劉祥鵬 陳佳文 曹春華 江麗仕

喉癌是臨床上發(fā)病率較高的惡性腫瘤，病理類型以鱗癌為主。喉癌病因復(fù)雜，普遍認(rèn)為與吸煙、飲酒、空氣污染、病毒感染及性激素等有關(guān)，影響患者生存情況。P53是人體的抑癌基因，既往研究表明，P53蛋白在喉癌患者中表達(dá)異常，其陽(yáng)性率與疾病嚴(yán)重程度有關(guān)，亦與喉癌復(fù)發(fā)相關(guān)。Cdc2是細(xì)胞中的周期調(diào)節(jié)基因，當(dāng)Cdc2表達(dá)水平異常或紊亂后，會(huì)引起細(xì)胞異常分化并引起癌變。目前喉癌在臨床上仍缺乏有效的治療方法，基于P53、Cdc2蛋白在喉癌的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮的重要作用，其有望成為喉癌治療的新靶點(diǎn)。本研究探討喉癌患者P53、Cdc2蛋白的表達(dá)情況及其與放療預(yù)后的關(guān)系，旨為喉癌治療提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2018年5～12月郴州市第一人民醫(yī)院收治的喉癌患者160例，其中男85例，女75例；年齡43～72歲，平均(58.67±5.39)歲；身體質(zhì)量指數(shù)20～26 kg/m，平均(23.15±2.41)kg/m；腫瘤部位：聲門上型41例，聲門型101例，聲門下型18例；病理分級(jí)：高分化67例，中分化71例，低分化22例；腫瘤分期：Ⅰ～Ⅱ期94例，Ⅲ～Ⅳ期66例。

納入標(biāo)準(zhǔn)：符合喉癌診斷標(biāo)準(zhǔn)，均經(jīng)病理確診；病灶標(biāo)本與正常組織標(biāo)本完整；患者均進(jìn)行了放射治療，隨訪資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：行放化療、生物免疫治療者；精神異常、應(yīng)激反應(yīng)強(qiáng)烈或伴有凝血功能異常者；伴有全身感染性疾病或妊娠期哺乳期者。

1.2 方法 比較所有患者病灶組織及癌旁正常組織(距離病灶≥3 cm)P53、Cdc2蛋白表達(dá)的差異；同時(shí)比較不同性別、年齡(≥60歲、<60歲)、腫瘤直徑(≥3 cm、<3 cm)、分化類型(高分化、中分化、低分化)、腫瘤分期(Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期)、腫瘤部位(聲門上型、聲門型、聲門下型)等患者P53、Cdc2蛋白陽(yáng)性率的差異；患者行放射治療后隨訪24個(gè)月，統(tǒng)計(jì)其復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移及死亡情況，并對(duì)P53、Cdc2蛋白表達(dá)情況與預(yù)后進(jìn)行相關(guān)性分析。

1.3 P53、Cdc2蛋白檢測(cè)及陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn) 采用免疫組織化學(xué)法測(cè)定病灶組織、正常組織中P53、Cdc2蛋白陽(yáng)性率。判定標(biāo)準(zhǔn)：參考半定量方法對(duì)結(jié)果進(jìn)行判讀，對(duì)每個(gè)切片常規(guī)取5個(gè)不同的高倍視野，分別從陽(yáng)性細(xì)胞百分率(1～4分)、陽(yáng)性強(qiáng)度(0～3分)等方面進(jìn)行評(píng)分，將細(xì)胞陽(yáng)性率與染色強(qiáng)度相乘，陰性(-)為0分，弱陽(yáng)性(+)為1～2分，中度陽(yáng)性(++)為3～5分，強(qiáng)陽(yáng)性(+++)為6～8分。

2 結(jié)果

2.1 患者病灶組織與正常組織P53、Cdc2蛋白陽(yáng)性率比較 160例患者中，病灶組織P53、Cdc2蛋白陽(yáng)性率分別為92.50%(132/160)、80.0%(128/160)，高于正常組織的19.38%(31/160)、23.13%(37/160)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

χ

=6.291、7.241，

P

=0.031、0.029)。免疫組化染色結(jié)果顯示，P53、Cdc2蛋白在喉癌組織中呈高水平表達(dá)，且多定位于細(xì)胞膜與細(xì)胞質(zhì)中，而其在正常組織中表達(dá)水平較低。見圖1。

圖1 P53、Cdc2蛋白免疫化學(xué)染色(×200)

