張娟娟 王 錦 姜現(xiàn)瑞

（河西學(xué)院醫(yī)學(xué)院，甘肅 張掖 734000）

大黃為蓼科植物唐古特大黃、掌葉大黃或藥用大黃的根莖。主產(chǎn)于我國青海、甘肅、四川等地；一般秋末莖葉枯萎或次春發(fā)芽前采挖，除去細(xì)根，刮去外皮，切瓣或段，繩穿成串干燥或直接干燥可得。其功效有瀉下攻積，清熱瀉火，涼血解毒，逐瘀通經(jīng)，利濕退黃。用于實(shí)熱積滯便秘，目赤咽腫，癰腫疔瘡，腸癰腹痛，瘀血經(jīng)閉，產(chǎn)后瘀阻，跌打損傷，濕熱痢疾，黃疸尿赤，淋證，水腫；外治燒燙傷[1]。據(jù)報道[2-3]，大黃的活性成分主要是蒽酮類、多糖類等，可通過抗病毒作用、消炎作用、清除體內(nèi)氧自由基的作用等，對機(jī)體的消化、免疫、心血管及泌尿系統(tǒng)產(chǎn)生一定的影響，乃至對慢性腎功能衰竭也有一定的治療作用。也有動物實(shí)驗(yàn)[3-4]證明大黃可通過促進(jìn)大腸蠕動、離子分泌和減少水分吸收的機(jī)制發(fā)揮瀉下的功效。本研究利用大黃“瀉下攻積”的特點(diǎn)，取實(shí)驗(yàn)用家兔的離體空腸平滑肌，采用平滑肌灌流的方法，觀察在不同濃度條件下大黃水煎液對平滑肌收縮作用的影響，同時，對比大黃水煎液與乙酰膽堿對平滑肌收縮作用的影響及大黃水煎液對阿托品抑制平滑肌收縮后的影響，具體分析大黃水煎液作用于平滑肌的可能機(jī)制。

1 設(shè)備、藥品與方法

1.1 設(shè)備 BL-420生物信號采集系統(tǒng)（成都泰盟），SV-8離體組織器官恒溫灌流裝置（成都泰盟），F(xiàn)T-100傳感器（成都泰盟），HW-500恒溫水浴槽（成都泰盟），一般手術(shù)操作器械套裝。

1.2 藥品 乙酰膽堿（上海笛柏生物科技有限公司、上海笛柏化學(xué)品技術(shù)有限公司，生產(chǎn)批號：P/NK900017），阿托品（天津遂成藥業(yè)股份有限公司，批號：1702231），0.9%生理鹽水（天津益仁達(dá)，批號：20160620），10%氯化鉀（雙雙化工，批號：20150402），10%硫酸鎂（天津凱信，批號：20170603），5%磷酸二氫鈉（天津致遠(yuǎn)，批號：20161225），碳酸氫鈉（天津凱信，批號：20161208），氯化鈣（天津致遠(yuǎn)，批號：20170413），葡萄糖（天津致遠(yuǎn)，批號：20170310）。

1.3 臺氏液配置 1 L臺氏液：NaCl 8 g、NaHCO31 g、10%KCl 2 mL、CaCL21.8 mL、10% MgSO42.6 mL、5% NaH2PO41.3 mL、葡萄糖1 g。

1.4 大黃水煎液配置 大黃50 g（購自張掖市惠仁堂連鎖藥店），加水過藥面200 mL，浸泡30 min，煎煮至100 mL，即得0.5 g/mL的大黃水煎液[5]。

1.5 實(shí)驗(yàn)動物 本研究起自2019年12月，計劃于2021年12月結(jié)束。新西蘭大白兔10只，于2020年9月購自張掖市譽(yù)誠醫(yī)藥生物科技有限公司，雌雄不限，體質(zhì)量1.5～2.0 kg。實(shí)驗(yàn)前12 h禁食，飲水不限。

1.6 離體平滑肌標(biāo)本制備 用木槌擊打家兔頭部致昏迷后，沿腹中線迅速開腹，取空腸腸段（1.5～2.0 cm）數(shù)段，置預(yù)先準(zhǔn)備好的4 ℃臺氏液中備用[6-7]。

1.7 離體空腸平滑肌收縮曲線的描記 將腸段隨機(jī)分成兩組，即對照組和實(shí)驗(yàn)組。把預(yù)先準(zhǔn)備好的37 ℃的臺氏液注入灌流浴槽中，固定腸管一端于張力換能器上，另一端用通氣鉤鉤住，然后放入含10 mL臺氏液的恒溫水浴槽中。將張力換能器與BL-420生物信號采集系統(tǒng)的通道相連。點(diǎn)擊機(jī)能實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目選項(xiàng)，選中“消化道平滑肌的生理特性”模塊。設(shè)置相應(yīng)的調(diào)控參數(shù)：時間是3 s，描記速度是2.50 s/div，濾波F是50 Hz，增益G是1 mV，最后開始運(yùn)行并描記。

