亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        桃PpMADS1的克隆及對類胡蘿卜素合成基因的調(diào)控研究

        2021-08-11 06:40:06柴吉釧方筱琴曹士鋒施麗愉楊震峰
        核農(nóng)學(xué)報(bào) 2021年7期
        關(guān)鍵詞:胡蘿卜素熒光素酶番茄

        余 凡 秦 娟 柴吉釧 方筱琴 曹士鋒 陳 偉 施麗愉 楊震峰,*

        (1 浙江萬里學(xué)院生物與環(huán)境學(xué)院,浙江 寧波 315100;2 上海海洋大學(xué)食品學(xué)院,上海 201306)

        類胡蘿卜素是黃色、橙色和紅色果實(shí)中重要的呈色物質(zhì),是一類天然色素的總稱。類胡蘿卜素作為有效清除單線態(tài)氧和自由基的抗氧化劑[1],不僅可以提高健康成年人大腦認(rèn)知能力[2],還能夠降低白內(nèi)障等眼部疾病[3]及癌癥[4]的發(fā)病率。近年來,隨著人們對營養(yǎng)健康關(guān)注度的提高,人們對類胡蘿卜素等功能性物質(zhì)需求也越來越大,因此,深入揭示果實(shí)中類胡蘿卜素的形成與調(diào)控研究正日益受到人們的廣泛關(guān)注。

        高等植物類胡蘿卜素的生物合成在質(zhì)體中進(jìn)行,遵循類異戊二烯途徑,涉及的酶包括八氫番茄紅素合成酶(phytoene synthase,PSY)、八氫番茄紅素脫氫酶(phytoene desaturase,PDS)、ζ-胡蘿卜素脫氫酶(ζ-carotene desaturase,ZDS)、番茄紅素ε環(huán)化酶(lycopene ε-cyclase,LCYE)、番茄紅素β環(huán)化酶(lycopene β-cyclase,LCYB)、β-羥基酶(β-hydroxylase,CHYB)和玉米黃質(zhì)環(huán)氧酶(zeaxanthin epoxidase,ZEP)。目前編碼這些酶的結(jié)構(gòu)基因已經(jīng)在柑橘[5]、越桔[6]、榴蓮[7]、番木瓜[8]以及芒果[9]等許多果實(shí)中得到克隆和鑒定,且發(fā)現(xiàn)不同物種果實(shí)中參與類胡蘿卜素合成代謝的關(guān)鍵基因存在差異。

        MADS-box轉(zhuǎn)錄因子是植物中研究最廣泛的轉(zhuǎn)錄因子家族之一[10]。MADS-box轉(zhuǎn)錄因子在植物所有器官的形成發(fā)生及植物生長發(fā)育的全過程都扮演了重要角色[11]。近年來,有關(guān)MADS-box轉(zhuǎn)錄因子參與果實(shí)成熟及品質(zhì)形成調(diào)控的研究已經(jīng)在番茄(Solanumlycopersicum)及多年生果樹上陸續(xù)報(bào)道。但有關(guān)MADS-box轉(zhuǎn)錄因子參與調(diào)控果實(shí)類胡蘿卜素合成與積累的研究還主要集中在模式植物番茄中。研究發(fā)現(xiàn),番茄果實(shí)成熟過程中類胡蘿卜素的積累由多個(gè)MADS-box轉(zhuǎn)錄因子共同調(diào)控,且不同MADS-box成員在果實(shí)成熟期間的表達(dá)模式存在差異,對類胡蘿卜素合成的調(diào)控機(jī)制也不同。TAGL1、SlMADS-RIN、SlMBP15和SlCMB1都是番茄中正調(diào)控果實(shí)類胡蘿卜素合成的轉(zhuǎn)錄因子,它們的沉默表達(dá)均減少了果實(shí)中類胡蘿卜素的積累,降低了PSY1和PDS表達(dá)水平[12-15]。但這4個(gè)MADS-box基因中只有TAGL1和SlMADS-RIN的表達(dá)量與果實(shí)成熟期間類胡蘿卜素的積累相一致;SlMBP15表達(dá)量在果實(shí)成熟期間呈先上升后下降趨勢,并在果實(shí)轉(zhuǎn)色期達(dá)最高值;而SlCMB1表達(dá)量在整個(gè)成熟過程中逐漸下降。SlMADS1、SlFYFL和SlMBP8是負(fù)調(diào)控番茄果實(shí)類胡蘿卜素積累的轉(zhuǎn)錄抑制因子,但它們在果實(shí)成熟期間表達(dá)模式不同,SlMADS1和SlFYFL表達(dá)量逐漸下降,而SlMBP8表達(dá)量反而逐漸上升[16-18]。SlMADS1通過抑制PSY1基因表達(dá)降低類胡蘿卜素的含量,SlMBP8對PSY1、PDS和ZDS基因均有轉(zhuǎn)錄抑制作用。

