◎ 莫勤妹

（崇左市農(nóng)業(yè)綜合檢測中心，崇左市農(nóng)業(yè)生態(tài)與資源保護站，廣西 崇左 532200）

廣西崇左市處于北回歸線以南，屬于亞熱帶濕潤季風(fēng)氣候，土地肥沃，光照和降水都充足，適合種植柑橘，而檢測柑橘農(nóng)藥殘留的方法用時較長，耗材使用較多，為了使流入市場的柑橘可以放心食用，建立快速、精準檢測柑橘中的農(nóng)藥殘留方法迫在眉睫。本文建立了用氣相色譜-質(zhì)譜同時測定柑橘中9種有機磷類農(nóng)藥殘留的分析方法，供農(nóng)殘檢驗檢測機構(gòu)參考。

1 材料與方法

1.1 儀器和試劑

三重四極桿氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀GCMS-TQ8030（日本島津公司），AOC-20i自動進樣器，IE離子源；色譜柱：SH-Rtx-5siIMS（30 m×0.25 mm，0.25 μm），最高使用溫度350 ℃；湘儀高速離心機H1850；多管混合漩渦器Multim-Tubevortexer。

乙腈，色譜純，德國默克股份有限公司；丙酮，色譜純；甲拌磷、樂果、毒死蜱、水胺硫磷、甲基異柳磷、氟蟲腈、克百威、治螟磷及三氯殺螨醇標(biāo)準品，濃度均為100 μg·mL-1，均購自農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護科研監(jiān)測所。

1.2 實驗方法

1.2.1 標(biāo)準溶液配制

將9種濃度為100 μg·mL-1的農(nóng)藥標(biāo)準物質(zhì)用丙酮稀釋到10 μg·mL-1單標(biāo)，各取1 mL母液轉(zhuǎn)移到10 mL容量瓶中，用丙酮定容，充分混勻，配制成1 μg·mL-1的混合標(biāo)準溶液。本次實驗研究要檢測的農(nóng)藥殘留覆蓋的種類較多，難以尋找合適的同位素內(nèi)標(biāo)和保護劑，因此采用基質(zhì)匹配標(biāo)準溶液法[1]。用柑橘作為基質(zhì)，配制成 1.00 μg·mL-1、0.15 μg·mL-1、0.10 μg·mL-1、0.05 μg·mL-1的混合基質(zhì)標(biāo)準工作液備用。

1.2.2 樣品制備

將樣品切碎，充分混勻，用四分法和對角線法反復(fù)取樣后，放入勻漿機器破碎成勻漿。把每個樣（果漿）裝入2個規(guī)格符合要求的樣品瓶，分正、副樣兩份，每份不少于300 g，密封并標(biāo)記，置于-20 ℃冰箱保存。

1.2.3 樣品提取、純化濃縮

稱取10 g試樣（精確至0.01 g）于50 mL塑料離心管，向待測樣品的離心管中加入10 mL乙腈、鹽包（內(nèi)含MgSO44 g、NaCl 1 g、檸檬酸鈉1 g、檸檬酸氫二鈉0.5 g）后蓋上離心管蓋，劇烈振蕩1 min后，將離心管以2 500 r·min-1的速率振蕩1 min再轉(zhuǎn)到高速離心機以7 000 r·min-1的速率離心3 min。抽取1.50 mL上清液轉(zhuǎn)入凈化管中（內(nèi)有無水MgSO4150 mg、SPE粉末50 mg和C18 50 mg），劇烈振搖1 min，漩渦振蕩1 min，離心5 min。取上清液過0.22 μm微孔濾膜，收集于1.5 mL進樣瓶中，供GC-MS/MS測定。

1.2.4 色譜設(shè)定條件

進樣口溫度：250 ℃；柱箱溫度：50 ℃；進樣方式：無分流進樣，1.5 min后打開分流閥和隔墊吹掃閥；流量控制方式：總流量30 mL·min-1，柱流量30.0 mL·min-1，線速度47.2 cm·s-1，吹掃流量5.0 mL·min-1，總程序17.00 min；升溫程序具體見表1。

表1 柱箱升溫程序表

1.2.5 質(zhì)譜設(shè)定條件

離子轟擊源：70 eV；離子源溫度：200 ℃；GC-MS接口溫度：250 ℃；溶劑延遲時間：4 min；檢測器電壓相對于調(diào)諧結(jié)果為0.6 kV，在70 eV/Sim掃描和監(jiān)測的電子轟擊源中為每個組件選擇一個定量離子對和兩個定性離子對。

