張小玉 屈勇剛* 常軍帥 王紫陽 黨瑞瑩 孫瓊飛 周海琴 李 巖

（1石河子大學動物科技學院，新疆石河子 832003；2動物疾病防控兵團重點實驗室，新疆石河子 832003；3新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團畜牧獸醫(yī)工作總站，新疆烏魯木齊 830063）

口蹄疫（Foot-and-mouth disease,FMD）俗稱“口瘡熱”“蹄癀”，是一種由口蹄疫病毒（Foot-andmouth disease virus,FMDV）引起以侵害牛、羊、豬等70多種偶蹄類動物為主并具有傳播速度快、傳染性強、發(fā)病率高等特點的疫病，也可感染人。該病于1514年在意大利首次被發(fā)現(xiàn)，潛伏期通常為2～7 d，一年四季均可發(fā)生，患病動物初期臨床表現(xiàn)為體溫升高，口腔、蹄胛、乳房等部位出現(xiàn)米粒至蠶豆大小的水皰，動物因疼痛采食量減少，喜側(cè)臥。隨著病程延長，水皰破裂結(jié)痂，蹄胛脫落，懷孕母豬易流產(chǎn)，其他成年豬可耐受而自行康復(fù)，但幼豬因缺乏免疫力或保護性母源抗體，往往造成急性心肌炎而死亡，死亡率可達80%，病死豬剖檢可見“虎斑心”[1]。在傳播過程中，F(xiàn)MDV可隨風傳播至50 km以外，羊和牛分別是FMDV的“貯存器”與“指示器”，致使此病長期在全球范圍內(nèi)廣泛流行，為養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大危害，被世界動物衛(wèi)生組織（OIE）列為必須報告的動物傳染病，在我國將其規(guī)定為一類動物疫病和強制免疫的動物疫病之一[2,3]。由目前的流行趨勢可推測，在FMDV的7個血清型中我國將長期流行O型（優(yōu)勢毒株為Mya-98），A型（優(yōu)勢毒株為Sea-97-G2）呈點發(fā)狀流行，AsiaⅠ型趨于消亡，所以把消滅O型作為凈化本病的重點工作[4]。此病尚無特效藥，仍以疫苗免疫接種作為防控此病的重要手段之一，免疫效果常采用抗體檢測來直觀評估[5]。液相阻斷酶聯(lián)免疫吸附試驗 （liquid-phaseblockingEnzyme-Linked Immunosorbent Assay,LPB-ELISA）是農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定且人們普遍認可的結(jié)構(gòu)蛋白抗體檢測方法，具有特異、敏感和可重復(fù)性強等特點，該方法雖然耗時、步驟繁瑣，但使用儀器來進行結(jié)果判定，避免了操作人員主觀誤差[6,7]。本試驗為了解2020年新疆規(guī)?；B(yǎng)豬場O型口蹄疫病毒抗體水平，采用O型口蹄疫病毒LPB-ELISA試劑盒對采集的469份樣品血清進行檢測。

1 材料與方法

1.1 樣品

2020年1月至12月期間從新疆9個規(guī)模化養(yǎng)豬場，共采集469份樣品血清。其中后備母豬血清27份、妊娠母豬血清27份、經(jīng)產(chǎn)母豬血清35份、哺乳母豬血清5份。

1.2 材料和儀器

O型口蹄疫病毒LPB-ELISA抗體檢測試劑盒，購自中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所；獸用一次性采血器5 mL為武漢民生醫(yī)用器材有限公司產(chǎn)品；微量移液器（Eppendorf）、自動酶標儀（美國BioTek公司生產(chǎn)）。

1.3 方法

1.3.1 樣品處理

根據(jù)豬只日齡的不同從耳緣靜脈或前腔靜脈采集3～5 mL血液，室溫中靜置30 min，析出清亮、無溶血的血清，每份血清收集1 mL至無菌EP管中，依次編號，12 000 r/min離心5 min，離心后的血清可直接檢測或置于4℃保存待檢。

