王劭

（欽州市靈山縣人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科，廣西 欽州 535400）

0 引言

目前，人類已經(jīng)探明的惡性腫瘤疾病已經(jīng)超過100余種，此類疾病一般是指身體細(xì)胞發(fā)生突變后，會(huì)不受身體控制地不斷分裂、擴(kuò)大、轉(zhuǎn)移，最終侵蝕機(jī)體健康細(xì)胞和組織，使患者在承受巨大痛苦后死亡。盡管現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的發(fā)達(dá)程度正在逐漸提升，但對(duì)于很多中晚期惡性腫瘤疾病仍然無法根治，如人們熟知的肝癌、骨髓癌、肺癌等，發(fā)展至終末期后只能采取保守治療，盡量維持延長(zhǎng)患者的生命。為了提高疾病診斷的準(zhǔn)確率，檢驗(yàn)過程旨在檢測(cè)腫瘤標(biāo)生物標(biāo)志物是否存在。腫瘤生物標(biāo)志物是由腫瘤細(xì)胞直接產(chǎn)生或由肺腫瘤細(xì)胞經(jīng)過腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)后產(chǎn)生的物質(zhì)，對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)后，可對(duì)腫瘤是否存在、發(fā)病過程及預(yù)后作出判斷[1]。不同的檢測(cè)方式在檢測(cè)準(zhǔn)確性方面也存在一定的差異。本研究旨在分析化學(xué)發(fā)光免疫法應(yīng)用于腫瘤生物標(biāo)志物檢驗(yàn)時(shí)的效果，現(xiàn)對(duì)研究過程進(jìn)行梳理。

1 資料與方法

1.1 一般資料。選取2019年1月至2021年2月在欽州市靈山縣人民醫(yī)院進(jìn)行治療，經(jīng)過病理檢測(cè)確診為原發(fā)性單一惡性腫瘤疾病的患者60例，將之納入觀察組；選取同期在本院接受體檢的健康人群60例納入觀察組。觀察組：①性別分布：男33例，女27例；②年齡34～68歲，平均（51.45±2.48）歲；③原發(fā)性腫瘤疾病分布：胃癌10例、肺癌7例、卵巢癌10例、肝癌5例、胰腺癌8例、乳腺癌5例、子宮肌瘤6例、其他9例。對(duì)照組：①性別分布：男32例，女28例；②年齡33～69歲，平均（51.52±2.54）歲。經(jīng)比對(duì)兩組受檢人群的性別及年齡分布情況均差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理檢測(cè)，已經(jīng)確診為原發(fā)性惡性腫瘤疾病的患者；②單一原發(fā)性惡性腫瘤疾病患者；③病情尚未發(fā)展至晚期的患者；④本次研究符合醫(yī)學(xué)倫理、患者知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①病情已發(fā)展至終末期，癌細(xì)胞已經(jīng)發(fā)生遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移，預(yù)計(jì)生存期不足3個(gè)月的患者；②病歷資料完善程度不符合本研究要求的患者。

1.2 研究方法簡(jiǎn)析。抽取兩組人群的靜脈血，基于化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)法進(jìn)行腫瘤生物標(biāo)志物檢驗(yàn)，具體流程如下：

（1）采血前的準(zhǔn)備工作：①由醫(yī)護(hù)人員與受檢者進(jìn)行耐心、細(xì)致地溝通，針對(duì)受檢者提出的一切問題進(jìn)行詳細(xì)解答，避免受檢者因緊張、恐懼等消極心緒而影響采血；②制定應(yīng)急處理預(yù)案，主要針對(duì)受檢者在采血期間可能出現(xiàn)的暈針、暈血現(xiàn)象進(jìn)行緊急處理。如受檢者發(fā)生眩暈情況時(shí)，如果穿刺針已經(jīng)插入受檢者體內(nèi)，則醫(yī)護(hù)人員應(yīng)該立刻拔出針頭，對(duì)穿刺點(diǎn)位進(jìn)行止血處理，幫助受檢者調(diào)整至平臥姿勢(shì)，通過吸入芳香酊、按壓人中穴位的方式，使其盡快蘇醒。此外，可叮囑受檢者準(zhǔn)備一些牛奶、香蕉等食品（抽血室可準(zhǔn)備一些葡萄糖溶液），當(dāng)受檢者因靜脈采血后出現(xiàn)低血糖現(xiàn)象時(shí)可及時(shí)補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)。

