劉 倩，段 莎

陜西省人民醫(yī)院消化二科，陜西西安 710068

近年來隨著人們生活方式的改變，胃癌發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)[1]。早期胃癌無明顯癥狀，約80%的胃癌患者在確診時(shí)就已經(jīng)處于晚期，其治療手段以手術(shù)切除為主，但預(yù)后較差，5年生存率不足10%[2]，因此，提高患者早期診斷率對(duì)患者預(yù)后具有重要意義。微小RNA(miRNA)是新發(fā)現(xiàn)的一類小分子非編碼RNA，在腫瘤細(xì)胞的分化、增殖、凋亡、周期調(diào)控等過程中發(fā)揮重要作用。有研究表明，miRNA-1290與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程聯(lián)系密切[3]，但關(guān)于其在胃癌中相對(duì)表達(dá)水平情況的研究較少。本文旨在探究miRNA-1290在胃癌患者體內(nèi)的表達(dá)情況，為臨床胃癌早期診斷尋找新的標(biāo)志物，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年3月至2020年9月本院消化內(nèi)科收治的64例胃癌患者作為胃癌組，其中男41例，女23例；年齡42～78歲，平均(58.79±7.35)歲；腫瘤分期(TNM)：Ⅰ期15例，Ⅱ期17例，Ⅲ期20例，Ⅳ期12例；腫瘤直徑<5 cm 30例，腫瘤直徑≥5 cm 34例；分化程度：低分化21例，中分化24例，高分化19例。另選取同時(shí)間段在本院進(jìn)行體檢的64例健康者作為對(duì)照組，男40例，女24例，年齡40～78歲，平均(57.84±7.42)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合胃癌臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]；(2)經(jīng)胃鏡檢查和病理活檢確診；(3)納入研究前未接受化療、放療和免疫治療等抗腫瘤治療；(4)簽署該項(xiàng)研究的知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并其他部位腫瘤者；(2)出現(xiàn)其他臟器轉(zhuǎn)移者；(3)患有血液病、免疫系統(tǒng)疾病或結(jié)締組織疾病者；(4)心、肝、腎等臟器功能嚴(yán)重?fù)p傷者；(5)急慢性感染者；(6)臨床資料缺失者。本研究獲得本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2研究方法

1.2.1標(biāo)本采集 健康體檢者于體檢時(shí)進(jìn)行血液標(biāo)本采集。所有胃癌患者采集血液標(biāo)本，取清晨空腹靜脈血3 mL，放入乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管中備用，常溫環(huán)境下使用離心機(jī)離心10 min(轉(zhuǎn)速3 000 r/min，離心半徑13.5 cm)，將上清液取出，放入無RNA酶的管中，4 ℃環(huán)境下再次離心10 min(轉(zhuǎn)速12 000 r/min)，用新的離心管保存上清液，于-80 ℃環(huán)境下保存。

1.2.2儀器與試劑 反轉(zhuǎn)錄試劑盒(購自美國Thermo公司)，Trizol試劑(購自美國Thermo公司)，實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)儀(購自美國PE公司)，qRT-PCR試劑盒(購自美國Invitrogen公司)。

1.2.3血清miRNA-1290相對(duì)表達(dá)水平計(jì)算 取血清標(biāo)本，加入1 mL TRIzol提取劑，提取總RNA，并進(jìn)行測(cè)定。采用qRT-PCR反轉(zhuǎn)錄試劑盒對(duì)提取的總RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，先加水將RNA稀釋至2 ng/μL，再加入反轉(zhuǎn)錄溶液，16 ℃環(huán)境下反轉(zhuǎn)錄60 min、42 ℃環(huán)境下反轉(zhuǎn)錄30 min、85 ℃環(huán)境下反轉(zhuǎn)錄10 min，對(duì)反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA進(jìn)行冷卻處理及常規(guī)稀釋，將cDNA于-20 ℃保存。取2 μL cDNA標(biāo)本作為PCR定量檢測(cè)模板，在qRT-PCR反應(yīng)儀上進(jìn)行PCR反應(yīng)，PCR擴(kuò)增條件：95 ℃預(yù)變性3 min，95 ℃變性5 s，61 ℃延伸30 s，35個(gè)循環(huán)。采用2-△△Ct法計(jì)算血清中miRNA-1290相對(duì)表達(dá)水平。

