黨瑞瑩 張小玉 王紫陽(yáng) 孫瓊飛 常軍帥 屈勇剛*李 巖

（1石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，新疆石河子 832003；2動(dòng)物疾病防控兵團(tuán)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆石河子 832003；3新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)畜牧獸醫(yī)工作總站，新疆烏魯木齊 830063）

豬圓環(huán)病毒屬于圓環(huán)病毒科、圓環(huán)病毒屬的DNA病毒，本病最早發(fā)現(xiàn)于20世紀(jì)70年代。迄今為止，豬圓環(huán)病毒共有3種血清型，為PCV1、PCV2、PCV3[1]。PCV1無(wú)致病性，PCV2有著強(qiáng)致病性[2]。PCV3主要侵害幼齡豬，臨床表現(xiàn)呈多樣性。PCV2是圓環(huán)病毒科一種無(wú)包膜、共價(jià)閉合、呈環(huán)狀排列的單鏈DNA病毒，直徑為14～25 nm，是已知的最小的動(dòng)物病毒之一[3]。PCV2可致不同生長(zhǎng)階段的豬只發(fā)病，會(huì)嚴(yán)重?fù)p害豬的免疫系統(tǒng)，引起豬的免疫抑制。嚴(yán)重影響豬群的生長(zhǎng)繁殖，且易繼發(fā)多種豬傳染病，包括豬呼吸道病綜合征（PRDC）、豬增生性和壞死性肺炎（PNP）、豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）、豬呼吸道病和母豬繁殖障礙等[4]。疫苗接種是本病預(yù)防控制的主要措施之一，抗體檢測(cè)是保障疫苗免疫效果的關(guān)鍵。為了解2020年新疆地區(qū)規(guī)模化豬場(chǎng)PCV2免疫抗體水平，本試驗(yàn)選擇新疆地區(qū)6個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)，針對(duì)不同日齡段的豬采集血清樣品，采用PCV2 ELISA抗體檢測(cè)方法進(jìn)行抗體檢測(cè)分析，以期為該地區(qū)PCV2的防控提供參考。

1 材料與方法

1.1 樣品來(lái)源

試驗(yàn)樣品來(lái)自新疆地區(qū)6個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)（A、B、C、D、E、F）不同日齡段的豬，共采集血清樣品333份。其中，哺乳仔豬血清80份，保育豬血清49份、育肥豬血清39份，后備豬血清34份，經(jīng)產(chǎn)母豬血清104份，種公豬血清27份。

1.2 材料和儀器

豬圓環(huán)病毒Ⅱ型抗體酶免檢測(cè)試劑盒（哈爾濱元亨生物藥業(yè)有限公司）、自動(dòng)酶標(biāo)儀（美國(guó) Bio Tek）、微量移液槍（Eppendorf公司）、一次性獸用采血器（5 mL）、恒溫培養(yǎng)箱等。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 樣品采集

每頭豬用5 mL的一次性獸用采血器一次性從豬的前腔靜脈采血3～5 mL，分組做好標(biāo)記。室溫下靜置待血液凝固后，放置有冰袋的采樣箱里，帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行血清分離。

1.3.2 檢測(cè)方法

將濃縮的洗滌液恢復(fù)至室溫并搖動(dòng)使結(jié)晶的鹽溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。在抗原反應(yīng)板的待檢樣品孔中直接加入80 μL樣品稀釋液后再加入20 μL的待檢樣品。陰陽(yáng)對(duì)照原液不稀釋直接加100 μL于待檢孔中。微量振蕩器上充分混勻5～10 s后，貼上封板膜，置恒溫箱中37℃孵育30 min，重復(fù)洗滌 5次后，加入酶結(jié)合物 100 μL，貼上封板膜，置37℃孵育30 min，洗滌5次。隨即加入底物液A 50 μL，再加入底物液B 50μL，輕輕震蕩混勻，置37℃避光顯色15 min。加入終止液50 μL，輕輕震蕩混勻，置酶標(biāo)儀450 nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔OD450值。

1.3.3 試驗(yàn)結(jié)果判定

試驗(yàn)結(jié)果同時(shí)符合陰性對(duì)照OD450值≤0.15，陽(yáng)性對(duì)照OD450值≥0.60。計(jì)算臨界值：陽(yáng)性對(duì)照OD450值×0.25。當(dāng)被檢樣品OD450值小于臨界值時(shí)，為PCV2抗體陰性，大于或等于臨界值時(shí)為PCV2抗體陽(yáng)性。

1.3.4 試驗(yàn)結(jié)果分析

用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同地區(qū)豬場(chǎng)豬圓環(huán)病毒2型抗體檢測(cè)結(jié)果

6家豬場(chǎng)共333份豬血清，有258份呈PCV2抗體陽(yáng)性，平均陽(yáng)性率為77.78%，OD450平均值為1.07。具體見(jiàn)表1。規(guī)?；i場(chǎng)A、B、C、D、E、F的PCV2抗體陽(yáng)性率分別為100.00%、53.13%、48.78%、85.71%、96.43%、72.50%。其中，A場(chǎng)的抗體陽(yáng)性率最高為100.00%，但OD450平均值最高的是E場(chǎng)，為1.43。C場(chǎng)抗體陽(yáng)性率最低為48.78%。A～F豬場(chǎng)檢測(cè)的 OD450平均值分別為：1.40、0.82、0.79、1.09、1.43、0.71。使用SPSS軟件進(jìn)行單因素分析的結(jié)果表明A場(chǎng)和E場(chǎng)與B、C、D、F等4個(gè)場(chǎng)的抗體水平差異顯著（P＜0.05）。F場(chǎng)與A、D、E等3個(gè)場(chǎng)的抗體水平差異顯著（P＜0.05）。