        類胡蘿卜素物質(zhì)的合成與積累是黃肉桃果實(shí)呈色的重要原因[19]。目前,有關(guān)桃果實(shí)類胡蘿卜素生物合成的分子機(jī)制已有一些研究。Cao等[20]報(bào)道黃肉桃果實(shí)采后貯藏期間類胡蘿卜素積累與PpPSY和PpCHYB的高表達(dá)密切相關(guān)。PpCHYB基因的差異表達(dá)也是導(dǎo)致套袋和不套袋桃果肉中類胡蘿卜素含量差異的重要原因[21]。轉(zhuǎn)錄調(diào)控層面進(jìn)行的桃果實(shí)類胡蘿卜素合成的有關(guān)研究鮮見報(bào)道。為此,本研究以黃肉桃金麗和白肉桃湖景為試驗(yàn)材料,克隆得到1個(gè)MADS-box基因PpMADS1,并對該基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析,通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)檢測PpMADS1基因在桃不同組織以及不同發(fā)育階段的表達(dá)情況,并利用雙熒光素酶試驗(yàn)分析PpMADS1對類胡蘿卜素合成基因PpPSY和PpCHYB啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用,旨在為揭示MADS-box轉(zhuǎn)錄因子對桃果實(shí)類胡蘿卜素合成的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制提供理論依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1 試驗(yàn)材料

        供試材料為浙江省寧波市德馨園生態(tài)農(nóng)業(yè)科技有限公司種植的金麗及湖景水蜜桃品種。采集試樣芽、幼葉、花、軟核果實(shí)、硬核果實(shí)等不同組織樣,S1(盛花后35~45 d)、S2(盛花后55~65 d)、S3(盛花后95~105 d)、S4(盛花后105~120 d)和S5(盛花后120~150 d)期不同成熟度果實(shí)。采集完的樣品于1 h內(nèi)運(yùn)送回實(shí)驗(yàn)室,將各組織及成熟度的樣品于液氮中研磨成粉末狀,儲存于-80℃超低溫冰箱中備用。

        1.2 試驗(yàn)方法

        1.2.1 RNA的提取及cDNA的合成 采用改進(jìn)的植物RNA提取試劑盒(Omega Bio-Tek公司,美國),根據(jù)使用說明提取不同組織和不同成熟度果實(shí)的總RNA。采用無RNase活性的DNaseI(Omega Bio-Tek公司,美國)去除總RNA中微量DNA污染,以備后續(xù)cDNA合成。采用NanoDro-p2000核酸蛋白分析儀(Thermo Fisher Scientific,美國)測定RNA樣品的濃度和純度。通過Gel DOC XR+凝膠成像儀(美國BIO-RAD)觀察提取的RNA條帶的完整性、大小和清晰度。按照SuperRT cDNA第一鏈合成試劑盒(江蘇康為世紀(jì)生物科技有限公司)說明書進(jìn)行cDNA合成。