1.3觀察指標(biāo) (1)比較胃癌組及對(duì)照組血清miRNA-1290相對(duì)表達(dá)水平；(2)分析miRNA-1290相對(duì)表達(dá)水平與患者臨床特征的關(guān)系；(3)分析胃癌組血清miRNA-1290相對(duì)表達(dá)水平對(duì)胃癌的診斷價(jià)值。

2 結(jié) 果

2.1胃癌組及對(duì)照組血清miRNA-1290相對(duì)表達(dá)水平比較 qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，胃癌組血清miRNA-1290相對(duì)表達(dá)水平為4.58±0.54，明顯高于對(duì)照組的(1.17±0.35)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=42.393，P<0.001)。

2.2胃癌患者miRNA-1290相對(duì)表達(dá)水平與臨床特征的關(guān)系 不同TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、分化程度、腫瘤直徑胃癌患者血清miRNA-1290表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；不同性別、年齡、病理類型胃癌患者血清miRNA-1290相對(duì)表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 胃癌患者miRNA-1290相對(duì)表達(dá)水平與臨床特征的關(guān)系

續(xù)表1 胃癌患者miRNA-1290相對(duì)表達(dá)水平與臨床特征的關(guān)系

2.3胃癌患者血清miRNA-1290相對(duì)表達(dá)水平對(duì)胃癌的診斷價(jià)值 ROC曲線顯示，miRNA-1290診斷胃癌的靈敏度為91.4%，特異度為87.3%，AUC為0.816(95%CI=0.691～0.942，P<0.05)，最佳截?cái)嘀禐?.92。見圖1。

圖1 血清miRNA-1290對(duì)胃癌診斷價(jià)值的ROC曲線

3 討 論

胃癌指源于胃黏膜上皮細(xì)胞的惡性腫瘤，主要為胃腺癌，發(fā)病率較高，具有早期診斷率低、復(fù)發(fā)率高的特點(diǎn)，尋找有效地早期診斷方法對(duì)改善患者預(yù)后具有重要意義[5-7]。miRNA是一類內(nèi)源性非編碼RNA，一般由18～25個(gè)核苷酸組成，在生命過程中主要通過與靶基因核糖體RNA(mRNA)3′端非編碼區(qū)互補(bǔ)配對(duì)，抑制翻譯過程發(fā)揮作用[8]。許麗芳等[9]研究中指出，miRNA參與個(gè)體發(fā)育，在細(xì)胞分化、增殖、侵襲、吸附、凋亡等方面具有重要的調(diào)控作用，miRNA異常調(diào)控常伴隨基因突變、缺失、DNA甲基化水平異常等表觀遺傳學(xué)的改變，這些基因表觀遺傳學(xué)的改變與腫瘤的發(fā)生及發(fā)展存在密切聯(lián)系[10-11]。

miRNA包括抑癌和促癌兩大類，抑癌miRNA一般在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)較低，主要作用是促進(jìn)細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲后轉(zhuǎn)移；促癌miRNA一般在腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)，作用是抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲后轉(zhuǎn)移[11-12]。miRNA-1290是miRNA中的一個(gè)重要組成分子，有研究發(fā)現(xiàn)，miRNA-1290在肝癌、肺癌、宮頸癌、胃癌患者中的相對(duì)表達(dá)水平異常升高，可能成為腫瘤早期診斷及預(yù)測(cè)預(yù)后的一項(xiàng)重要標(biāo)志分子[13]。本研究發(fā)現(xiàn)，胃癌患者血清miRNA-1290相對(duì)表達(dá)水平明顯高于健康人，提示miRNA-1290在胃癌的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮了重要作用[14-15]。通過觀察胃癌患者miRNA-1290相對(duì)表達(dá)水平與不同臨床特征的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，不同TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、分化程度、腫瘤直徑胃癌患者血清miRNA-1290相對(duì)表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；不同性別、年齡、病理類型胃癌患者血清miRNA-1290相對(duì)表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。提示miRNA-1290的相對(duì)表達(dá)水平與胃癌的進(jìn)展程度有關(guān)[16-17]。ROC曲線顯示，AUC為0.816，miRNA-1290診斷胃癌具有較高的靈敏度和特異度，可作為臨床胃癌早期診斷及判斷患者預(yù)后的靶基因。miRNA-1290能夠抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖、分化及轉(zhuǎn)移，可能與調(diào)控某種基因有關(guān)，具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究[18]。

綜上所述，miRNA-1290在胃癌患者血清中相對(duì)表達(dá)水平升高，對(duì)胃癌具有一定的診斷價(jià)值，可作為胃癌早期診斷的一項(xiàng)重要分子標(biāo)志。