姜立春，朱 蘭，顧相悅，費(fèi) 禹，曾文佳，徐中文，李曉琴

(綿陽(yáng)師范學(xué)院生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，四川綿陽(yáng) 621006)

0 引言

秸稈作為一種在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中產(chǎn)生的重要的可再生生物質(zhì)資源，在我國(guó)每年產(chǎn)量約在8.0億t以上，占世界秸稈總產(chǎn)量的20%～30%[1].纖維素是其中含量最高的組分，所以家畜難以高效分解利用，故用來(lái)做家畜飼料的僅占我國(guó)秸稈總量15%～20%[2].纖維素能夠利用植物的光合作用不斷進(jìn)行積累，是世界上分布最廣、數(shù)量最大的可再生資源[3].然而，廣泛的纖維素資源將被廢棄或直接焚燒，造成極為嚴(yán)重的資源浪費(fèi)，同時(shí)對(duì)環(huán)境產(chǎn)生巨大污染[4].為此，當(dāng)前纖維素資源的開(kāi)發(fā)和使用成了目前能源和環(huán)境的焦點(diǎn)問(wèn)題.

纖維素是葡萄糖由β-1,4-糖苷鍵鏈接形成的生物大分子多聚糖，是構(gòu)成植物細(xì)胞壁的重要組成部分之一，是自然界中含量最豐富的的碳水化合物[5].但是纖維素中含有大量的氫鍵，同時(shí)纖維素含結(jié)晶區(qū)和非結(jié)晶區(qū)，且結(jié)晶區(qū)較非結(jié)晶區(qū)更難降解.所以纖維素不易被降解，利用率低.通過(guò)微生物產(chǎn)生的酶作用，可以降低纖維素的聚合度生成葡萄糖[6]，提高纖維素的利用率.

目前纖維素降解方式為化學(xué)水解與生物酶解法[7]，化學(xué)水解法存在成本較高、操作較復(fù)雜，同時(shí)會(huì)導(dǎo)致二次污染等嚴(yán)重問(wèn)題.而生物酶解法卻擁有反應(yīng)條件溫和、設(shè)備要求簡(jiǎn)單、操作流程方便等優(yōu)勢(shì)，具有降解效率高、成本相對(duì)較低與安全環(huán)保等特點(diǎn)，是降解纖維素的較為理想的方法.生物酶解纖維素的第一步一般為纖維素酶，纖維素酶不是特稱(chēng)某一種酶，而是一個(gè)酶系的合稱(chēng).其中包括內(nèi)切和外切-β-葡聚糖酶、β-葡萄糖苷酶[8].纖維素酶廣泛存在于動(dòng)物、植物和微生物中.

自然界中存在大量能夠產(chǎn)生纖維素酶的的微生物.至今，研究者已發(fā)現(xiàn)能分解纖維素的菌包括真菌、細(xì)菌和放線(xiàn)菌共53屬，其中木霉菌和曲霉菌兩種真菌產(chǎn)酶量最大、酶系最全[9]，為篩選纖維素降解菌提供了重要的參考依據(jù).盡管利用生物酶解法有眾多優(yōu)勢(shì)，但是酶活力低一直是制約纖維素酶實(shí)際應(yīng)用的一個(gè)重要原因[10].本試驗(yàn)從三臺(tái)某木材廠(chǎng)存放木材下面的土壤和腐朽的木材作為研究對(duì)象，篩選出一株可高效降解纖維素的細(xì)菌.

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣本 2019年7月采集三臺(tái)縣某木材廠(chǎng)存放多年木材下面的土壤和腐朽的木材.

1.1.2 試劑和設(shè)備 羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)、剛果紅、DNS試劑，PCR試劑盒，新華濾紙；紫外可見(jiàn)光分光度計(jì)、高速冷凍離心機(jī)、恒溫培養(yǎng)箱、臺(tái)式恒溫培養(yǎng)搖床、超凈工作臺(tái)、梯度PCR儀、電泳系統(tǒng)、凝聚成像儀、超低溫冰箱等.

1.1.3 培養(yǎng)基 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基(g/L)：牛肉膏3.0，蛋白胨10.0，NaCl 10.0，瓊脂20.0，pH 7.2-7.4.

