彭焱輝，王志強，徐陽純，許澤群，吳凌濤

[1.廣東省科學(xué)院，廣東省科學(xué)院測試分析研究所（中國廣州分析測試中心）廣東 廣州 510070；2.廣東省化學(xué)危害應(yīng)急檢測技術(shù)重點實驗室，廣東 廣州 510070]

白樺茸別稱樺樹菇、樺褐孔菌、西伯利亞靈芝，為銹革孔菌科纖孔菌屬[1,2]。主要分布于俄羅斯、芬蘭、波蘭和日本北海道等北緯40°~50°的地區(qū)和我國的黑龍江和吉林一帶[3-5]。

白樺茸含有大量的抗癌、降血壓、降血糖及復(fù)活免疫作用的植物纖維類多糖體[6-8]，其可以提高免疫細胞的活力、抑制癌細胞的擴散和復(fù)發(fā)、增進食欲、安神鎮(zhèn)靜、潤腸通便和消除疲勞等，在胃腸內(nèi)防止致癌等有害物質(zhì)的吸收，并促進排泄[9,10]。白樺茸是俄羅斯、波蘭和日本等國的民間常用藥物[11,12]，人們已從其菌核和菌絲中提取到一種糖蛋白（FIS-1）和一種水溶性多糖（F1），水溶性多糖有明顯的降血糖作用，一次性給藥50 mg/kg體重，3 h后，高血糖鼠的血糖含量下降近一半，且可維持48 h之久[13]，因此對白樺茸中多糖含量的研究有十分重要的意義。白樺茸中總糖包含水溶性糖和水不溶性多糖，對白樺茸中總糖測定方法及測定方法優(yōu)化是進行白樺茸多糖化學(xué)性質(zhì)和藥理研究的前提。本實驗采用紫外分光光度法測定白樺茸中總糖含量[14,15]，為深入研究與開發(fā)白樺茸的藥用和保健功效提供理論依據(jù)。

1 材料與儀器設(shè)備

1.1 主要材料

白樺茸鮮樣（產(chǎn)地分別為中國黑龍江省、吉林省，俄羅斯和日本，烘干、粉碎、過篩保存）；葡萄糖標準物質(zhì)（中國計量科學(xué)研究院，含量為99.6%）；鹽酸、苯酚、硫酸等（分析純，廣州化學(xué)試劑廠）；實驗室用水為去離子水。

1.2 儀器設(shè)備

紫外可見分光光度計（帶1 cm石英比色皿，島津UV-2450）；分析天平（精確度0.000 1 g）；DHG-9425A型電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）；高速多功能粉碎機（永康市久品工貿(mào)有限公司）。

2 實驗方法與分析

2.1 干燥白樺茸樣品的制備

取白樺茸試樣1 000 g，用剪刀剪成小塊，于50℃干燥6 h后逐步提高溫度至80℃，烘至發(fā)脆，冷卻，粉碎過0.9 mm篩，密封存儲于廣口瓶中，備用。

2.2 試樣液制備

精密稱取白樺茸干品0.25 g，置于錐形瓶中，加50 mL水和15 mL濃鹽酸，于沸水浴中水解回流3 h，冷卻至室溫后過濾，用水定容至250 mL。此溶液為供試品溶液。

2.3 對照品儲備液的制備

稱取0.104 0 g含量為99.6%的葡萄糖對照品，置于100 mL容量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成0.103 6 mg/mL的葡萄糖對照品儲備液。

2.4 測定波長的選擇

取配置好的標準溶液1 mL于10 mL比色管中，加入1.0 mL5%的苯酚溶液，混勻，然后快速加入5.0 mL硫酸，靜置反應(yīng)10 min，渦旋，將比色管置于30℃水浴中再反應(yīng)20 min，取出，冷卻至室溫。用1 cm比色杯在可見光區(qū)進行掃描，掃描波長見圖1，確定最大吸收波長490 nm。

圖1 葡萄糖標準溶液的掃描波長Fig.1 The scanning wavelength of the glucose standard solution

2.5 標準曲線的制定

分別吸取對照品儲備液0、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80和1.00 mL于7個10 mL比色管中，按2.4操作，在490 nm測定其吸光度值，所得數(shù)據(jù)回歸處理，得到標準曲線的線性擬合曲線見圖2，回歸方程為：y=0.0104x+0.0041，式中：x為被測樣品中葡萄糖的質(zhì)量；y為吸光度，相關(guān)系數(shù)為R2=0.9997。該分析方法線性關(guān)系良好，可以進行定量分析。

