馬慧穎，劉翔宇，李文靜，崔竹梅，王翔宇

(青島大學(xué)附屬醫(yī)院婦科，青島 266000)

卵巢癌是常見(jiàn)的女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，其死亡率居女性腫瘤死亡率第五位，2019年美國(guó)癌癥協(xié)會(huì)預(yù)計(jì)有22530例新發(fā)病例、13980例死亡病例[1]。其中，上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer，EOC)約占所有卵巢癌的90%。由于卵巢癌的早期臨床表現(xiàn)缺乏特異性，多數(shù)患者確診時(shí)已處于中晚期，并且多數(shù)患者會(huì)在治療后期出現(xiàn)化療耐藥，使得5年生存率不足50%[2]。因此，尋找確切的早期診斷指標(biāo)對(duì)于卵巢癌患者的診療、預(yù)后具有重要意義?；|(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9，MMP-9)是一種鋅依賴蛋白酶，通過(guò)破壞基底膜、促進(jìn)新生血管生成等，致卵巢癌生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移[3]。白細(xì)胞介素-8(Interleukin-8，IL-8)是一種多功能趨化因子，可通過(guò)自分泌及旁分泌方式，促使腫瘤組織內(nèi)中性粒細(xì)胞浸潤(rùn),增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的增殖與遷移能力，并可促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞生成，在腫瘤生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移中具有重要意義[4]。目前，關(guān)于兩者在卵巢癌患者血清中表達(dá)的研究較少，兩者是否存在關(guān)聯(lián)亦不明確。本研究通過(guò)測(cè)定EOC患者血清中MMP-9及IL-8的表達(dá)水平，探討兩者與卵巢癌臨床病理特征之間的關(guān)系以及兩者相關(guān)性，以期為卵巢癌診療提供新的思路。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 選取2012年5月至2017年3月青島大學(xué)附屬醫(yī)院收治的120例EOC患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：臨床資料完整、詳細(xì)；均行手術(shù)治療；無(wú)其他婦科疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并嚴(yán)重心、腎等功能障礙者；既往有其他腫瘤病史；術(shù)前行放化療治療者；依從性較差不具備隨訪條件者。惡性組患者年齡(50.9±8.2)歲。EOC患者均按2018年國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)分期進(jìn)行手術(shù)分期，術(shù)后均接受以紫杉醇+鉑類藥物為基礎(chǔ)的化療，將化療后無(wú)病生存期超過(guò)6個(gè)月定義為化療敏感，化療后無(wú)病生存期少于6個(gè)月定義為化療不敏感，化療期間疾病進(jìn)展定義為化療抵抗[5]。選取同期27例卵巢良性疾病患者作為良性組，其中卵巢囊腫10例，卵巢子宮內(nèi)膜異位癥10例，卵巢成熟性畸胎瘤5例，炎性包塊2例，平均年齡(48.5±3.3)歲。選取同期27例健康體檢女性作為對(duì)照組，近期未患炎癥性疾病，無(wú)慢性系統(tǒng)性疾病及惡性腫瘤疾病病史，平均年齡(49.2±6.9)歲。各組間年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究經(jīng)由醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(批準(zhǔn)文號(hào)：QYFYWZLL25798)，患者或其親屬均簽署書(shū)面知情同意書(shū)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 良性組、惡性組患者于術(shù)前采集空腹靜脈血5mL，對(duì)照組于體檢當(dāng)天采集空腹靜脈血，靜置5min，3000r/min離心10min，取上清，-80℃冰箱保存。人MMP-9 ELISA測(cè)定試劑盒(ng/mL)及IL-8水平(pg/mL)檢測(cè)及分析試劑均購(gòu)于美國(guó)R&D公司。

2 結(jié) 果

2.1 對(duì)照組、良性組、惡性組患者血清MMP-9、IL-8水平 惡性組血清MMP-9、IL-8水平均高于對(duì)照組及良性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。良性組血清MMP-9水平高于對(duì)照組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。良性組血清IL-8水平高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 對(duì)照組、良性組、惡性組血清MMP-9、IL-8水平