羧甲基纖維素鈉培養(yǎng)基(g/L)[6]：CMC-Na 8.0，KH2PO41.5，NaH2PO4·7H2O 2.5，MgSO4·7H2O 0.3，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.005，ZnCl20.001 5，MnSO40.001 5，(NH4)2SO42.0，pH 7.2.

產(chǎn)酶發(fā)酵培養(yǎng)基(g/L)[6]：NaCl 3.0 g、K2HPO41.5 g、MgSO4·7H2O 0.5 g、CaCl20.2 g，F(xiàn)eSO4·7H2O 5.0 mg，MnSO41.5 mg，ZnCl21.5 mg，CoCl22.0 mg，pH 調(diào)至7.2.以上培養(yǎng)基121 ℃高溫滅菌20 min.

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 菌株篩選 將采集土壤和腐朽木材混合浸泡在無(wú)菌0.9% NaCl溶液中，放置搖床振蕩8 h.量取樣本重懸液，依次梯度稀釋到濃度為10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6，分別量取稀釋液濃度10-4～10-6稀釋度0.6 mL，涂布在羧甲基纖維素鈉固體平板上，于28℃恒溫培養(yǎng)60～96 h.將篩選獲得的纖維素降解菌做好標(biāo)記，在點(diǎn)接至CMC-Na固體平板上，28 ℃倒置培養(yǎng)60 h后，取1.0 mg/mL的剛果紅染液適量倒入培養(yǎng)皿中，染色30 min，棄去染液，隨后加入1.0 mol/L的NaCl溶液，浸泡20 min，根據(jù)透明圈與菌體直徑比篩選高效降解纖維素的菌株[7].選擇比值大菌落進(jìn)行平板劃線(xiàn)純化，連續(xù)挑選獲得純培養(yǎng)的單菌落，觀察菌落形態(tài).將該菌株接種斜面上培養(yǎng)48 h，于4 ℃冰箱保存?zhèn)溆?

1.2.2 酶活性分析 (1) CMCase[9]菌液在4 ℃、6 000 r/min的條件下離心15 min，取0.50 mL上清液(粗酶液)，加入0.50 mL 0.4 %羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)溶液，50℃恒溫水浴鍋中溫育1.5 h，然后加入4 mL DNS試劑，放入沸水浴10 min終止反應(yīng)，放置冷卻后在520 nm下測(cè)吸光值，粗酶液沸水浴處理10 min后作為陰性對(duì)照，每個(gè)樣品做3個(gè)平行試驗(yàn).

(2)濾紙?zhí)腔?FPase)[11]將培養(yǎng)好的菌液在4 ℃、5 000 r/min的條件下離心20 min，取0.5 mL上清液(粗酶液).將新華濾紙剪成規(guī)格為10 mm×60 mm的條形，放入大試管中，取粗酶液0.5 mL，加入醋酸緩沖液1.0 mL，50 ℃恒溫水浴1.0 h后取出，加入2.0 mL DNS試劑將反應(yīng)終止，搖勻后于100 ℃水浴顯色10 min，室溫冷卻后，在520 nm下測(cè)吸光值進(jìn)行還原糖測(cè)定，粗酶液100 ℃水浴處理10 min作陰性對(duì)照，每個(gè)樣品做3個(gè)平行試驗(yàn).

1.2.3 酶活測(cè)定 酶活力單位定義：在1.0 min內(nèi)每毫升酶液催化底物生成1.0 μg葡萄糖所需要的酶量，即1.0 U/mL.酶活力計(jì)算公式：Y=(1000×A×V)/(0.5×T)，式中A：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)獲得凈葡萄糖的濃度(g/L)；V：總體積；0.5：測(cè)定時(shí)；量取粗酶液的毫升數(shù)；T：酶解反應(yīng)時(shí)間.

1.3 菌株分子生物學(xué)鑒定

1.3.1 形態(tài)觀察 菌株在高氏一號(hào)培固體養(yǎng)基上28 ℃培養(yǎng)36 h后進(jìn)行菌落形態(tài)觀察，放于4 ℃冰箱中保存.挑取單一菌落進(jìn)行革蘭氏染色，顯微鏡下觀察其菌體形態(tài)結(jié)構(gòu).