在離體平滑肌進(jìn)行自主收縮的情況下，先觀察10 min。然后將0.5 g/mL的大黃水煎液0.1 mL、0.2 mL、0.3 mL和0.4 mL分別逐次加入相應(yīng)的水浴槽中（預(yù)先抽出與所加大黃水煎液等量的臺氏液），使含10 mL臺氏液的恒溫水浴槽中的藥物濃度分別為0.05 g/10 mL、0.1 g/10 mL、0.15 g/10 mL、0.2 g/10 mL。并重復(fù)實(shí)驗(yàn)10次，記錄離體平滑肌的收縮變化曲線。把標(biāo)本用臺氏液反復(fù)沖洗3次后，滴加濃度為10-4mol/L阿托品0.2 mL，2 min后滴加0.02 g/mL大黃水煎液0.2 mL，記錄離體平滑肌的收縮變化曲線并沖洗干凈。注意在不同劑量及不同藥物處理標(biāo)本出現(xiàn)反應(yīng)后，要用臺氏液反復(fù)沖洗平滑肌標(biāo)本3次，待離體平滑肌運(yùn)動恢復(fù)穩(wěn)定后再進(jìn)行下一個操作處理[8-9]。

1.8 數(shù)據(jù)記錄 在進(jìn)行不同操作處理時，先描記每個操作后1 min內(nèi)的全部曲線，其收縮波的平均張力即收縮力（g），其收縮波的個數(shù)即收縮頻率（次/分）。于給藥前及給藥后2 min，分別描記收縮幅度和收縮頻率[9]。

1.9 數(shù)據(jù)處理 利用SPSS Statistics20.0軟件對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，全部數(shù)據(jù)表示為（），并采用t檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 正常離體平滑肌收縮曲線 在恒溫水浴的條件下，正常對照組平滑肌的活動幅度、頻率及張力隨著時間的延長比較穩(wěn)定，其波形規(guī)律而穩(wěn)定，表現(xiàn)為具有自動節(jié)律性、伸展性及緊張性的收縮等特性。見圖1。

圖1 正常家兔離體空腸平滑肌收縮曲線

2.2 不同濃度的大黃水煎液對家兔離體平滑肌收縮作用的影響 濃度為0.005 g/mL、0.01 g/mL大黃水煎液組與正常對照組比較，其收縮幅度有明顯的差異（P＜0.05），濃度為0.015 g/mL、0.02g/mL大黃水煎液時家兔離體空腸平滑肌收縮幅度與正常對照組相比無明顯差異（P＞0.05），濃度為0.005 g/mL、0.01 g/mL、0.015 g/mL大黃水煎液組與正常對照組比較收縮頻率有明顯的差異（P＜0.001、P＜0.001和P＜0.01）。濃度為0.02 g/mL大黃水煎液時家兔離體空腸平滑肌收縮頻率與正常對照組比較無明顯差異（P＞0.05），濃度為0.01 g/mL大黃水煎液組和濃度為0.005 g/mL大黃水煎液組比較收縮頻率有明顯的差異（P＜0.01）。通過不同濃度大黃水煎液組互相對比，其中濃度為0.01 g/mL大黃水煎液促進(jìn)家兔離體空腸平滑肌收縮功能的效果最明顯。見表1、表2和圖2。

表1 不同濃度大黃對空腸平滑肌收縮振幅的影響（，n=20）

表1 不同濃度大黃對空腸平滑肌收縮振幅的影響（，n=20）

注：與正常對照組對比，aP＜0.05；與0.005 g/mL對照組。

表2 不同濃度大黃對空腸平滑肌收縮頻率的影響（，n=20）

表2 不同濃度大黃對空腸平滑肌收縮頻率的影響（，n=20）

注：與正常對照組對比，aP＜0.01，bP＜0.001；與0.005 g/mL對照組對比，cP＜0.05，dP＜0.01。

圖2 不同濃度大黃水煎液對離體空腸平滑肌收縮功能影響曲線（A：0.005 g/mL大黃水煎液對離體空腸平滑肌收縮功能影響曲線；B：0.01 g/mL大黃水煎液對離體空腸平滑肌收縮功能影響曲線；C：0.015 g/mL大黃水煎液對離體空腸平滑肌收縮功能影響曲線；D：0.02 g/mL大黃水煎液對離體空腸平滑肌收縮功能影響曲線）

2.3 大黃水煎液對離體家兔空腸平滑肌阿托品抑制作用的影響 0.2 mL阿托品（10-4mol/L）使空腸平滑肌收縮功能抑制，緊張度減弱，表現(xiàn)為收縮曲線頻率減慢，收縮幅度減弱。2 min后滴加0.01 g/mL大黃水煎液0.2 mL，收縮頻率增加，幅度增強(qiáng)。大黃水煎液可以改善阿托品對家兔離體空腸平滑肌的抑制作用，使空腸平滑肌興奮。見圖3。