圖2 葡萄糖標準溶液線性擬合曲線Fig.2 The linear fitting curve of the glucose standard solution

2.6 試樣測定

取按2.2步驟制備的試樣液1 mL于10 mL比色管中，按2.4測定波長的選擇項下的方法，自加入1.0 mL 5%苯酚溶液起，測定樣品吸光度，并依標準曲線方程計算出試樣溶液中葡萄糖的量，進一步根據(jù)試樣液制備過程計算得到白樺茸供試品中總糖的含量。

2.7 方法學(xué)考察

2.7.1 中間精密性試驗 取配置好的標準溶液0.6 mL分別在不同日期、不同人員、不同儀器的情況下按2.4操作兩次，在490 nm下測定吸光度，計算6個測定結(jié)果的相對標準偏差（RSD），結(jié)果見表1。表1結(jié)果顯示RSD值為0.51%，精密性良好。

表1 測定方法的精密性Table 1 The precision of the assay method

2.7.2 穩(wěn)定性試驗 取配制好的標準溶液0.6 mL按2.3操作后，分別穩(wěn)定10、20、30、40、50、60 min后，在490 nm測定吸光度，結(jié)果見表2。表2結(jié)果顯示在60min內(nèi)基本穩(wěn)定，RSD值為0.32%，具有較好的穩(wěn)定性。

表2 測定方法的穩(wěn)定性Table 2 The stability of the assay method

2.7.3 重復(fù)性試驗 用建立的方法對同一批次的白樺茸進行6次測定，計算6次測定結(jié)果的相對標準偏差（RSD），結(jié)果見表3。

表3 測定方法的精密性Table 3 The intermediate precision of the determination method

從表3得出，RSD值為0.91%，符合一般方法的RSD＜5%的要求，該方法具有很好的重復(fù)性。

2.7.4 加標回收率測定 精密稱取同一白樺茸樣品0.25 g，按樣品制備方法制備試樣液6份，各取1 mL，分別置于6個10.0 mL具塞試管中，按表4所示分別精密加入葡萄糖對照品，按2.4測定波長的選擇項下的方法，從加入1.0 mL 5%的苯酚溶液起，依法測定吸光度，從標準曲線上讀出試樣溶液中含葡萄糖的重量，計算回收率，結(jié)果見表4。

表4 加標回收率實驗結(jié)果Table 4 The experimental results of recovery rates

從表4可知，加標回收率滿足一般檢測方法對回收率90%~110%的要求，表明本法準確可行。

3 不同產(chǎn)地的白樺茸總糖含量比較

取不同產(chǎn)地的白樺茸樣品各5批，按2.2步驟制備試樣液，按2.3步驟測定試樣液中總糖的含量，分析得出不同產(chǎn)地白樺茸的總糖含量見表5，產(chǎn)自中國黑龍江的白樺茸干品總糖含量為206 mg/g，產(chǎn)自吉林的白樺茸干品總糖含量為195 mg/g，產(chǎn)自俄羅斯的白樺茸干品總糖含量為253 mg/g，產(chǎn)自日本的白樺茸干品總糖含量為208 mg/g。

表5 不同產(chǎn)地白樺茸的總糖含量Table 5 The total sugar of Betula platy phylla from different habitats

4 結(jié)論

以鹽酸溶液對白樺茸試樣液酸解，水解物在硫酸作用下生成的糖醛衍生物與苯酚產(chǎn)生顯色反應(yīng)，采用葡萄糖作為對照品，用分光光度計在490 nm波長測定白樺茸中總糖的含量。該方法精密性、穩(wěn)定性和重復(fù)性良好，滿足樣品加標回收實驗，通過此方法能很好地測得不同產(chǎn)地的白樺茸中總糖的含量，其中產(chǎn)自俄羅斯的白樺茸總糖含量最高，為253 mg/g，吉林產(chǎn)地的白樺茸總糖含量最低，為195 mg/g。