1.3.2 基因組提取與16S rRNA基因擴(kuò)增 基因組DNA提取：參考文獻(xiàn)[12]方法提取細(xì)菌總DNA，略有修改.0.9%瓊脂糖電泳檢測(cè).PCR反應(yīng)體系：37.5 uL ddH2O、5.0 uL 10×PCR buffer、4.0 uL dNTPs (各2.5 mmol/L)、1.0 uL F27：(5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′) (20 umol/L)、1.0 uL R1492：(5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′) (20 umol/L)、2.0 uL模板、0.5 uL Taq DNA聚合酶(5.0 ug/uL)，反應(yīng)總體積為50 uL.擴(kuò)增循環(huán)體系：94 ℃預(yù)變性3.5 min，94 ℃變性35 s，57 ℃退火35 s，72 ℃延伸90 s.經(jīng)33個(gè)循環(huán)后，72 ℃延伸9 min.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1.0%電泳檢測(cè)后，其產(chǎn)物回收純化與pMD-19T載體連接，轉(zhuǎn)入感受態(tài)細(xì)胞JM109，篩選陽(yáng)性重組子，郵寄成都擎科梓熙生物技術(shù)公司測(cè)序，其核酸序列用于構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù).

1.3.3 基于16S rRNA序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù) 通過(guò)測(cè)序獲得的16S rRNA序列用NCBI中BLAST搜索與GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行相似性分析，從而獲得相應(yīng)菌株16S rRNA序列，在Clustal X(1.83)程序包中進(jìn)行序列比對(duì)分析.基于軟件MEGA6.06中的鄰接法(Neighbor-Joining)法構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)[13]，確定菌株分類(lèi)地位.

1.4 單因素優(yōu)化

培養(yǎng)基組分的優(yōu)化，本試驗(yàn)對(duì)篩選出的菌種的培養(yǎng)條件做了以下單因素的優(yōu)化試驗(yàn)：培養(yǎng)時(shí)長(zhǎng)、氮源及濃度、碳源及濃度、酸堿度、培養(yǎng)溫度、接種量.培養(yǎng)時(shí)間的控制是在培養(yǎng)的發(fā)酵液每隔12 h取樣測(cè)其酶活.碳源為玉米粉、微晶纖維素、蔗糖、CMC、麥芽糖、乳糖、淀粉、葡萄糖為碳源，其濃度為10 g/L；氮源為牛肉膏、NH4Cl、NaNO3、NH4NO3、KNO3、(NH4)2SO4、胰蛋白胨、尿素、酵母膏為氮源，其濃度為5 g/L.

1.5 酶學(xué)性質(zhì)

1.5.1溫度 采用最適條件對(duì)菌株進(jìn)行培養(yǎng)，獲得粗酶液，考察不同溫度(20、30、40、50、60 ℃)對(duì)CMCase與FPase活性的影響.測(cè)定在不同溫度下該菌種產(chǎn)生酶的穩(wěn)定性，確定其溫度適應(yīng)范圍.

1.5.2 pH 采用最適條件對(duì)菌株進(jìn)行培養(yǎng)，獲得粗酶液，考察不同pH值(4.0、5.0、6.0、7.0、8.0)對(duì)CMCase與FPase活性的影響.于最適溫度下酶解30 min，測(cè)定兩種酶活性.隨后測(cè)定在不同pH下該菌株產(chǎn)生酶的穩(wěn)定性，確定其pH適應(yīng)范圍.

1.6 綜合最佳條件進(jìn)行培養(yǎng)測(cè)定

在確定的最佳碳源和氮源及其最佳濃度、溫度、pH及裝液量下，將菌恒溫160 r/min下?lián)u床培養(yǎng)相應(yīng)時(shí)間后測(cè)定Lip酶酶活，與上各單因素測(cè)定酶活比較在綜合條件下其酶活是否有大的改進(jìn)，從而可以了解菌產(chǎn)酶條件的優(yōu)化情況.

2 結(jié)果與分析

2.1 菌株篩選

通過(guò)初篩培養(yǎng)分離得到20株菌可產(chǎn)生纖維素酶，對(duì)其進(jìn)行純培養(yǎng)菌株.在纖維素培養(yǎng)基上經(jīng)過(guò)剛果紅染色后，觀察試驗(yàn)中菌落大小與透明圈大的大小如表1所示.以培養(yǎng)80 h后透明圈直徑與菌落直徑之比進(jìn)行了評(píng)估，共有9株纖維素降解菌株水解圈大于3，其中菌株XW08透明圈直徑與菌落直徑最大為6.28，其次XW05為4.46和XW15為4.09，選擇XW08作為目標(biāo)菌株進(jìn)行液體培養(yǎng)，測(cè)其CMCase酶活性和FPase活性.對(duì)分離出的20株菌做兩種酶活力測(cè)定試驗(yàn)，結(jié)果如表2所示.獲得菌株XW08的CMCase和FPase酶活力最大，分別為6.12和6.56，結(jié)合初篩結(jié)果，將XW08作為待測(cè)菌種進(jìn)一步后續(xù)試驗(yàn).