2.2 EOC患者血清MMP-9、IL-8表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系 卵巢癌患者血清MMP-9和IL-8表達(dá)水平與FIGO分期、淋巴轉(zhuǎn)移和化療反應(yīng)性相關(guān)(P<0.05)，而與年齡、分化程度、病理分型、腹水量及血清CA125水平無(wú)明顯關(guān)系。卵巢癌患者血清MMP-9與術(shù)后殘余灶相關(guān)(P<0.05)，IL-8與術(shù)后殘余灶無(wú)相關(guān)?；煵幻舾谢虻挚拐哐錗MP-9、IL-8表達(dá)水平高于敏感者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。術(shù)后有殘余灶者血清MMP-9表達(dá)水平高于無(wú)殘余灶者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 卵巢癌患者血清MMP-9、IL-8表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

2.3 血清MMP-9、IL-8診斷意義評(píng)估 血清MMP-9、IL-8的ROC曲線下面積分別為0.756(0.684～0.829)、0.943(0.911～0.976)(P<0.05)(圖1)。血清MMP-9、IL-8診斷卵巢癌的評(píng)價(jià)指標(biāo)，見(jiàn)表3。

表3 對(duì)照組、良性組、惡性組血清MMP-9、IL-8水平

圖1 血清MMP-9、IL-8檢測(cè)的ROC曲線

2.4 卵巢癌患者血清MMP-9、IL-8表達(dá)的相關(guān)性 Spearman秩相關(guān)分析結(jié)果顯示，卵巢癌患者血清MMP-9與IL-8表達(dá)呈正相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(rs=0.363，P<0.001)，見(jiàn)圖2。

圖2 卵巢癌患者血清MMP-9與IL-8水平的相關(guān)性

3 討 論

MMP-9，又稱為明膠酶B，主要降解IV型膠原和明膠，破壞細(xì)胞基底膜結(jié)構(gòu)，并促進(jìn)腫瘤新生血管生成，進(jìn)而致腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移[3]。此前研究顯示，食管癌、結(jié)直腸癌患者血清中MMP-9水平明顯升高[6-7]。Hu等[8]研究表明，卵巢癌患者及復(fù)發(fā)患者血清中MMP-9水平升高，這與本研究結(jié)果一致。IL-8是一種促炎性趨化因子，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、慢阻肺及卵巢良性腫瘤等非腫瘤性疾病中IL-8表達(dá)水平均可升高[9-11]。此外，乳腺癌、肺癌及卵巢癌患者血清IL-8水平較健康者增高[12-14]。本研究顯示，卵巢癌患者血清中IL-8水平較健康者增高，而良性組與對(duì)照組中IL-8表達(dá)水平亦存在差異，這可能與良性卵巢疾病亦有IL-8表達(dá)及樣本量較少有關(guān)。

CA125及HE4是卵巢癌診療過(guò)程中常用的腫瘤標(biāo)記物，但兩者在早期卵巢癌中的診斷價(jià)值仍存爭(zhēng)議。子宮內(nèi)膜異位癥、盆腔炎性疾病、子宮內(nèi)膜癌、子宮腺肌病等患者血清中CA125水平亦可升高[15]。相對(duì)于CA125，HE4有更高的靈敏度，但其在肺癌、消化系統(tǒng)惡性腫瘤、泌尿系統(tǒng)疾病中也可高表達(dá)[16]。在一項(xiàng)多中心前瞻性研究中，CA125和HE4診斷卵巢癌的靈敏度分別為56.9%、90.8%，特異度分別為96.9%、67.1%[17]。本研究表明，MMP-9和IL-8聯(lián)合檢測(cè)在卵巢癌診斷方面具有較高的價(jià)值，與CA125、HE4等傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)記物聯(lián)合，可能有更高的靈敏度及特異度，這需進(jìn)一步探索與證實(shí)。