        1.2.2 桃果實(shí)PpMADS1基因的克隆 利用桃基因庫(http://www.plantgdb.org/PeGDB/)以及桃果實(shí)發(fā)育時(shí)期轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫篩選獲得1個(gè)MAD-box基因家族候選基因ppa010595m,對其進(jìn)行BLAST(https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)比對,發(fā)現(xiàn)ppa010595m與預(yù)測的桃AGx3(GeneBank登錄號為XM_020561783.1)序列一致,因此將ppa010595m命名為PpMADS1基因。利用Primer 5.0軟件根據(jù)基因序列設(shè)計(jì)PCR擴(kuò)增特異性引物(表1),委托上海生物工程技術(shù)有限公司進(jìn)行引物合成。以合成的cDNA為模板,使用PCR技術(shù)擴(kuò)增PpMADS1基因的開放閱讀框(oper reading frame, ORF)。反應(yīng)體系:5.8 μL ddH2O,0.2 μL dNTP Mix,2 μL SF Buffer,1 μL cDNA模板(濃度約為250 ng·μL-1),上下游引物各0.4 μL,Phanta Super-Fidelity DNA pdynerase 0.2 μL。PCR反應(yīng)程序:94℃預(yù)變性3 min;95℃變性8 s,58℃退火30 s,72℃延伸1 min,30個(gè)循環(huán);72℃終延伸10 min。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)電泳檢測后,回收純化連接到pMD18-T 載體上,轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,過夜培養(yǎng),經(jīng)過菌落PCR挑取篩菌板上陽性克隆子,通過搖瓶培養(yǎng)提質(zhì)粒送華大基因測序。

        1.2.3PpMADS1的生物信息學(xué)分析 利用ExPASy Protparam在線軟件(https://web.expasy.org/protparam/)對PpMADS1轉(zhuǎn)錄因子的氨基酸序列、蛋白質(zhì)分子量、氨基酸組成、理論等電點(diǎn)、脂溶指數(shù)、親水指數(shù)等一級理化性質(zhì)進(jìn)行分析。利用SOPMA在線網(wǎng)站對PpMADS1蛋白的二級結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測。利用在線工具Protcomp9.0進(jìn)行亞細(xì)胞定位分析。利用swissmodel在線軟件(http://swissmodel.expasy.org)對蛋白的三級結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測。利用NCBI網(wǎng)站的BLAST工具對PpMADS1進(jìn)行同源性比對分析,利用NCBI、ClustalX2.0、GeneDoc軟件對PpMADS1與同源基因進(jìn)行氨基酸序列比對分析。利用進(jìn)化樹分析軟件MEG4.1(http://www.megasoft-ware.net)中的鄰接(neighbor-joining,NJ)法[執(zhí)行參數(shù):Poission correction correction、pairwise deletion和boot-strap(1 000次重復(fù))]對PpMADS1轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)行進(jìn)化樹分析。

        1.2.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析 采用CFX96 Touch Real-Time PCR系統(tǒng)(Bio-Rad,美國),利用熒光定量引物進(jìn)行3步法qRT-PCR擴(kuò)增。qRT-PCR 程序設(shè)置為95℃初始變性7 min,95℃保持15 s,45℃退火30 s,75℃保持15 s,進(jìn)行39個(gè)循環(huán)。以PpTEF2基因(引物見表1,退火溫度為59℃)作為內(nèi)參基因,設(shè)置陰性對照。采用2-ΔΔCT方法進(jìn)行qRT-PCR的數(shù)據(jù)分析,設(shè)置3次生物學(xué)重復(fù)。

        1.2.5 雙熒光素酶試驗(yàn) 利用高保真酶Phanta? Super-Fidelity DNA Polymerase(南京諾唯贊生物科技有限公司)和ClonExpress Ⅱ One Step Cloning Kit試劑盒(南京諾唯贊生物科技有限公司)將PpPSY和PpCHYB啟動(dòng)子序列插入pGreenII 0800-LUC載體的熒火蟲熒光素酶(firetty luciferase, LUC)上游作為報(bào)告基因,將PpMADS1的ORF序列重組到pGreenII 62-SK載體上作為效應(yīng)基因。陰性對照為空載體pGreenII 62-SK。構(gòu)建載體所需引物見表1。