1.3.2 LPB-ELISA檢測法與結(jié)果判定

根據(jù)O型口蹄疫病毒抗體LPB-ELISA檢測試劑盒說明書進行嚴格操作。結(jié)果判定：酶標儀測定各孔OD450nm值，每板設(shè)有4孔O型口蹄疫病毒抗原對照，根據(jù)所得病毒抗原數(shù)值計算該組數(shù)據(jù)臨界值（棄去4孔病毒抗原OD450nm值的最大值和最小值，剩余2孔平均值的二分之一為臨界值）。當OD450nm值＞臨界值為陰性；當OD450nm值≤臨界值時為陽性。

1.3.3 數(shù)據(jù)分析

使用Excel軟件和SPSS軟件對所獲數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。

2 結(jié)果

2.1 9個規(guī)?；i場O型口蹄疫病毒抗體水平檢測結(jié)果

結(jié)果見表1，9個規(guī)?；i場O型口蹄疫病毒抗體平均陽性率為88.06%（413/469），各個場中，除了A場的陽性率為56.70%，低于國家70%的標準，其余8個場的陽性率分別為82.68%、79.31%、94.23%、91.45%、95.00%、100.00%、95.45%和100.00%。

表1 9個規(guī)?；i場O型口蹄疫病毒抗體檢測結(jié)果

2.2 各類別豬群O型口蹄疫病毒抗體檢測結(jié)果

由表2可知，在各類別豬群O型口蹄疫病毒抗體水平檢測結(jié)果中，4種類別豬群O型口蹄疫病毒抗體水平的整體合格率為91.49%，各類別豬群O型口蹄疫病毒抗體水平均在85%以上，后備母豬抗體陽性率為85.19%，妊娠期母豬抗體陽性率為92.59%，經(jīng)產(chǎn)母豬抗體陽性率為94.29%，哺乳母豬抗體陽性率為100.00%。

表2 各類別豬群口蹄疫O型抗體檢測結(jié)果

3 討論與分析

3.1 9個規(guī)模化養(yǎng)豬場免疫效果評價

新疆9個規(guī)?；B(yǎng)豬場的整體O型口蹄疫病毒抗體陽性率為88.06%，達到國家（70.00%）的要求標準[8]。2011年4月至2013年3月期間，席悅[9]曾對新疆奇臺縣43個豬場進行O型口蹄疫病毒抗體檢測，陽性率為36.22%。劉鴿等[10]得出了2014年1月至2016年9月期間北疆5個地區(qū)的O型口蹄疫病毒抗體合格率為86.84%。陸民[11]曾對克拉瑪依市的O型口蹄疫病毒抗體進行調(diào)查，發(fā)現(xiàn)該市5個區(qū)的O型口蹄疫抗體陽性率由2015年的75.96%上升至2018年的94.56%。以上數(shù)據(jù)說明隨著口蹄疫強免工作的持續(xù)推進，O型口蹄疫病毒抗體合格率在新疆地區(qū)呈逐年上升和穩(wěn)定的趨勢，而本次檢測得出的數(shù)據(jù)相比于2018年的94.56%有所下降，應(yīng)引起相關(guān)豬場的重視。

9個規(guī)模化豬場中，僅有A場的O型口蹄疫病毒抗體陽性率低于70.00%，豬場人員應(yīng)加強重視程度，從疫苗接種、生物安全、豬群健康狀況等方面著手，找到造成陽性率低于國家標準的原因并積極解決，保障豬場更快更好發(fā)展。

3.2 各類別豬群抗體水平的差異

本次試驗中，后備母豬、妊娠期母豬、經(jīng)產(chǎn)母豬、哺乳期母豬的O型口蹄疫病毒抗體平均陽性率分別為85.19%、92.59%、94.29%、100.00%。雖然均達到國家標準，但后備母豬的抗體平均陽性率相對較低，應(yīng)該引起重視。

3.3 口蹄疫的防控措施

口蹄疫的發(fā)病率近100%，被稱為養(yǎng)豬業(yè)的“頭號殺手”，豬場管理者要堅持防重于治的方針，應(yīng)做好以下3點：⑴加強飼養(yǎng)管理，提高豬群整體免疫力。⑵免疫接種是保障，種豬每年進行3～4次高效免疫，商品豬通常免疫2次。⑶定期檢測，科學評價是關(guān)鍵，通過定期對豬群進行抗體檢測，可以更加科學地指導(dǎo)免疫程序，確保免疫防控的效果。