2.2 基因組提取與PCR擴(kuò)增

采用常規(guī)SDS法提取DNA，然后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)顯示基因組提取條帶比較清晰、整齊和均勻，濃度較高，可用于16S rRNA基因序列擴(kuò)增.采用通用引物擴(kuò)增，將16S rRNA基因郵寄到成都擎科梓熙生物技術(shù)有限公司進(jìn)行測(cè)序，將測(cè)序片段采用DNA Baser軟件拼接在一起，得到16S rRNA基因序列.

2.3 菌株XW08鑒定

2.3.1 形態(tài)觀察 菌株XW08在含CMCase的營(yíng)養(yǎng)瓊脂固體平板上生長(zhǎng)，有土腥味，白色，菌落小而致密，邊緣不規(guī)則，表面粗糙，干而不透明，正反面顏色不一致，不易挑起，不產(chǎn)生色素.通過(guò)形態(tài)觀察，初步判定為放線(xiàn)菌.經(jīng)革蘭氏染色后，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞呈桿狀，革蘭氏染色為紫色，呈陽(yáng)性.

2.3.2 16S rDNA系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)構(gòu)建 將測(cè)序得到的菌株XW08的16S rDNA序列與數(shù)據(jù)庫(kù)中已注冊(cè)的16S rDNA序列用BLAST搜索進(jìn)行序列相似性比較分析，其結(jié)果如圖1所示.供試菌株的16S rDNA序列與鏈霉菌屬的菌株同源相似度大部分在97 %以上，目前認(rèn)為，當(dāng)2個(gè)細(xì)菌的16S rDNA的相似性大于95%時(shí)，可將其歸為同一屬，而同源性較高的序列均來(lái)自Streptomyces，初步將此菌株歸為鏈霉菌屬.同時(shí)XW08在系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)上與StreptomycesexfoliatusHBUM174569 (FJ486375)和Streptomycessp. MJM1121 (KP137363)聚集在同一個(gè)分支中，且16S rDNA序列的同源相似性為99%以上.結(jié)合其形態(tài)特征及生理生化特性與鏈霉菌屬較為一致，因此，將菌株XW08屬于鏈霉菌屬，命名為Streptomycessp. XW08.

圖1 基于16S rDNA序列構(gòu)建菌株XW08和相關(guān)菌的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)Fig.1 Phylogenetic tree of strain xw08 and related bacteria based on 16S rDNA sequence

2.4 發(fā)酵條件對(duì)產(chǎn)酶活性的影響

2.4.1 培養(yǎng)時(shí)間 圖2中顯示從12 h開(kāi)始CMCase和FPase的產(chǎn)量都開(kāi)始緩慢上升直至60 h，60 h過(guò)后兩種酶的酶活開(kāi)始大幅度上升，至72 h時(shí)酶的活力達(dá)到最大，而72 h過(guò)后酶活力開(kāi)始急速下降.且由圖中可知CMCase相比FPase活力更高，在72 h時(shí)CMCase活性達(dá)到了5.68 U/mL，F(xiàn)Pase活性達(dá)到4.36 U/mL.因此，后續(xù)培養(yǎng)時(shí)間為72 h.

圖2 培養(yǎng)時(shí)間產(chǎn)酶活性的影響Fig.2 Effect of culture time on enzyme activity

2.4.2 最適碳源與濃度 碳源的種類(lèi)與性能對(duì)纖維素酶活力會(huì)產(chǎn)生較大影響，況且菌株種類(lèi)對(duì)于不同的碳源及其最適濃度也會(huì)產(chǎn)生不同的代謝偏好.本試驗(yàn)考察不同碳源對(duì)酶活的影響，由圖3可知，以淀粉為唯一碳源產(chǎn)酶活力最高，CMCase和FPase活力都為最高分別達(dá)到了5.65和4.32 U/mL，葡萄糖次之.因此淀粉是XW08菌種的最適碳源.分別設(shè)置5、10、20、30、40、50 g/L 6個(gè)濃度考察淀粉對(duì)酶活性的影響，由圖4可知當(dāng)?shù)矸酆吭?～10 g/L時(shí)，兩種酶活力緩慢上升，隨著淀粉濃度升高酶活力迅速上升.在20 g/L時(shí)兩種酶的酶活力均達(dá)到最高分別為8.12、6.54 U/mL.當(dāng)過(guò)了20 g/L時(shí)酶活力都開(kāi)始下降.由此得出最適淀粉含量為20 g/L.

