張 燁,李 靜,丁 華,陳羽涵,聶黎行*,姚令文*

(1. 鄂爾多斯市檢驗(yàn)檢測(cè)中心,內(nèi)蒙古 鄂爾多斯 017010；2. 中國(guó)食品藥品檢定研究院,北京 100050；3. 鄂爾多斯市蒙醫(yī)醫(yī)院,內(nèi)蒙古 鄂爾多斯 017010)

二氧化硫因其干燥、漂白、防霉、防蟲(chóng)等作用,廣泛用于中藥材的初加工和倉(cāng)儲(chǔ)等環(huán)節(jié)[1]。經(jīng)過(guò)硫磺熏蒸(簡(jiǎn)稱(chēng)硫熏)的藥材,色澤美觀、不易霉變生蟲(chóng)、含水量高、貯藏期長(zhǎng)。但過(guò)度熏蒸會(huì)改變藥性和化學(xué)成分,從而影響藥效[2],且易導(dǎo)致二氧化硫殘留,對(duì)人體產(chǎn)生潛在危害[3],故《中國(guó)藥典》2015年版對(duì)山藥、牛膝、黨參等10種中藥材及飲片中二氧化硫的限量作出了規(guī)定：二氧化硫殘留量不得超過(guò)400 mg·kg-1；其他中藥材及飲片中二氧化硫殘留量不得超過(guò)150 mg·kg-1。

牛黃清胃丸由人工牛黃、麥冬、大黃、菊花、桔梗等17味中藥材配研制成,具有清胃瀉火、潤(rùn)燥通便的功效,用于心胃火盛,頭暈?zāi)垦?口舌生瘡,牙齦腫痛,乳蛾咽痛,便秘尿赤[4]。方中大黃、菊花、桔梗、麥冬等原料易變色或變質(zhì),為追求色澤美觀,延長(zhǎng)儲(chǔ)存時(shí)間,在產(chǎn)地加工時(shí)可能使用硫熏[5-6],從而將二氧化硫殘留風(fēng)險(xiǎn)引入中成藥。隨著藥品分析技術(shù)的發(fā)展,中藥材及飲片中二氧化硫的檢測(cè)方法已基本成熟[6],中成藥中二氧化硫的測(cè)定尚未見(jiàn)報(bào)道。本文采用離子色譜法建立了牛黃清胃丸中二氧化硫的檢查方法[7],并首次提出了中成藥中二氧化硫的擬定殘留限度,為相關(guān)藥品的安全性研究提供了示范和參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

AE240十萬(wàn)分之一電子天平(瑞士Mettler公司),ICS-1100離子色譜儀,配有陰離子抑制器和電導(dǎo)檢測(cè)器(美國(guó)Dionex公司)。

1.2 藥品與試劑

本研究所用49批次牛黃清胃丸均為2018年國(guó)家藥品監(jiān)督抽驗(yàn)樣品,產(chǎn)自18個(gè)生產(chǎn)單位。硫酸根標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000 mg/L)購(gòu)于中國(guó)計(jì)量測(cè)試研究院。30%過(guò)氧化氫(優(yōu)級(jí)純)、氫氧化鉀(分析純)、亞硫酸鈉(分析純)、鹽酸(優(yōu)級(jí)純)購(gòu)于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司,實(shí)驗(yàn)用水為市售純凈水經(jīng)Millipore純水處理系統(tǒng)純化所得。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：賽默飛-Thermo Dionex IonPac AS19 IC 色譜柱(250 mm × 4 mm),配有AG11-HC保護(hù)柱(50 mm × 4 mm),柱溫：35 ℃。氫氧化鉀溶液作為洗脫液進(jìn)行梯度洗脫：0～20 min：8 mmol/L；20～25 min：40 mmol/L；25～30 min：8 mmol/L,流速1.0 mL/min。抑制器電流：60 mA。電導(dǎo)檢測(cè)器檢測(cè)池溫度：35 ℃。進(jìn)樣體積：100 μL。

2.2 溶液的制備2.2.1 對(duì)照品溶液的制備

精密量取硫酸根標(biāo)準(zhǔn)溶液適量,分別加水稀釋制成濃度為0.5、1.0、2.0、10、20 mg/L的系列對(duì)照溶液,作為工作對(duì)照。