圖3 0.01 g/mL大黃水煎液對阿托品抑制后的家兔離體空腸平滑肌的作用曲線

3 討論

3.1 不同濃度大黃水煎液對家兔離體空腸平滑肌的促進(jìn)作用 在生理狀態(tài)下，腸道通過持續(xù)不斷的蠕動，推動食糜逐漸向遠(yuǎn)端移動，進(jìn)而消化和吸收其中的營養(yǎng)物質(zhì)，這是腸道蠕動最基本也是最重要的作用。小腸的運(yùn)動方式包括蠕動、緊張性收縮和分節(jié)運(yùn)動等，都是小腸平滑肌活動具體而獨(dú)特的外部表現(xiàn)。要判斷小腸興奮性的大小，可以通過描記腸道平滑肌收縮張力的大小及收縮頻率的快慢來判斷[10]。失去外來神經(jīng)支配的離體空腸平滑肌，在其環(huán)行肌黏膜下依然存在具有活性的壁內(nèi)神經(jīng)叢。其與腸肌絲Cajal間質(zhì)細(xì)胞可以啟動和傳導(dǎo)小腸慢波活動。而且，Cajal間質(zhì)細(xì)胞很容易受所處環(huán)境的離子水平、激素水平及神經(jīng)遞質(zhì)等作用的影響而產(chǎn)生自發(fā)活動，因此，只要存在適宜的條件，空腸平滑肌就能夠保持其收縮特性及其壁內(nèi)神經(jīng)叢的作用[11-12]。

大黃具有“瀉下攻積”的功效，是中醫(yī)臨床常用的瀉下藥，國外常將其作為輕瀉劑?，F(xiàn)在，國內(nèi)醫(yī)學(xué)界對大黃的認(rèn)識已經(jīng)非常明確，已發(fā)現(xiàn)的植物化學(xué)成分結(jié)構(gòu)已超過160個，主要集中在蒽醌類、蒽醌衍生物類、蒽酮類、有機(jī)酸及糖類等[13]。其中具有瀉下的主要成分是番瀉苷A和大黃酸苷。于向鵬等[14]發(fā)現(xiàn)，大黃對家兔離體小腸平滑肌收縮活動有促進(jìn)作用，本文實(shí)驗(yàn)通過恒溫灌流的方法，發(fā)現(xiàn)不同濃度的大黃水煎液均能有效促進(jìn)家兔離體空腸平滑肌的收縮作用，使平滑肌收縮頻率加快，幅度增大。不同濃度大黃水煎液組之間相互對比，其中以濃度為0.01 g/mL大黃水煎液促進(jìn)家兔離體空腸平滑肌收縮功能的效果最明顯；0.005 g/mL、0.015 g/mL組也有不同程度的促進(jìn)。但0.02 g/mL大黃水煎液組的促進(jìn)作用明顯減弱。究其原因，可能是大黃的有效成分之一大黃素增加空腸組織中組胺的含量，并促進(jìn)Cl-的分泌，使得腸道內(nèi)的水分增加，起到一定的通腸潤便的作用[3]?；蛘呖赡苁谴簏S蒽酮和大黃酸蒽酮苷在小腸吸收，作用于腸黏膜神經(jīng)叢，從而使小腸運(yùn)動增強(qiáng)[10]。也可能是大黃水煎液抑制了Na+-K+-ATP酶的活性，通過刺激腸壁使其反射性推進(jìn)空腸蠕動幅度的增強(qiáng)[4]。

3.2 大黃水煎液能阻斷阿托品對平滑肌的抑制作用 節(jié)后膽堿能神經(jīng)支配的效應(yīng)細(xì)胞上有一種M型受體，阿托品可阻斷其作用，使小腸平滑肌的收縮幅度減弱，收縮頻率減小。呂金勝等[15]發(fā)現(xiàn)阿托品可以拮抗大黃增加腸道平滑肌的收縮頻率。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，加入大黃水煎液后，阻斷了阿托品對家兔離體空腸平滑肌收縮功能的抑制。證明大黃可以改善阿托品對家兔離體空腸平滑肌收縮功能的抑制作用，這與呂金勝等的研究結(jié)果一致，其作用機(jī)制還有待于進(jìn)一步的研究。

4 結(jié)論

①實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：不同濃度條件下的大黃水煎液均能促進(jìn)家兔離體空腸平滑肌的收縮頻率和收縮幅度，而且隨著濃度的增加其促進(jìn)作用先增強(qiáng)后減弱；其中濃度為0.01 g/mL大黃水煎液促進(jìn)家兔離體空腸段平滑肌的效果最明顯。②實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：大黃水煎液可以改善阿托品對家兔離體空腸平滑肌的抑制作用，其作用機(jī)制還有待于進(jìn)一步的研究。