2.4.3 最適氮源與濃度 氮源是組成蛋白質(zhì)酶和核酸的重要元素，對(duì)于纖維素酶的形成有重大影響.由圖5可知，當(dāng)胰蛋白胨和酵母膏作為氮源時(shí)，CMCase和FPase活性都較高，以酵母膏為唯一氮源時(shí)CMCase和FPase活性分別為7.22、5.96 U/mL.所以酵母膏是菌株XW08最適氮源.分別設(shè)置1、2、4、6、8、10 g/L 6個(gè)濃度，來(lái)考察酵母膏對(duì)酶活性的影響，由圖6得到在酵母膏含量為6 g/L時(shí)CMCase和FPase的活力最高，分別為8.23、6.65 U/mL.當(dāng)含量小于6 g/L時(shí)隨著酵母膏濃度增加酶活力增加，而濃度高于6 g/L兩種酶活力開(kāi)始逐漸降低.由此得出酵母膏含量達(dá)到6 g/L時(shí)，菌株產(chǎn)酶的量最多.

2.4.4 初始pH值 培養(yǎng)環(huán)境對(duì)于產(chǎn)纖維素酶的菌株生長(zhǎng)有一定的影響，過(guò)酸或過(guò)堿都會(huì)有不同的影響.由圖7中數(shù)據(jù)可得隨著酸堿度的增加CMCase和FPase的酶活都在上升，菌株的產(chǎn)酶量不斷增加，pH6.0時(shí)CMCase和FPase酶活達(dá)到最高，分別為14.12、10.86 U/mL，而pH高于6.0時(shí)酶活性急速下降.為此，該菌株的較適生長(zhǎng)酸堿度為6.0.

2.4.5 溫度 不同溫度對(duì)微生物生存及代謝的影響極其重要，本試驗(yàn)中分別測(cè)定20 ℃～42 ℃溫度區(qū)間對(duì)XW08菌株產(chǎn)酶活力的影響，見(jiàn)圖8.溫度范圍在20 ℃～35 ℃范圍時(shí)酶的產(chǎn)量相對(duì)緩慢上升，在25 ℃時(shí)兩種酶的產(chǎn)量相差最小，在35℃時(shí)CMCase酶和FPase的產(chǎn)量最高，分別為27.52、21.28 U/mL，25 ℃～35 ℃的酶活力測(cè)出均在15 U/mL以上，溫度適應(yīng)范圍較廣.為此，35 ℃為該菌種的較適生長(zhǎng)溫度.

2.4.6 接種量 接種量過(guò)多，菌株生長(zhǎng)繁殖的速度較快，資源有限，菌群生長(zhǎng)發(fā)育則會(huì)受到限制.接種量少，菌株適應(yīng)期增長(zhǎng)，需要更多時(shí)間來(lái)繁殖達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，影響產(chǎn)酶活性.由圖9可得當(dāng)接種量在2%～5%時(shí)兩種酶的產(chǎn)量都比較高，均在25 U/mL以上.當(dāng)接種量達(dá)到5%時(shí)，兩種酶的產(chǎn)量達(dá)到最大，CMCase和FPase分別為38.35、32.28 U/mL.在接種量超過(guò)5%之后，接種量的多少對(duì)酶的產(chǎn)量造成的影響不大，則較適的接種量為5%.