2 結(jié)果與分析

2.1 前處理方法的選擇

本方法的前處理主要針對GB 23200.113—2018中蔬菜水果食用菌方法進行優(yōu)化。在GB 23200.113—2018方法中選用的是含MgSO4（900 mg）及PSA（150 mg）的凈化離心管（樣品顏色較淺時）和含有MgSO4（885 mg）、PSA（150 mg）及GCB（15 mg）的凈化離心管（對于顏色較深的試樣），而本方法前處理采用的是含有無水MgSO4（150 mg）、SPE粉末（50 mg）和C18（50 mg）凈化管，另外，本方法比GB 23200.113—2018減少了水浴氮吹的步驟，具有操作簡單，使用耗材較少的優(yōu)勢。為了檢驗本文前處理方法的準確性，對兩種前處理方法采取了加標(biāo)回收試樣的方法進行比較。加標(biāo)最終濃度為0.15 mg·kg-1時，本方法和標(biāo)準方法的回收率情況如表2所示。

表2 兩種前處理方法加標(biāo)回收率的比較表

本方法前處理簡便，省時省耗材，根據(jù)表2兩種前處理方法加標(biāo)回收率的比較表得知本方法前處理加標(biāo)回收情況良好，適用于大批量快速定量分析。

2.2 保留時間和離子對的確定

將配制的10 μg·mL-1正構(gòu)烷烴上機，采用Q3Scan掃描方式進行掃描，采集C9～C33。利用儀器自帶的農(nóng)藥庫校準9種農(nóng)藥的保留時間，選擇響應(yīng)強度較高的3個離子，其中1個作為定量離子，2個作為定性離子，根據(jù)選擇的離子對進行碰撞能量和碰撞電壓的優(yōu)化[2]。例如，治螟磷的定量離子和2個定性離子色譜圖如圖1所示。

圖1 治螟磷定量色譜圖

質(zhì)譜的圖譜中每個質(zhì)譜峰表示1種質(zhì)核比的離子，根據(jù)質(zhì)譜峰的位置進行定性[3]。將配制好的1 μg·mL-1混合標(biāo)準溶液按照優(yōu)化好的上機條件進行MRM掃描，得到的標(biāo)準色譜圖如圖2所示。

圖2 9種農(nóng)藥標(biāo)準圖譜圖

2.3 標(biāo)準曲線和線性關(guān)系

將配制好的 0.05 μg·mL-1、0.10 μg·mL-1、0.15 μg·mL-1、1.00 μg·mL-1混合標(biāo)液上機。在1.2.4色譜設(shè)定條件和1.2.5質(zhì)譜設(shè)定條件下進行測定。結(jié)果表明，各組分的濃度與峰面積的線性關(guān)系良好，除氟蟲腈相關(guān)系數(shù)為0.998以外，其余組分的相關(guān)系數(shù)都在0.999以上。線性方程和相關(guān)系數(shù)如表3所示。

表3 線性方程和相關(guān)系數(shù)表

2.4 加標(biāo)回收試驗效果

使用上述方法檢測添加濃度為0.05 mg·kg-1、0.10 mg·kg-1、0.15 mg·kg-1、0.20 mg·kg-14 個梯度的加標(biāo)回收試驗，柑橘種9種農(nóng)藥回收率情況見表4。

表4 不同添加值下的各農(nóng)藥回收率情況表

由表4可知，柑橘種9種農(nóng)藥回收率為70%～120%，除了克百威、樂果穩(wěn)定性較差（回收率在70%左右）以外，其他目標(biāo)化合物回收率情況良好。

2.5 實際樣品結(jié)果

本次實驗共16個樣本，分別來自市場以及基地。樣品按照1.2進行處理得到待測液后，按照1.2.4色譜設(shè)定條件和1.2.5質(zhì)譜的設(shè)定條件上機，進樣1 μL得到色譜圖，按照峰面積計算結(jié)果。本次實驗共有5個樣品檢出農(nóng)藥殘留，檢出克百威5次，三唑磷2次，根據(jù)GB 20769—2019標(biāo)準要求，均未超標(biāo)。本方法與標(biāo)準方法進行比較，誤差較小，相對偏差符合要求。

3 結(jié)論

GC-MS/MS法中的Q3Scan和MRM測定方式基線噪聲小、干擾少，具有與GC-FPD或GC-NPD法相當(dāng)甚至更高的靈敏度[4]。本方法在保證結(jié)果可靠性的前提下簡化操作步驟，縮短了提取、純化、濃縮過程的時間，操作簡單，準確性、精密度和靈敏度都比較好，結(jié)果可靠，符合農(nóng)藥殘留分析實驗的要求[5]，因此氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀可以同時對柑橘中治螟磷、甲胺磷、甲基異柳磷、毒死蜱等9種農(nóng)藥同時進行定量測定和定性確證，且線性關(guān)系良好，使用耗材量少，可以用于柑橘類水果農(nóng)藥殘留大批量快速檢測。