        表1 引物序列

        農(nóng)桿菌侵染煙草及轉(zhuǎn)錄激活活性測定試驗(yàn)參考Ba等[22]的方法,效應(yīng)基因和報(bào)告基因培養(yǎng)液的混合比例為8∶1,用醫(yī)用針筒吸取混合液侵染葉片背面,置于恒溫培養(yǎng)箱3 d,利用雙熒光素酶報(bào)告分析試劑盒(Promega,美國)和Luminoskan Ascent化學(xué)發(fā)光分析儀(Thermo,美國)測定葉片侵染區(qū)中螢火蟲光素酶(firefly luciferase,LUC)與海腎熒光素酶(renilla luciferase,REN)催化產(chǎn)生的熒光信號的比值。PpMADS1對PpPSY和PpCHYB啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄調(diào)控活性通過LUC/REN比值來計(jì)算,歸一化為陰性對照,每個(gè)處理重復(fù)4次。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 PpMADS1基因的克隆及序列分析

        以桃果實(shí)cDNA為模板克隆得到長度為732 bp的PpMADS1的ORF序列見圖1。PpMADS1基因編碼的氨基酸一級結(jié)構(gòu)預(yù)測值見表2,PpMADS1蛋白酸堿性氨基酸組成比例和理論等電點(diǎn)顯示其呈堿性。不穩(wěn)定指數(shù)和脂溶指數(shù)表明PpMADS1不穩(wěn)定,具有較好脂溶性。親水指數(shù)表明PpMADS1表現(xiàn)出親水性。

        Note: M: Marker.

        表2 PpMADS1蛋白基本理化性質(zhì)

        2.2 PpMADS1蛋白的結(jié)構(gòu)分析

        如圖2所示,PpMADS1蛋白的二級結(jié)構(gòu)預(yù)測結(jié)果中α-螺旋占55.97%,β-轉(zhuǎn)角占4.12%,延伸鏈約占8.64%,無規(guī)則卷曲占31.28%,說明PpMADS1蛋白的二級結(jié)構(gòu)以α-螺旋為主要構(gòu)成元件,這與PpMADS1蛋白的三級結(jié)構(gòu)預(yù)測結(jié)果相一致(圖3)。對PpMADS1蛋白進(jìn)行亞細(xì)胞定位分析發(fā)現(xiàn),PpMADS1定位在細(xì)胞核中的可能性最大,符合轉(zhuǎn)錄因子的功能定位特征。

        圖2 PpMADS1蛋白的二級結(jié)構(gòu)預(yù)測

        圖3 PpMADS1蛋白的三級結(jié)構(gòu)預(yù)測

        2.3 PpMADS1氨基酸序列分析

        從NCBI數(shù)據(jù)庫中下載桃PpMADS1基因的同源序列,物種包括烏梅(Prunusmume),中國櫻桃(Prunuspseudocerasus),野黑櫻桃(Prunusserotina),粳稻(Kerriajaponica),蘋果(Malusdomestica),沙梨(Pyruspyrifolia),白梨(Pyrusxbretschneideri),番茄等。同源性分析發(fā)現(xiàn)PpMADS1與烏梅(XP_008225496.1)的氨基酸相似率最高,達(dá)到100%,與中國櫻桃(AIU94283.1)氨基酸序列相似率達(dá)到99.59%,僅有少量氨基酸存在差異。將PpMADS1與番茄中已被證明對類胡蘿卜素合成代謝有調(diào)控作用的基因SlMADS1[16](NP_001234380.1)、SlCMB1[15](XP_004237061.1)、SlMADS-RIN[13](NP_001234670.1)、SlFUL1[23](NP_001234173.2)、SlFYFL[17](AHG98096.1)、TAGL1[24](NP_001300859.1)、SlMBP15[14](NP_001352611.1)進(jìn)行同源分析,他們的同源性分別為43.95%、46.12%、44.50%、47.54%、46.55%、65.82%、38.64%。利用ClustalX及Genedoc軟件對PpMADS1氨基酸序列與其他6個(gè)物種的MADS蛋白氨基酸序列進(jìn)行比對(圖4),結(jié)果發(fā)現(xiàn)PpMADS1蛋白的N端包含MADS轉(zhuǎn)錄因子家族共有的特征MADS結(jié)構(gòu)域,同時(shí)包含了Ⅰ(intervening)region、k(keratin-like)-box以及相似的C端結(jié)構(gòu)[25-26],PpMADS1蛋白C端有含有植物AG-motif特征序列,這說明桃PpMADS1屬于MADS-box轉(zhuǎn)錄因子AG亞族。

