羅金秀,劉冬霞,胡新年,歐陽慧

廣東省清遠市婦幼保健院優(yōu)生與遺傳實驗診斷中心,廣東清遠 511500

人乳頭瘤病毒(HPV)是一種DNA病毒，高危型HPV感染者如果持續(xù)感染，有可能會轉變?yōu)閷m頸癌。本實驗室HPV檢測陽性率約為17.70%，其中存在一定的復查率，HPV檢測復查降低了實驗室工作效率，浪費人力、物力、財力，也導致患者治療延誤和承受重新檢測的痛苦。本研究旨在降低HPV檢測復查率，提高實驗室工作效率和質量，降低檢測成本，讓患者能夠準確及時地了解自身健康狀況，做到早發(fā)現(xiàn)早治療。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年7月9-20日來廣東省清遠市婦幼保健院進行HPV檢測的229例女性宮頸標本和2018年10月30日至11月17日的250例女性宮頸標本，年齡23～55歲。第一階段研究時間段較短，是因為復查率太高，本實驗室及時查找原因，并很快找到了原因并采取相應措施；第二階段研究時間較長是為了更好地觀察改進措施的成效。為了減少兩個研究時段氣溫差異對檢測結果的影響，所有研究對象均在同溫度空調房取材，在恒溫PCR實驗室操作。

1.2儀器與試劑 潮州凱普生物有限公司生產的人乳頭瘤病毒21分型檢測試劑盒、HBNP-4801A自動DNA提取儀和HBHM-3000s自動雜交儀；美國ABI公司生產的Real-time PCR system擴增儀。

1.3方法 對2018年7月9-20日來廣東省清遠市婦幼保健院進行HPV檢測的229例女性宮頸標本，采用反向點雜交方法檢測HPV-DNA并分型，對需要復查的兩大原因繪制柏拉圖進行分析，列出復查原因匯總表，針對各復查原因制訂相應對策，經(jīng)過兩個多月的整改后，統(tǒng)計2018年10月30日至11月17日進行HPV檢測的250例女性宮頸標本的復查率，對兩階段需要復查情況列出比較表，繪制柏拉圖。

1.4統(tǒng)計學處理 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計分析，計數(shù)資料以頻數(shù)或百分比表示，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1HPV檢測復查原因匯總 2018年7月9-20日229例進行HPV檢測的女性需要復查的有55例，復查原因包括6個，見表1。

表1 HPV檢測復查原因匯總表(%)

2.2出現(xiàn)非特異點原因 出現(xiàn)非特異點原因有6個，見表2。

表2 出現(xiàn)非特異點原因匯總表(%)

2.3相鄰位點間多次出現(xiàn)相同陽性位點原因 相鄰位點間多次出現(xiàn)相同陽性位點原因有4個，見表3。

表3 相鄰位點間多次出現(xiàn)相同陽性原因匯總表(%)

2.4兩時段需要復查情況比較 經(jīng)過對2018年7月9-20日需要復查的55例女性進行原因分析并采取應對措施后，2018年10月30日至11月17日復查率由24.02%降至6.80%，兩時間段需要復查率比較差異有統(tǒng)計學意義(χ2=129.05，P<0.01)，見表4。

表4 兩時段需要復查情況比較(n)

3 討 論

HPV感染率在我國女性中為16.8%，有70%～80%的女性一生中至少感染過一次HPV，大部分的HPV感染都是暫時性的，會在一定時間內自行消退，一般在2年內HPV會被人體的免疫系統(tǒng)清除掉，感染的平均持續(xù)時間為8～12個月[1-2]，年齡越大病毒清除時間越長[3]，其中HPV16是我國女性HPV感染最普遍的型別，感染率與宮頸病變呈正相關[4]。通過檢測HPV16的A4家族基因，可以預測HPV16陽性的女性患宮頸癌的風險，從而確定高危人群，給宮頸癌的預防工作提供幫助[5]。

我國宮頸癌發(fā)病率在全球女性惡性腫瘤的發(fā)病率中已高居第2位[6],且呈上升趨勢，并且存在地域差異，這種差異與HPV感染和篩查的普及性有關，但隨著社會的進步和時間的推移，這種地域差異將會逐步縮小[7-8]。HPV分子生物學檢測方法是宮頸病變的篩查方法之一，篩查對于惡性腫瘤的防治具有重要意義，可以認為是防治的第一步[9],目前發(fā)現(xiàn)的HPV型別已有200余種[10],HPV-DNA病毒載量檢測可以作為預測宮頸病變的常規(guī)檢查手段和病情追蹤及治療后隨診等工作的預測手段，對于預防宮頸高度病變具有重要價值[11]。對于 25 歲以上的女性，高危型人乳頭瘤病毒(HR-HPV)檢測為初篩方案[12]，但HPV-DNA檢測中存在一定的復查率，有些是無法避免的。本研究為了盡可能減少HPV檢測的復查率，找出了多方面的原因，針對各種原因采取相應應對對策，取得了良好效果。從本研究可知，出現(xiàn)非特異點和相鄰位點間多次出現(xiàn)相同陽性位點是需要復查的兩大重要原因。針對出現(xiàn)非特異點的原因，本實驗室采取了以下措施。(1)儀器清洗不徹底:對儀器各部件實時清洗消毒，對儀器器材用次氯酸鈉進行浸泡、實驗后5 min之內用去離子水至少沖洗6次、用酒精進行浸泡，用潔凈紙對儀器進行全方位擦拭；對重復使用的儀器設備用特定刷子進行刷洗，向凱普總公司要求派遣工程師進行質量監(jiān)督。(2)操作細節(jié)不注意：每次實驗時進行陰性質控，將須注意的細節(jié)整理成手冊進行提醒，采取移位加樣，制作操作流程圖，每一步進行雙人操作制度。針對相鄰位點間多次出現(xiàn)相同陽性的不同原因，本實驗室采取了以下措施。(1)實驗人員操作不熟練：定期進行卷面考試、HPV操作培訓，請凱普試劑公司人員進行儀器原理和解決簡單問題的培訓，定期進行實驗心得和經(jīng)驗的交流。(2)氣溶膠污染：每次實驗前后對生物安全柜紫外消毒0.5 h，每晚實驗室固定消毒1 h，雜交儀試驗后紫外消毒1 h。(3)移液槍污染：對移液槍使用人員進行嚴格培訓，配備實驗室專用移液槍，使用后及時消毒。(4)實驗槽壓片不緊：請工程師對雜交儀進行調試。對于無法避免的影響因素，可采取HR-HPV與液基薄層細胞試驗(TCT)聯(lián)合檢測提高宮頸癌及癌前病變診斷的準確性，TCT檢測中對于病理形態(tài)學診斷的不足可由HR-HPV檢查來彌補，而TCT可補充HR-HPV在細胞形態(tài)和治療方案上的認知與選擇，二者具有相互補充和完善的作用[13]。

綜上所述，為了減少HPV檢測的復查率，必須針對各影響因素采取相應對策，這樣才能做到對疾病早發(fā)現(xiàn)早治療，滿足患者和臨床的需要。