2.2.2 供試品溶液的制備

取本品重量差異項(xiàng)下的大蜜丸,剪碎,混勻,取約5.0 g,精密稱(chēng)定,置兩頸燒瓶中,加水50 mL,振搖使分散均勻,接通水蒸氣蒸餾瓶。吸收瓶中加入3%過(guò)氧化氫溶液20 mL,吸收管下端插入吸收液液面以下。兩頸燒瓶中沿瓶壁快速加入鹽酸5 mL,立即密封,開(kāi)始蒸餾。保持蒸餾瓶沸騰并調(diào)整蒸餾火力,使吸收管端的餾出液的流出速率約為2 mL/min。至吸收瓶中液體接近100 mL時(shí),停止蒸餾,用水洗滌尾接管并轉(zhuǎn)移至吸收瓶中。加水定容至刻度,搖勻,靜置1 h,取上清液,用微孔濾膜(0.45 μm)濾過(guò),取續(xù)濾液,即得。

2.2.3 空白溶液的制備

不加樣品,自“加水50 mL”起,按“2. 2. 2”項(xiàng)下方法操作,即得。

2.3 測(cè)定法

取系列工作對(duì)照溶液和供試品溶液,按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣,標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定供試品溶液中硫酸根離子含量,再以二氧化硫/硫酸根離子= 0.6669的分子量比折算樣品中二氧化硫殘留量。

2.4 方法學(xué)驗(yàn)證2.4.1 專(zhuān)屬性實(shí)驗(yàn)

分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液與空白溶液,按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣,由圖1可見(jiàn),空白溶液不干擾硫酸根離子(二氧化硫)的測(cè)定。

圖1 HPLC色譜圖

2.4.2 線性關(guān)系、檢出限和定量限

取系列濃度的對(duì)照品溶液,進(jìn)樣測(cè)定,以濃度為橫坐標(biāo)X,峰面積為縱坐標(biāo)Y,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并進(jìn)行線性回歸,結(jié)果硫酸根離子在0.5～20 mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,回歸方程為Y=0.61X+0.03,相關(guān)系數(shù)(r)為0.9999。精密量取濃度為1 mg/L的對(duì)照品溶液適量,稀釋至不同濃度,進(jìn)樣測(cè)定,測(cè)得檢出限(信噪比3∶1)為0.12 mg/L,定量限(信噪比10∶1)為0.37 mg/L。

2.4.3 精密度實(shí)驗(yàn)

取濃度為1 mg/L的對(duì)照品溶液,按“2.1”項(xiàng)下色譜條件,連續(xù)進(jìn)樣6次,測(cè)定硫酸根離子峰面積,計(jì)算RSD值為0.93%(n=6),表明儀器精密度良好。

2.4.4 重復(fù)性和回收率實(shí)驗(yàn)

取本品重量差異項(xiàng)下的1號(hào)樣品,剪碎,混勻,取約5.0 g,精密稱(chēng)定,置兩頸燒瓶中,精密加入亞硫酸鈉溶液1.5 mL(亞硫酸鈉溶液臨用新配,并用碘量法[8]標(biāo)定,以二氧化硫計(jì),濃度為0. 5010 g/L),自“加水50 mL”起,按“2. 2. 2”項(xiàng)下方法制備6份加樣回收溶液,按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定,計(jì)算得平均回收率為98.55%,RSD值為1.33%(n= 6),表明方法準(zhǔn)確性和重復(fù)性良好,見(jiàn)表1。

表1 二氧化硫加樣回收率(n=6)

2.4.5 樣品測(cè)定結(jié)果

取18個(gè)廠家生產(chǎn)的牛黃清胃丸49批次,依法測(cè)定,結(jié)果所有樣品均未檢出二氧化硫。

3 討論

聯(lián)合國(guó)糧食及農(nóng)業(yè)組織/世界衛(wèi)生組織(Food and Agriculture Organization/World Health Organization,FAO/WHO)食品添加劑聯(lián)合專(zhuān)家委員會(huì)(Joint FAO/WHO Expert Committee on Food Additives,JECFA)不定期對(duì)有害物質(zhì)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估,制定并發(fā)布每千克體重每月/周/日可耐受攝入量。二氧化硫及亞硫酸鹽類(lèi)物質(zhì)作為食品添加劑的每千克體重每日可耐受攝入量(ADI)為0.7 mg/kg[9]。成年人的平均體重(BW)以60 kg計(jì),則二氧化硫每日可耐受攝入量為42 mg。根據(jù)藥品標(biāo)準(zhǔn)或藥品使用說(shuō)明書(shū)中用量計(jì)算,牛黃清胃丸每日服用量(F)為24 g。根據(jù)公式MRL=ADI×BW/F,得到牛黃清胃丸中二氧化硫的最大殘留限度(MRL)為1.75 mg/g。按此擬定限度評(píng)價(jià),本文所測(cè)樣品二氧化硫均未超標(biāo),提示該品種二氧化硫殘留風(fēng)險(xiǎn)低。