        注:PpS:Prunus pseudocerasus. Ps: Prunus serotina. Kj: Kerria japonica. Ppy: Pyrus pyrifolia; Pxb: Pyrus x brets chn eideri. Md: Malus domestica.

        2.4 PpMADS1系統(tǒng)進(jìn)化樹分析蛋白

        為進(jìn)一步研究桃PpMADS1蛋白的系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系,用NJ法分析了與其同源性較高的扁桃、中國櫻桃、烏梅、蘋果、歐洲櫻桃、野黑櫻桃、白梨、東京櫻花、粳稻、沙梨相關(guān)MADS家族基因的進(jìn)化關(guān)系。由圖5可知,與PpMADS1蛋白親緣關(guān)系較近的是扁桃、東京櫻花和中國櫻桃。同為李屬的扁桃、烏梅、歐洲櫻桃、野黑櫻桃、中國櫻桃、東京櫻花聚為一類,粳稻、蘋果、沙梨和白梨聚于一類,表明不同植物間的系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系具有明顯的種屬特征。

        圖5 PpMADS1基因系統(tǒng)發(fā)育樹

        2.5 PpMADS1時(shí)空表達(dá)分析

        PpMADS1基因在金麗和湖景不同組織中的表達(dá)模式一致,即PpMADS1在芽、葉中幾乎不表達(dá),在花和果實(shí)中大量表達(dá),湖景花中PpMADS1表達(dá)量顯著高于金麗,金麗軟核和硬核果實(shí)中PpMADS1表達(dá)量都顯著高于湖景(圖6)。在2個(gè)品種桃果實(shí)成熟過程中PpMADS1表達(dá)量整體呈下降趨勢;成熟度S1時(shí)期,金麗果實(shí)中PpMADS1表達(dá)量顯著高于湖景;成熟度S2時(shí)期,湖景果實(shí)中PpMADS1表達(dá)量顯著高于金麗;成熟后期(S4~S5),湖景果實(shí)中PpMADS1表達(dá)量都顯著低于金麗果實(shí)(圖7)。

        注:不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。下同。

        圖7 不同成熟度果實(shí)中PpMADS1基因的表達(dá)

        2.6 PpMADS1轉(zhuǎn)錄因子對PpPSY和PpCHYB基因啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄調(diào)控特性

        利用同源重組方法將PpPSY和PpCHYB基因啟動(dòng)子融合LUC報(bào)告基因,將PpMADS1融合62-sk效應(yīng)基因(圖8-A)。雙熒光素酶試驗(yàn)結(jié)果如圖8-B所示,與空載體相比,PpMADS1轉(zhuǎn)錄因子顯著提高了PpPSY和PpCHYB啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄活性(P<0.05),說明PpMADS1轉(zhuǎn)錄因子對PpPSY和PpCHYB啟動(dòng)子具有轉(zhuǎn)錄激活作用。