（2）采血流程。①要求受檢者檢測(cè)日前夜晚10時(shí)候禁食，檢測(cè)日清晨7時(shí)前往醫(yī)院，在空腹?fàn)顟B(tài)下自手肘處抽取5 mL靜脈血；②將血液標(biāo)本放入無抗凝劑的紅帽試管中，密封保存；③將受檢者血液標(biāo)本送入檢驗(yàn)室，通過全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀對(duì)患者進(jìn)行檢測(cè)；④本院選用的設(shè)備型號(hào)為深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司生產(chǎn)的CL-6000i免疫分析系統(tǒng)，采用微粒子酶促發(fā)光原理，分立一體模塊化設(shè)計(jì)。采用更穩(wěn)定的增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光底物AMPPD，檢測(cè)靈敏度高達(dá)10～21 mol/L。此外，CL-6000i分析速度單模塊為480測(cè)試/小時(shí)，目前醫(yī)院配置兩個(gè)模塊組成CL-6000iM2流水線，雙模塊速度為960測(cè)試/小時(shí)，試劑位置為72個(gè)，試劑盤為圓盤式，溫度控制在2℃～8℃，采用托盤式裝載樣品架，可以同時(shí)裝載兩個(gè)托盤，每個(gè)托盤可以裝15個(gè)樣本架，每個(gè)樣本架可以裝10個(gè)樣本，可以一次上兩托盤樣本（300個(gè)標(biāo)本），加上樣本處理系統(tǒng)緩沖位置290個(gè)樣本位，10個(gè)急診位置，這個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)一次性可上600個(gè)樣本。可以同時(shí)裝載2瓶（每瓶500T）發(fā)光底物液。系統(tǒng)突出優(yōu)勢(shì)為試劑、清洗液等消耗品，系統(tǒng)均可以在不停機(jī)狀況下添加；⑤樣本離心處理要求：離心轉(zhuǎn)速4000 r/min，持續(xù)時(shí)長(zhǎng)為10～15 min，完全按照化學(xué)發(fā)光免疫法的操作步驟依次執(zhí)行。

1.3 觀察指標(biāo)界定。比對(duì)兩組受檢者的腫瘤生物標(biāo)志物陽(yáng)性檢出情況，具體指標(biāo)為：①CA125，糖類抗原125；②CA153，糖類抗原153；③CA199，糖類抗原199④AFP，甲胎蛋白；⑤CEA，癌胚抗原。

評(píng)估檢測(cè)結(jié)果是否為陽(yáng)性的一般標(biāo)準(zhǔn)為：①CA125含量超過35U/mL（參考范圍：0～35 U/mL）；②CA199含量超過35 U/mL（參考范圍：0～30 U/mL）；③CA153含量超過35 U/mL（參考范圍：0～15 U/mL）；④AFP含量超過20 ng/mL（參考范圍：0～7 ng/mL）；⑤CEA含量超過5 ng/mL（參考范圍：0～4.5 ng/mL）

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。本研究產(chǎn)生的所有數(shù)據(jù)均納入SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析。其中，針對(duì)計(jì)量資料行“t”檢驗(yàn)，所有結(jié)果均以“±s”的形式予以呈現(xiàn)；針對(duì)計(jì)數(shù)資料行“χ2”檢驗(yàn)，相關(guān)結(jié)果以“n（%）”的形式呈現(xiàn)；當(dāng)P＜0.05時(shí)，表明組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

觀察組原發(fā)性腫瘤疾病患者的CA125、CA199、CA153、AFP、CEA5項(xiàng)腫瘤生物標(biāo)志物的陽(yáng)性檢出率均顯著高于對(duì)照組健康受檢人群，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表1。

表1 兩組受檢者腫瘤生物標(biāo)志物陽(yáng)性檢出情況對(duì)比[n（%）]