表1 新疆地區(qū)6個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)PCV2抗體檢測(cè)結(jié)果

2.2 試驗(yàn)豬場(chǎng)不同類別豬群的PCV2抗體水平

不同類別豬群的PCV2抗體水平見(jiàn)表2。哺乳仔豬、保育豬、育肥豬、后備豬、經(jīng)產(chǎn)母豬、種公豬的PCV2抗體陽(yáng)性率分別為67.5%、48.98%、89.74%、88.24%、86.54%、96.30%。其中，種公豬的抗體陽(yáng)性率最高（96.30%），保育豬的抗體陽(yáng)性率最低（47.92%）。哺乳仔豬、保育豬、育肥豬、后備豬、經(jīng)產(chǎn)母豬、種公豬的PCV2抗體OD450平均值分別為：0.91、0.65、1.44、0.84、1.21、1.55。使用SPSS軟件進(jìn)行單因素分析的結(jié)果表明：種公豬與哺乳仔豬、保育豬、后備母豬和經(jīng)產(chǎn)母豬的抗體水平差異顯著（P＜0.05）。經(jīng)產(chǎn)母豬與哺乳仔豬、保育豬、后備母豬、種公豬抗體水平差異顯著（P＜0.05）。

表2 新疆地區(qū)6個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)不同日齡豬PCV2抗體檢測(cè)結(jié)果

3 討論

3.1 整體豬群的PCV2抗體水平分析

試驗(yàn)共采集333份血清樣本，陽(yáng)性樣品為258份，陽(yáng)性率為77.78%。張家瑞等[5]在2019年對(duì)新疆部分地區(qū)5家規(guī)?；i場(chǎng)檢測(cè)PCV2抗體，其平均陽(yáng)性率為70.71%；劉秀清等[6]對(duì)西寧市部分規(guī)模化豬場(chǎng)檢測(cè)PCV2抗體，平均陽(yáng)性率為71.23%。馬超峰等[7]對(duì)信陽(yáng)部分規(guī)?；i場(chǎng)檢測(cè)PCV2抗體，平均陽(yáng)性率為75.7%。顧紹鋒等[8]對(duì)云南富源縣部分規(guī)?；i場(chǎng)進(jìn)行PCV2抗體檢測(cè)，平均陽(yáng)性率為88.21%。以上結(jié)果表明，2020年新疆地區(qū)PCV2抗體水平與2019年相比有所提高，與大部分地區(qū)的抗體水平相當(dāng)，較少地區(qū)的免疫抗體水平較低。在試驗(yàn)中，6家規(guī)?；i場(chǎng)中有4家豬場(chǎng)的PCV2抗體陽(yáng)性率在國(guó)家規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)（70%）以上，只有2個(gè)豬場(chǎng)抗體陽(yáng)性率低于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。A場(chǎng)的抗體陽(yáng)性率最高為100.00%，C場(chǎng)抗體陽(yáng)性率最低為48.78%。其中A、D、E、F等4個(gè)PCV2抗體陽(yáng)性率均高于國(guó)家規(guī)定水平（＞70%），但B場(chǎng)和C場(chǎng)PCV2型抗體平均陽(yáng)性率（53.13%、48.78%）均低于國(guó)家規(guī)定水平，且差異較大。PCV2的免疫效果受諸多因素干擾，飼養(yǎng)管理水平、疫苗效力、免疫時(shí)間等都會(huì)影響抗體陽(yáng)性率。因此，對(duì)于免疫效果不理想的豬場(chǎng)，需查明原因，優(yōu)化免疫程序的同時(shí)提高飼養(yǎng)管理水平，加強(qiáng)生物安全措施。

3.2 不同類別豬的PCV2抗體水平分析

此次檢測(cè)發(fā)現(xiàn)保育豬的抗體水平最低，同時(shí)保育仔豬階段也是PCV2的高發(fā)期，所以需優(yōu)化免疫程序，確保該階段仔豬的抗體維持在有效保護(hù)水平。種公豬的PCV2抗體水平高達(dá)100.00%，有的可能是野毒感染或者反復(fù)免疫的結(jié)果，建議通過(guò)病原學(xué)檢測(cè)排出野毒感染的可能。哺乳仔豬的PCV2抗體陽(yáng)性率僅為67.50%，未達(dá)到70.00%的標(biāo)準(zhǔn)，該日齡段仔豬本身攜帶母源抗體，但相對(duì)日齡大一些的哺乳仔豬母源抗體水平比較薄弱，所以抗體水平不高，可在這一階段根據(jù)豬場(chǎng)不同情況選取較合適的免疫日齡來(lái)改進(jìn)；亦可通過(guò)懷孕母豬的加強(qiáng)免疫提高母源抗體的水平和維持時(shí)間。

4 小結(jié)

豬圓環(huán)病毒病在我國(guó)養(yǎng)豬場(chǎng)普遍流行，很難凈化。因此，做好預(yù)防接種極為重要，要加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，根據(jù)各豬場(chǎng)情況建立完善的免疫接種計(jì)劃，及時(shí)對(duì)抗體水平進(jìn)行檢測(cè)評(píng)估，對(duì)免疫水平不達(dá)標(biāo)的，及時(shí)進(jìn)行補(bǔ)免以維持在有效保護(hù)水平。