        注:A: 載體構(gòu)建原理圖;B: PpMADS1對PpPSY、PpCHYB啟動(dòng)子的調(diào)控作用。

        3 討論

        MADS-box轉(zhuǎn)錄因子家族是目前在植物領(lǐng)域研究最廣泛的轉(zhuǎn)錄因子家族之一,調(diào)控著植物的營養(yǎng)生長和生殖生長過程,在果實(shí)成熟與品質(zhì)調(diào)控方面具有顯著作用[27]。本研究從桃果實(shí)中克隆得到一個(gè)桃MADS-box基因,將其命名為PpMADS1。MADS-box家族不同成員基因具有相對保守的序列,蛋白結(jié)構(gòu)存在相似性。生物信息學(xué)分析表明,PpMADS1編碼蛋白呈堿性,二級結(jié)構(gòu)中α-螺旋、β-轉(zhuǎn)角和無規(guī)則卷曲及三級結(jié)構(gòu)中的蛋白質(zhì)折疊的空間構(gòu)象具有較高的保守性,具有較好的脂溶性,蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定,且為親水蛋白,PpMADS1蛋白特征與其他植物MADS基因家族的研究結(jié)果基本一致[28]。亞細(xì)胞定位預(yù)測顯示PpMADS1定位于細(xì)胞核,具有轉(zhuǎn)錄因子特征。同源性分析表明,不同物種來源的MADS-box蛋白具有較高同源性,其中桃PpMADS1與扁桃、烏梅、中國櫻桃、東京櫻花等李屬M(fèi)ADS-box蛋白相似性較高。

        在模式植物番茄中研究發(fā)現(xiàn)果實(shí)成熟過程中類胡蘿卜素的積累是由多個(gè)MADS-box轉(zhuǎn)錄因子共同調(diào)控,包括正調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子TAGL1、SlMADS-RIN、SlMBP15、SlCMB1以及負(fù)調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子SlMADS1、SlFYFL和SlMBP8[12-18]。在這些番茄MADS-box轉(zhuǎn)錄因子中,桃PpMADS1與TAGL1序列相似度最高,達(dá)65.82%;PpMADS1與TAGL1氨基酸序列上都含有AG亞族特有的典型基序,因此都屬于MADS-box轉(zhuǎn)錄因子AG亞族[29];在不同組織中,PpMADS1與TAGL1基因在芽、葉中幾乎不表達(dá)[12],在花和果實(shí)中大量表達(dá);且成熟后期黃肉桃金麗果實(shí)比白肉桃湖景有更高的PpMADS1表達(dá)水平,這與Cao等[20]報(bào)道黃肉桃金麗果實(shí)含有更高類胡蘿卜素含量相一致,上述結(jié)果暗示PpMADS1可能具有與TAGL1相似的基因功能,即可能也對果實(shí)類胡蘿卜素的積累起正調(diào)控作用。八氫番茄紅素合成酶PSY被認(rèn)為是類胡蘿卜素合成的限速酶[30]。番茄果實(shí)中PSY基因超量表達(dá)可有效促進(jìn)果實(shí)類胡蘿卜素的積累[31]。TAGL1轉(zhuǎn)錄因子正是通過上調(diào)PSY1和PDS表達(dá)水平,促進(jìn)番茄果實(shí)類胡蘿卜素的積累[12]。董新甜等[21]研究發(fā)現(xiàn)套袋和不套袋桃果肉間PpCHYB基因的差異表達(dá)可能是導(dǎo)致兩種果實(shí)類胡蘿卜素含量差異的重要原因。Cao等[20]報(bào)道黃肉桃金麗果實(shí)采后貯藏期間類胡蘿卜素積累與PpPSY和PpCHYB基因的高表達(dá)密切相關(guān)。這些結(jié)果表明PpPSY和PpCHYB是黃肉桃果實(shí)類胡蘿卜素合成的關(guān)鍵基因。在此基礎(chǔ)上,本研究通過雙熒光素酶試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),PpMADS1轉(zhuǎn)錄因子對PpPSY和PpCHYB基因啟動(dòng)子具有轉(zhuǎn)錄激活作用,進(jìn)一步驗(yàn)證了PpMADS1轉(zhuǎn)錄因子可能通過調(diào)控PpPSY和PpCHYB基因表達(dá)促進(jìn)桃果實(shí)類胡蘿卜素合成。但PpMADS1轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控桃果實(shí)類胡蘿卜素合成與積累的具體分子機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究。

