劉志聰，張文浩

(韓山師范學(xué)院 生命科學(xué)與食品工程學(xué)院，廣東 潮州 521000)

1 引言

潮州“三寶”分別是老香黃，老藥桔、黃皮鼓，是潮州涼果特產(chǎn)中的極品，在潮汕地區(qū)的涼果界中，具有舉足輕重的地位，深受潮人的青睞并享譽(yù)海內(nèi)外，故被譽(yù)為潮州“三寶”。食品添加劑是一把“雙刃劍”，它能保持食品的新鮮，增加食品可食性，但同時若食用過多就會影響人體新陳代謝甚至危害健康[1]。所以添加劑的使用需要有一個量的控制，只要按照國家關(guān)于《食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》的相關(guān)規(guī)定，是不會對人體健康造成損害的，人們大可放心食用。潮州“三寶”在其工藝制作過程中常用的防腐劑有苯甲酸、山梨酸、和糖精鈉等，所以在其成品中防腐劑量的控制在質(zhì)控中尤為重要。

目前所見報道主要采用液相色譜法、氣相色譜法、離子色譜法等用于測定食品中的防腐劑、甜味劑和著色劑[2～7]。高效液相色譜因其應(yīng)用廣泛、分離效率高及定量準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)被廣泛應(yīng)用到食品中添加劑的檢測[8～12]。本文以潮州市售的潮州“三寶”(老香黃、老藥桔、黃皮)為研究對象，旨在建立和開發(fā)出適用于蜜餞食品中甜味劑色譜法和防腐劑的樣品前處理方法，并同時測定苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的高相液相色譜(HPLC法)。

2 材料與設(shè)備

2.1 實(shí)驗(yàn)材料

潮州“三寶”(老香黃、老藥桔、黃皮)，購于當(dāng)?shù)爻小?/p>

2.2 實(shí)驗(yàn)試劑

苯甲酸，山梨酸和糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)品、氫氧化鈉(分析純)、硼砂(分析純)、亞鐵氰化鉀(分析純)、乙酸鋅(分析純)、濃鹽酸(12 mol/L)、甲醇(色譜純)、乙酸銨(分析純)等。

2.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)備

高效液相色譜儀(Agilent 1200)、TGW16臺式高速離心機(jī)(長沙市英泰儀器有限公司)、電子天平FA2004(上海精密科學(xué)儀器有限公司)、組織搗碎機(jī)JJ-2(江蘇金壇市億通電子有限公司)、TKA-GenPure超純水系統(tǒng)(廣東丹利科技有限公司)、25 mL具塞比色管、80目篩、 0. 45 μm微孔濾膜等。

3 實(shí)驗(yàn)方法

3.1 操作條件

色譜柱：Agilent HC-18，150 mm×4.6 mm；柱溫:25 ℃;流速：1 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL；流動相：甲醇∶乙酸銨溶液(0.02 mol/L) =5∶95；檢測波長：230 nm。

3.2 樣品的預(yù)處理

稱取適量樣于85 ℃下烘干至恒重，然后用組織搗碎機(jī)粉碎過80目篩，取2. 0 g粉碎均勻樣品于25 mL具塞比色管中，加蒸餾水12.5 mL溶解浸泡，加入0.5 mol/L的氫氧化鈉溶液0.5 mL放置過夜。再加入5.0 mL飽和硼砂溶液，搖勻后，加入0.25 mol/L亞鐵氰化鉀溶液2.5 mL、1.0 mol/L乙酸鋅溶液2.5 mL，用1 mol/L鹽酸調(diào)節(jié)pH值至中性，加水定容至25.0 mL，振蕩使其充分混合，轉(zhuǎn)移至離心管中高速離心，取上清液，用0. 45 μm微孔濾膜過濾，收集濾液于樣品瓶中，做好標(biāo)簽備用。

3.3 液相色譜測定樣品

將樣品瓶放置于自動進(jìn)樣器，聯(lián)機(jī)設(shè)置相應(yīng)的色譜實(shí)驗(yàn)參數(shù)，待儀器穩(wěn)定后即可自動進(jìn)樣測定。分析完成后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析。

