于風(fēng)嶺，肖 亞，郭景淑玉，王 娟（通訊作者）

（濟(jì)南市兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科 山東 濟(jì)南 250022）

噬血細(xì)胞綜合征（hemophagocyic histiocytosis,HLH）[1]，是一種危害患者生命安全的，侵襲性免疫過度活化綜合征。該病多見于兒童，起病急，臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣，病情進(jìn)展迅速，治療難度大，病死率高。EB病毒（epstein-barr virus, EBV）[2]是一種十分多見的觸發(fā)性要素，主要免疫缺陷誘因包含惡性腫瘤以及艾滋病病毒（HIV）[3]感染。因免疫失衡和未受抑制的炎性反應(yīng)同時存在，是HLH的最大特征，所以這類患者的免疫功能出現(xiàn)多種缺陷。針對于以上研究背景，本文將分析兒童HLH中EB病毒感染的免疫功能狀態(tài)。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年12月—2020年12月本院收治年齡在9個月～12歲的EBV感染患兒共計102例。（1）納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡＜14歲的HLH患兒；②滿足HPS修訂版依據(jù)，通過分子水平識別HLH基因突變；③確診為EB感染。（2）排除標(biāo)準(zhǔn)：①臨床數(shù)據(jù)不完整，②中途退出不配合參與者。將EBV-IM患兒56例設(shè)定為A組，EBV-HPS患兒46例設(shè)定為B組，同時選取70名健康體檢兒童設(shè)定為C組。A組中男36例、女20例；B組中，男28例、女18例；C組中，男40名、女30名。三組一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具可比性。

1.2 方法

所有兒童均應(yīng)用乙二胺四乙酸抗凝管，收集靜脈血2 mL，標(biāo)本收集后在1 d內(nèi)經(jīng)過流式細(xì)胞儀，測定淋巴細(xì)胞亞群和計數(shù)。將標(biāo)本分成兩管對外周淋巴T/B細(xì)胞標(biāo)記，每一管中加入100μL標(biāo)本，分別加入到20μL的四色標(biāo)記單克隆抗體中。其中第1管為用于測定總T細(xì)胞和亞群；第2管為用于測定B細(xì)胞和K細(xì)胞。同時所有兒童均應(yīng)用促凝干燥管，采集靜脈血2 mL，放置凝固后，3 500轉(zhuǎn)/min，離心10 min，應(yīng)用免疫濁度測定法測定EBV-DNA拷貝數(shù)。

1.3 觀察指標(biāo)

對三組外周血淋巴細(xì)胞（peripheral blood lymphocyte,PBL）各項(xiàng)指標(biāo)及免疫球蛋白測定結(jié)果進(jìn)行對比分析。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)均輸入SPSS 18.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析，計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，行方差分析，數(shù)據(jù)均為雙側(cè)檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 三組PBL各項(xiàng)指標(biāo)分析

三組PBL各項(xiàng)指標(biāo)分析中，A組（EBV-IM）、B組（EBV-HPS）和C組（空白）淋巴細(xì)胞計數(shù)、淋巴細(xì)胞各亞群計數(shù)以及比值對比中，組間差異顯著（P＜0.05）。A組和其余兩組對比，淋巴細(xì)胞計數(shù)、CD3+T淋巴細(xì)胞計數(shù)、CD8+T淋巴細(xì)胞計數(shù)上升，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。B組和C組對比，淋巴細(xì)胞計數(shù)、B淋巴細(xì)胞計數(shù)、NK細(xì)胞計數(shù)下降，其余指標(biāo)上升，差異顯著（P＜0.05），見表1。

表1 三組PBL各項(xiàng)指標(biāo)分析（±s，×109/L）

組別 例數(shù) 淋巴細(xì)胞 CD3+T細(xì)胞 CD4+T細(xì)胞A組 56 9.78±0.22 8.20±0.02 1.28±0.18 B組 46 1.83±0.20 1.32±0.12 0.38±0.12 C組 70 3.60±0.07 2.32±1.02 1.23±0.20 F 43.73 38.82 23.94 P 0.0001 0.0001 0.0001

2.2 三組免疫球蛋白測定結(jié)果分析

A組、B組和C組IgG、IgM、IgA水平對比，組間差異顯著（P＜0.05），其中A組IgG、IgM、IgA相比于B組和C組上升，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；B組和C組上述指標(biāo)對比，差異不顯著（P＞0.05），見表2。