        4 結(jié)論

        本研究從金麗和湖景2個(gè)品種桃果實(shí)中克隆得到PpMADS1的ORF序列,長度為732 bp,編碼243個(gè)氨基酸。生物信息學(xué)分析表明PpMADS1蛋白可能為堿性,具有較好的脂溶性,不穩(wěn)定,表現(xiàn)出親水性,定位于細(xì)胞核。PpMADS1與烏梅的氨基酸序列相似率最高,達(dá)到100%,氨基酸序列具有典型的MADS家族特征結(jié)構(gòu)域及AG亞族特種基序,屬于MADS-box轉(zhuǎn)錄因子家族AG亞族基因。qRT-PCR和雙熒光素酶試驗(yàn)結(jié)果表明,PpMADS1轉(zhuǎn)錄因子可能通過調(diào)控PpPSY和PpCHYB基因表達(dá)促進(jìn)桃果實(shí)類胡蘿卜素合成。本研究為進(jìn)一步揭示PpMADS1轉(zhuǎn)錄因子在果實(shí)成熟過程中調(diào)控類胡蘿卜素合成代謝的分子機(jī)制提供了理論依據(jù)。

        猜你喜歡
        胡蘿卜素熒光素酶番茄
        番茄炒蛋
        秋茬番茄“疑難雜癥”如何挽救
        NNMT基因啟動(dòng)子雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)的構(gòu)建及其與SND1靶向關(guān)系的驗(yàn)證
        不同雙熒光素酶方法對檢測胃癌相關(guān)miRNAs靶向基因TIAM1的影響
        番茄果實(shí)“起棱”怎么辦
        重組雙熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒psiCHECK-2-Intron構(gòu)建轉(zhuǎn)染及轉(zhuǎn)染細(xì)胞螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶表達(dá)
        β-胡蘿卜素微乳液的體外抗氧化性初探
        中國果菜(2016年9期)2016-03-01 01:28:39
        人多巴胺D2基因啟動(dòng)子區(qū)—350A/G多態(tài)位點(diǎn)熒光素酶表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定及活性檢測
        RP-HPLC法測定螺旋藻中β-胡蘿卜素的含量
        論我國類胡蘿卜素保健食品的審評審批
        中文无码人妻有码人妻中文字幕| 九九精品国产99精品| 日本精品一区二区三区在线播放 | 国产精品无码素人福利| 永久免费av无码网站yy| 337p日本欧洲亚洲大胆色噜噜 | 丝袜美腿诱惑一二三区| 亚洲精品视频在线一区二区| 成人网站免费看黄a站视频| 老男人久久青草AV高清| 亚洲日本一区二区在线观看| 成人偷拍自拍视频在线观看| 午夜福利av无码一区二区| 亚洲AV电影天堂男人的天堂| 白色月光在线观看免费高清| 免费的小黄片在线观看视频| 亚洲中文字幕无码一久久区| 免费网站国产| 亚洲av日韩一区二三四五六七| 日本不卡在线视频二区三区| 亚洲男人av天堂午夜在| 在线a亚洲视频播放在线观看| 91桃色在线播放国产| 日本三级片在线观看| 色老头在线一区二区三区| 在线成人tv天堂中文字幕| 久久精品国产亚洲av天美| 精品一区二区三区免费视频| 大地资源中文第三页| 元码人妻精品一区二区三区9| 与漂亮的女邻居少妇好爽| 精品亚洲一区二区三区在线观看 | 风间由美性色一区二区三区| 在线观看av国产自拍| 一区二区人妻乳中文字幕| 色诱视频在线观看| 国产精品一区二区暴白浆| 国内精品熟女一区二区| 一区二区三区无码高清视频| 大陆极品少妇内射aaaaa| 动漫av纯肉无码av在线播放|