2.2 不同臨床病理特征患者P53、Cdc2蛋白陽(yáng)性率比較 不同腫瘤直徑、分化類型、腫瘤分期患者喉癌組織中P53、Cdc2蛋白陽(yáng)性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)意義(

P

<0.05)。見表1。

表1 不同臨床病理患者P53、Cdc2蛋白陽(yáng)性率比較

2.3 P53、Cdc2蛋白陽(yáng)性率與預(yù)后的相關(guān)性 所有患者放療后隨訪24個(gè)月，32例(20.00%)復(fù)發(fā)，29例(18.13%)轉(zhuǎn)移， 47例死亡(29.38%)。Pearson 相關(guān)性分析顯示，P53、Cdc2蛋白表達(dá)陽(yáng)性率與復(fù)發(fā)(

r

=0.681、0.713，

P

<0.001、<0.001)、轉(zhuǎn)移(

r

=0.725、0.583，

P

<0.001、<0.001)、死亡(

r

=0.701、0.602，

P

<0.001、<0.001)均呈正相關(guān)性。

3 討論

喉癌發(fā)病率占惡性腫瘤的1%～22%，放射治療能獲得較好的結(jié)果，但部分患者放療后預(yù)后較差，再加上治療過程中缺乏有效的預(yù)測(cè)、評(píng)估方法，導(dǎo)致患者5年生存率較低。因此，尋找新的腫瘤標(biāo)志物、新的治療靶點(diǎn)對(duì)改善患者預(yù)后，提高其生存期意義重大。本文探討喉癌患者P53、Cdc2蛋白陽(yáng)性表達(dá)情況及其與放療預(yù)后的關(guān)系，以其為喉癌治療提供新的靶點(diǎn)。

P53基因?qū)儆谂c人類緊密相關(guān)的致癌基因，亦是人類腫瘤突變頻率較高的抑癌基因(幾乎存在于所有腫瘤中)。臨床上將P53基因分為野生型和突變型兩種，前者能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，而后者則能抑制細(xì)胞凋亡。突變型P53與腫瘤的發(fā)生、生長(zhǎng)調(diào)控及凋亡存在緊密聯(lián)系，能作為免疫系統(tǒng)的靶抗原，引起免疫系統(tǒng)失耐受，從而產(chǎn)生P53抗體。本研究中，喉癌患者病灶組織中P53、Cdc2蛋白陽(yáng)性率顯著高于正常組織(

P

<0.05)，表明P53、Cdc2蛋白在喉癌組織中呈高表達(dá)，該結(jié)果與李建華等研究結(jié)果相符。不同腫瘤直徑、分化類型、腫瘤分期患者喉癌組織中P53、Cdc2蛋白陽(yáng)性率比較，差異顯著(

P

<0.05)，提示可以通過P53的表達(dá)情況，反映患者的疾病嚴(yán)重程度和進(jìn)展情況，指導(dǎo)臨床治療。Cdc2屬于Ser/Thr蛋白激酶家族重要成員之一，能調(diào)節(jié)細(xì)胞周期并發(fā)揮正性調(diào)控作用。但當(dāng)Cdc2失調(diào)控后，則會(huì)引起腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。研究表明，喉癌細(xì)胞增殖過程中，腫瘤細(xì)胞周期調(diào)控機(jī)制破壞，導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)失控、分化受阻，并引起凋亡異常。而Cdc2是細(xì)胞周期調(diào)控的中心環(huán)節(jié)，在細(xì)胞生長(zhǎng)和分化過程中發(fā)揮重要作用。本組所有患者放療后隨訪24個(gè)月，32例(20.00%)復(fù)發(fā)，29例(18.13%)轉(zhuǎn)移，47例死亡(29.38%)；Pearson相關(guān)性分析顯示， P53、Cdc2蛋白表達(dá)陽(yáng)性率與復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移、死亡均呈正相關(guān)性，表明P53、Cdc2蛋白陽(yáng)性表達(dá)越高，患者復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移及死亡等發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)越高。此與陳國(guó)群的研究相似，可能是由于P53、Cdc2蛋白能參與實(shí)體瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，其表達(dá)水平能評(píng)估患者疾病嚴(yán)重程度，亦可評(píng)價(jià)患者預(yù)后。

綜上所述，P53、Cdc2蛋白在喉癌患者癌組織中呈高表達(dá)，其陽(yáng)性表達(dá)情況與患者放療后預(yù)后相關(guān)，有望成為喉癌治療的新靶點(diǎn)。