3 討論

化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)，英文全稱chemi luminesce nce immuno assay，簡(jiǎn)稱CLIA，是指將具有高靈敏度的化學(xué)發(fā)光測(cè)定技術(shù)與具有高特異性的免疫反應(yīng)相結(jié)合，可應(yīng)用于多種抗原、半抗原、抗體、激素、酶、脂肪酸、維生素、藥物等的檢測(cè)[2]。該技術(shù)是繼放射性免疫分析、酶免分析、熒光免疫分析、時(shí)間分辨熒光免疫分析技術(shù)之后發(fā)展而成的最新免疫測(cè)定技術(shù)。目前，化學(xué)發(fā)光免疫分析法已經(jīng)成為公認(rèn)的腫瘤標(biāo)志物和各種激素最精確、最成熟的檢測(cè)方法之一。從檢測(cè)準(zhǔn)確度層面來說，化學(xué)發(fā)光免疫分析法與放射免疫法不相上下；但從成本及實(shí)用性方面來說，放射免疫分析法的靈敏度雖然較高，但卻存在放射性防護(hù)和同位素污染的問題，加之試劑價(jià)格昂貴、保質(zhì)期較短，無法在基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)普及。化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)不僅繼承了傳統(tǒng)放射免疫檢測(cè)技術(shù)的所有優(yōu)點(diǎn)，還克服了傳統(tǒng)技術(shù)的缺點(diǎn)。該技術(shù)的作用原理為：分為兩個(gè)部分，分別為免疫反應(yīng)系統(tǒng)和化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)[3]。其中，前者是將發(fā)光物質(zhì)（即在反應(yīng)劑的激發(fā)下，生成一種激發(fā)態(tài)的中間體）直接標(biāo)記在化學(xué)發(fā)光免疫分析抗原或免疫化學(xué)發(fā)光分析抗體、作用于發(fā)光底物的酶上；后者是指利用化學(xué)發(fā)光物質(zhì)（經(jīng)過催化劑的催化以及氧化劑的氧化，同樣能夠形成一個(gè)激發(fā)態(tài)中間體）。當(dāng)上述激發(fā)態(tài)中間體從“亢奮狀態(tài)”回轉(zhuǎn)到穩(wěn)定的基本狀態(tài)時(shí)，會(huì)向外發(fā)射光子；此時(shí)，檢驗(yàn)人員可借助發(fā)光信號(hào)測(cè)量?jī)x對(duì)光量子的產(chǎn)生額度進(jìn)行測(cè)定，進(jìn)而確定受檢物質(zhì)的含量[4]。

綜上所述，化學(xué)發(fā)光免疫分析法因標(biāo)記方式的不同可分為兩種類型：其一，化學(xué)發(fā)光標(biāo)記免疫分析法；其二，酶標(biāo)記、以化學(xué)發(fā)光底物作為信號(hào)試劑的化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法。前者是用化學(xué)發(fā)光劑直接標(biāo)記抗原或抗體的免疫分析方法。常用于標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光物質(zhì)有吖啶酯類化合物；后者屬酶免疫分析，只是酶反應(yīng)的底物是發(fā)光，操作步驟與酶免分析完全相同。通過此種方式對(duì)受檢者的靜脈血液標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，通過添加反應(yīng)劑，將目標(biāo)腫瘤生物標(biāo)志物作為目標(biāo)檢測(cè)對(duì)象；在對(duì)光量子的產(chǎn)生額度進(jìn)行確定的過程中，檢測(cè)人員可清晰獲取每一種腫瘤生物標(biāo)志物在受檢者血液內(nèi)的含量[5]。由于不同受檢者個(gè)體存在差異，單一腫瘤生物標(biāo)志物的檢測(cè)結(jié)果并不能說明問題，故需同時(shí)列出多個(gè)腫瘤生物標(biāo)志物，根據(jù)整體檢測(cè)結(jié)果評(píng)估患者是否患有惡性腫瘤疾病。本研究結(jié)果顯示，原發(fā)性惡性腫瘤疾病患者的腫瘤生物標(biāo)志物陽(yáng)性檢出率較高；而健康人群的腫瘤生物標(biāo)志物陽(yáng)性檢出率整體為“零”，表明此種方式準(zhǔn)確性高。