圖9 接種量對(duì)產(chǎn)酶的影響Fig.9 Effect of inoculation amount on enzyme production

2.5 酶學(xué)性質(zhì)

2.5.1 最適pH與穩(wěn)定性 菌種生長(zhǎng)時(shí)會(huì)受到外界條件的影響，酶是一種具有高度特異性和高效催化化學(xué)反應(yīng)能力的物質(zhì)，使化學(xué)反應(yīng)在極為溫和的條件下也能發(fā)生反應(yīng).雖然有這些優(yōu)點(diǎn)，但其不穩(wěn)定，易被破環(huán).由圖10可知，酶在pH5.5～7.5的活性都比較高，在pH為6.0時(shí)，兩種酶活性最高，CMCase和FPase分別為38.68和29.32 U/mL.當(dāng)pH低于5.0或高于7.0時(shí)，酶的活性下降速度較快，酶活性明顯受到抑制.所以酶在中性環(huán)境下活性最佳，最適pH為6.0.酶在不同pH條件下處理1.5 h，考察酶的穩(wěn)定性，由圖11可知隨之pH增高逐漸升高，而在pH5.5～7.5酶活力都比較高，CMCase和FPase

活性最高，分別為38.24、30.85 U/mL，最適應(yīng)的pH5.5～7.5.

2.5.2 最適溫度與穩(wěn)定性 酶是一種蛋白成分，不同溫度條件下對(duì)酶的活性有較大影響，溫度過(guò)高會(huì)對(duì)酶產(chǎn)生不可逆的破壞，即蛋白質(zhì)的變性.由圖12可知隨之溫度的升高，酶的活性迅速增高，當(dāng)溫度為50 ℃時(shí)，CMCase和FPase的活性達(dá)到最高，分別為42.68和36.32 U/mL.高于50 ℃時(shí)酶活性迅速受到抑制，因此，溫度對(duì)該酶活性有較大影響.酶在不同溫度條件下處理1.5 h，考察酶的穩(wěn)定性，見(jiàn)圖13.結(jié)果表明，XW08菌株的溫度適應(yīng)范圍較寬，30 ℃～60 ℃的溫度對(duì)菌株XW08酶活性影響較小，兩種酶的活性都比較高，高于60℃兩種酶的活性開(kāi)始大幅度受到抑制，而高于80 ℃ 1.5 h后，CMCase和FPase酶活性降低到最高酶活的17.76%以下.因此，菌株最適應(yīng)的溫度在30 ℃～60 ℃.

2.6 XW08綜合優(yōu)化條件培養(yǎng)

根據(jù)前面的優(yōu)化結(jié)果，即20 g/L淀粉，6 g/L酵母膏，pH6.0、35 ℃和裝液量為70 mL的條件下，對(duì)接種XW08后的三角瓶置于160 r/min搖床上進(jìn)行搖床培養(yǎng)72 h，取部分5 000 r/min離心15 min得到取上清液為粗酶液.測(cè)定CMCase和FPase酶活性分別為43.56、36.72 U/mL.

3 討論

從木材廠(chǎng)的土壤和朽木中分離篩選得到的Streptomycessp. XW08(纖維素分解鏈霉菌XW08)，通過(guò)對(duì)菌株的16S rRNA系統(tǒng)發(fā)育分析，發(fā)現(xiàn)菌株XW08在遺傳上與鏈霉菌屬相似度極高，因此，將該菌命名為Streptomycessp. XW08.XW08菌株為分離的20個(gè)菌株中初始CMCase與FPase酶活最高，分別為6.12與6.56 U/mL.在經(jīng)過(guò)本次試驗(yàn)的各項(xiàng)培養(yǎng)條件優(yōu)化后，該菌株單位酶活明顯增加，最優(yōu)條件下培養(yǎng)72 h后，CMCase和FPase酶活分別達(dá)到43.56、36.72 U/mL.菌株XW08的CMCase活性明顯高于王偉等[14]報(bào)道的鏈霉屬菌株YDL3和HLF4，也高于王洪媛等[15]和李子昂等[16]報(bào)道的菌株，在CMCase活性上具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì).雖然XW08菌株在條件優(yōu)化后產(chǎn)酶活性在已報(bào)道的菌株中處于較高水平，但是酶活性大小不僅與菌株及其來(lái)源、培養(yǎng)基組成成分、培養(yǎng)時(shí)間與測(cè)定酶活采用的方法等有關(guān)，還與纖維素酶的反應(yīng)條件(底物濃度、時(shí)間和溫度等)有關(guān)[17]，因此，對(duì)其工藝仍需進(jìn)一步深入研究.這些將為采用生物法降解纖維素提供試驗(yàn)依據(jù)，進(jìn)而提高纖維素資源利用率.