Inoue等[18]研究表明，將正義IL-8 cDNA轉(zhuǎn)染至低轉(zhuǎn)移性前列腺癌細(xì)胞，MMP-9 mRNA水平上升，腫瘤侵襲力增強(qiáng)；將反義IL-8 cDNA轉(zhuǎn)染至高轉(zhuǎn)移性前列腺癌細(xì)胞，MMP-9表達(dá)水平下降，抑制腫瘤生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移。此外，有研究顯示，IL-8促血管生成的潛能可能是通過(guò)增加MMP-9表達(dá)實(shí)現(xiàn)的[19]。此前研究表明，在膀胱癌中，IL-8通過(guò)NF-kB在轉(zhuǎn)錄水平使MMP-9 mRNA水平升高，從而上調(diào)MMP-9表達(dá)，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移[20]。但兩者在卵巢癌中的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制，還在進(jìn)一步探索中。

DNA修復(fù)機(jī)制、腫瘤微環(huán)境的介導(dǎo)及腫瘤起始細(xì)胞，是目前EOC產(chǎn)生化療耐藥性的主要研究方向，但具體機(jī)制尚不明確[21]。研究表明,在卵巢癌細(xì)胞中，IL-8通過(guò)增加多耐藥相關(guān)基因(MDR1)和凋亡抑制蛋白(Bcl-2、Bcl-xl、XIAP)的表達(dá)，以及激活PI3K/Akt和Ras/MEK/ERK信號(hào)引發(fā)化療耐藥[22]。在乳腺癌細(xì)胞中，通過(guò)蛋白酶誘導(dǎo)因子CA147介導(dǎo)MMP-9釋放，從而上調(diào)多耐藥相關(guān)基因的表達(dá)[23]。在高表達(dá)MMP-9卵巢癌細(xì)胞中，MMP-9/MMP-2抑制劑與順鉑聯(lián)用，細(xì)胞毒性可明顯增強(qiáng)，證實(shí)MMP-9為耐藥卵巢癌潛在的治療靶點(diǎn)[24]。對(duì)于卵巢癌耐藥機(jī)制的研究，目前僅限于單種非細(xì)胞成分及單條信號(hào)通路，因此將IL-8、MMP-9聯(lián)合分析十分關(guān)鍵。此前的研究表明，乳腺癌、結(jié)腸癌中IL-8與MMP-9的表達(dá)呈正相關(guān)[25-26]，這與本研究結(jié)論一致。本研究發(fā)現(xiàn)，卵巢癌患者血清中MMP-9、IL-8表達(dá)水平均與FIGO分期、淋巴轉(zhuǎn)移和化療反應(yīng)性相關(guān)，兩者在卵巢癌生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移及耐藥方面可能有協(xié)同作用。血清MMP-9水平與有無(wú)術(shù)后殘余灶有關(guān)，提示MMP-9與腫瘤可切除性有關(guān)，可為MMP-9水平預(yù)測(cè)患者預(yù)后提供線索。ROC曲線提示，檢測(cè)血清MMP-9、IL-8在卵巢癌的診斷方面具有較高的價(jià)值，二者聯(lián)合檢測(cè)診斷效能更高，這為血清MMP-9、IL-8作為卵巢癌的篩查指標(biāo)提供了依據(jù)。

綜上所述，上皮性卵巢癌患者血清中MMP-9及IL-8均高表達(dá)，兩者表達(dá)與FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、化療敏感性有關(guān)，可作為卵巢癌診療中的重要參考指標(biāo)。本研究為卵巢癌提供了可能的治療靶點(diǎn)，但MMP-9及IL-8可否作為監(jiān)測(cè)卵巢癌進(jìn)展及復(fù)發(fā)、預(yù)測(cè)治療效果的指標(biāo)，還需進(jìn)一步研究與探索。