胞核呈卵圓形，染色淺而清晰、核仁明顯，體積較前面四個(gè)月齡的大，四周有許多生精細(xì)胞。但并沒(méi)有在生精小管中發(fā)現(xiàn)圓形精子，結(jié)果如圖2所示。

2.3 睪丸支持細(xì)胞及生精細(xì)胞計(jì)量統(tǒng)計(jì)

本結(jié)果表明：隨著羔羊睪丸生長(zhǎng)發(fā)育，睪丸支持細(xì)胞和生精細(xì)胞的數(shù)目都有增加。在5月齡的變化過(guò)程中，支持細(xì)胞與生精細(xì)胞的數(shù)量一直維持在2.2～2.5倍之間，說(shuō)明支持細(xì)胞隨生精細(xì)胞數(shù)目的增多而呈比例的增加。同時(shí)，支持細(xì)胞的寬度和高度也都有所增大，增幅明顯，但增幅不成比例。其5月齡細(xì)胞高度約是1月齡的2.2倍，寬度約是1.6倍。

2.4 生精小管直徑變化

在光鏡下觀察生精小管管壁，附有許多的支持細(xì)胞和生精細(xì)胞。5月齡管徑較前面四個(gè)月齡顯著增大，管壁面積及細(xì)胞數(shù)增長(zhǎng)的同時(shí)管壁上細(xì)胞間距也在變大。

表3 1～5月齡羔羊睪丸生精小管直徑變化 μm

統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明：隨著羔羊月齡的增加，其生精小管管徑的不斷增大，增幅明顯，但不成比例。其中5月齡生精小管的直徑約是1月的1.7倍(圖2)。

圖2 羔羊睪丸生精小管與支持細(xì)胞關(guān)系

睪丸生精小管的直徑在2月齡增幅明顯。睪丸支持細(xì)胞數(shù)目，細(xì)胞寬度、高度三者成正比的都在增加，但增幅無(wú)生精小管增加明顯。在每個(gè)月齡中，生精小管單位管壁面積的睪丸支持細(xì)胞數(shù)增加基本一致，保持在0.14～0.15之間。生精小管的管徑與生精小管內(nèi)細(xì)胞數(shù)目、面積的變化有關(guān)。

3 小結(jié)

羔羊睪丸隨著月齡的增加，左右兩個(gè)睪丸重量和體積不斷增大，在3月齡后增加顯著，說(shuō)明睪丸生精小管和各種細(xì)胞隨著睪丸發(fā)育數(shù)量在不斷增加；隨著羔羊睪丸月齡的增加，睪丸支持細(xì)胞的結(jié)構(gòu)更加清晰完整，細(xì)胞體積逐漸增大，與生精細(xì)胞的界限更加明顯，細(xì)胞四周的生精細(xì)胞的數(shù)量也顯著增多；性成熟之前，羔羊睪丸支持細(xì)胞的快速增長(zhǎng)主要表現(xiàn)在生精小管直徑顯著性增大。