4 實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目

4.1 線性關(guān)系

以苯甲酸，山梨酸和糖精鈉對照品三種對照品的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液為母液，分別配制成 0.02、0.04、0.08、0.10(mg/mL)不同的濃度梯度，用液相色譜進(jìn)行上樣分析，以峰面積為縱坐標(biāo)，相對含量為橫坐標(biāo)繪制校正曲線，結(jié)果顯示3 種組分線性關(guān)系良好。結(jié)果如表1、圖1～7所示。

表1 線性關(guān)系

圖1 苯甲酸、山梨酸和糖精鈉色譜圖

圖2 苯甲酸色譜圖

圖3 山梨酸色譜圖

圖4 糖精鈉色譜圖

圖5 苯甲酸校正曲線

圖6 山梨酸校正曲線

圖7 糖精鈉校正曲線

4.2 穩(wěn)定性試驗(yàn)

以0.04 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品混合液按3.1的操作條件分別于 0、2、4、8、12時進(jìn)行檢測，測定峰面積，然后分別計算苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的峰面積RSD (相對標(biāo)準(zhǔn)偏差)(表2)。

表2 苯甲酸、山梨酸、糖精鈉5個時間段的峰面積

注：相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)=標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD)/計算結(jié)果的算術(shù)平均值(X)×100%，該值通常用來表示分析測試結(jié)果的精密度。

經(jīng)計算，所測得的苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的RSD值分別為0.072%、0.12%、0.097%，從結(jié)果可以看出，該檢測方法在12 h內(nèi)是穩(wěn)定的。

4.3 精密度試驗(yàn)

取黃皮樣品(經(jīng)測定，含有苯甲酸、山梨酸)，以3.1的操作條件重復(fù)進(jìn)樣測定5 次，計算出各次苯甲酸、山梨酸的含量，然后計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)(表3)。

表3 5次平行試驗(yàn)結(jié)果

經(jīng)5次平行試驗(yàn)，所測得的黃皮樣品中的苯甲酸、山梨酸的RSD值分別為0.29%、9.05%，計算結(jié)果表明該方法精密度良好。

注：對相對標(biāo)準(zhǔn)偏差的要求，一般主要取決于被測對象的含量，含量越高要求相對標(biāo)準(zhǔn)偏差越低。由于本次測定中黃皮中山梨酸含量較低，故相對標(biāo)準(zhǔn)偏差較大，但仍小于10%，屬于可被允許范圍。

4.4 回收率實(shí)驗(yàn)

以黃皮為本實(shí)驗(yàn)樣品，在其中加入濃度由低到高3個梯度的標(biāo)準(zhǔn)樣品，檢測后，計算各種添加劑的回收率，結(jié)果如表4。

表4 各種添加劑的回收率

5 結(jié)果討論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，用HPLC法可以同時測定蜜餞中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的含量，是一種簡單快速的測定方法。3種待測組分能有效分離且能準(zhǔn)確定量，適用范圍廣，準(zhǔn)確度好，可作為一種快捷方法用于蜜餞類食品的日常檢測。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，老香黃測定含有山梨酸和糖精鈉兩種儀器添加劑成分，含量分別為0.016 mg/g和0.64 mg/g；老藥桔測定含有山梨酸和糖精鈉兩種成分，含量分別為0.02 mg/g和2.3 mg/g：黃皮中含有苯甲酸和山梨酸兩種成分，含量分別為1.037 mg/g和0.013 mg/g。參照國家關(guān)于《食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》的標(biāo)準(zhǔn)，知苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的最大使用量分別為0.5 g/kg、0.5 g/kg和1 g/kg。對比得出本次實(shí)驗(yàn)所隨機(jī)購買市售的原材料中，老藥桔中的糖精鈉和黃皮中的苯甲酸含量超過了標(biāo)準(zhǔn)的最大使用量限定，這可能是由于在制作潮州“三寶”過程中，所使用的工藝流程沒有標(biāo)準(zhǔn)化，食品防腐劑的添加具有隨意性，所以對于其生產(chǎn)工藝流程的標(biāo)準(zhǔn)化尤為迫切。