表2 三組免疫球蛋白測定結(jié)果（±s, g/L）

表2 三組免疫球蛋白測定結(jié)果（±s, g/L）

組別 例數(shù) IgG IgM IgA A組 56 11.93±4.04 1.50±0.02 1.60±0.05 B組 46 8.70±3.56 0.60±0.10 0.60±0.05 C組 70 7.25±1.72 0.90±0.06 0.70±0.07 F 8.12 26.60 25.98 P 0.0001 0.0001 0.0001

3.討論

臨床中EB病毒是一種較為易感的雙鏈DNA皰疹病毒，一般通過飛沫傳播。EB感染對淋巴細(xì)胞有所影響，尤其是B淋巴細(xì)胞。多項(xiàng)數(shù)據(jù)佐證，EB能夠?qū)細(xì)胞生長進(jìn)行改變，主要機(jī)制為：一旦感染了某一個B淋巴細(xì)胞后，EB基因組織將轉(zhuǎn)入到細(xì)胞核。此基因組主要通過游離基因的形式存在[4]。通過當(dāng)前數(shù)據(jù)證實(shí)，B細(xì)胞來源的淋巴瘤，是最為多見的EB感染惡性腫瘤，最常見為霍奇金淋巴瘤（HL）[5]。HL的病理生理學(xué)極為復(fù)雜，但是根本是B譜系細(xì)胞出現(xiàn)惡性克隆賦值，且多數(shù)患者的腫瘤細(xì)胞中出現(xiàn)EB[6]。EB所影響的淋巴瘤往往以較為單一的方法融合到EB的末端，說明全部細(xì)胞是通過單一被感染的細(xì)胞所克隆擴(kuò)增。一旦被撤去，則可能造成EB激活的免疫抑制劑或者應(yīng)用抗病毒后，發(fā)生器官移植后/甲氨蝶呤治療階段的淋巴瘤，暫時性消退[7]。

在本次結(jié)果中，A組、B組和C組淋巴細(xì)胞計數(shù)、淋巴細(xì)胞各亞群計數(shù)以及比值對比差異顯著（P＜0.05）。A組和其余兩組對比，淋巴細(xì)胞計數(shù)、CD3+T淋巴細(xì)胞計數(shù)、CD8+T淋巴細(xì)胞計數(shù)上升，差異顯著（P＜0.05）。B組和C組對比，淋巴細(xì)胞計數(shù)、B淋巴細(xì)胞計數(shù)、NK細(xì)胞計數(shù)下降，其余指標(biāo)上升，差異顯著（P＜0.05）。說明CD3+T淋巴細(xì)胞在RBV-IM患兒中具有高度的活化和增殖特征，有助于體內(nèi)病毒的清除，從而聯(lián)合B組的CD4+T細(xì)胞計數(shù)、B細(xì)胞計數(shù)和NK細(xì)胞一同下降，也說明EBVHPS患兒對EBV的免疫障礙，無法對其控制同時病毒清除。當(dāng)前，臨床已經(jīng)證實(shí)的免疫學(xué)機(jī)理，主要是免疫復(fù)合物、血小板自身抗體形成，采用分子模擬機(jī)制以及血小板表面糖蛋白，出現(xiàn)交叉反應(yīng)，或者補(bǔ)體激活系統(tǒng)造成血小板以及巨核細(xì)胞破壞度增強(qiáng)，其具體機(jī)制如下。（1）免疫復(fù)合物形成：一旦病毒感染了血清，則血清中多數(shù)的免疫球蛋白M（IgM）將增加，病毒抗原和抗體聯(lián)合形成免疫復(fù)合物，沉積到血小板以及巨核細(xì)胞表面中。（2）血小板自身抗體形成：EB是一種較強(qiáng)的多克隆激活劑，能夠?qū)Ω腥净蛘咿D(zhuǎn)染的B細(xì)胞激活，一旦病毒感染后，就會對B細(xì)胞刺激，從而和正常組織交叉，生成自身抗體?？寡“蹇贵w以及PAIgG上升，PAIgG直接聯(lián)合在血小板GPⅡb，造成血小板受損。（3）通過分子模擬以及血小板表面糖蛋白出現(xiàn)交叉反應(yīng)，病毒對血小板的膜糖蛋白結(jié)構(gòu)進(jìn)行調(diào)整，從而血小板抗原性產(chǎn)生變化，機(jī)體免疫清除。

綜上所述，EB病毒感染免疫功能測定有利于HLH和單核細(xì)胞增多癥疾病的臨床診斷。