王金輝 徐勇軍 蘇玉萍 陳祖湘

廈門市兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建廈門 361006

呼吸道感染是兒科最常見的疾病之一，其中病毒是引起兒童呼吸道疾病常見的病原體。呼吸道病毒主要包括呼吸道合胞病毒（RSV）、腺病毒（ADA）、流感A型病毒（FA）、流感B型病毒（FB）、副流感Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型病毒（PIV1、2、3）[1]。兒童上呼吸道感染如果不及時(shí)治療，可發(fā)展為氣管炎、支氣管炎等下呼吸道感染，并伴有嚴(yán)重的并發(fā)癥[2]。不同的呼吸道病毒可以引起相似的臨床癥狀，但所引起的疾病和預(yù)后是不同的，因此呼吸道病毒感染初期應(yīng)得到廣泛重視[3]。病毒抗原侵入呼吸道上皮細(xì)胞后復(fù)制增殖，在疾病的早期通過抗原的檢測可以對呼吸道脫落上皮細(xì)胞進(jìn)行抗原檢測，確定病毒種類，為臨床的早期診斷提供依據(jù)[4]。本研究就我院2019年3月至2020年2月呼吸道病毒感染病原構(gòu)成和流行病學(xué)進(jìn)行分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2019年3月至2020年2月來我院就診的呼吸道感染患兒的咽拭子標(biāo)本12 394例，其中男7365例（59.4%），女5029例（40.6%）。按年齡段數(shù)據(jù)分成以下組別：嬰兒組（0～＜1歲）、幼兒組（1～＜3歲）、學(xué)齡前組（3～＜7歲）、學(xué)齡組（7～14歲）。

1.2 方法

1.2.1 試劑與儀器 七項(xiàng)呼吸道病毒檢測試劑盒（D3 Ultra DFA Respiratory Virus Screening &ID kit）購自美國Diagnostic Hybrids公司；熒光顯微鏡（萊卡公司）；渦旋振蕩器。

1.2.2 樣本采集和處理 采集患兒鼻咽分泌物，采集后放置于病毒采集管中。渦旋后吹打成黏液，2000 r離心5 min，加入2 ml磷酸鹽緩沖液洗滌，混合均勻后離心，棄上清，溶于0.5 ml PBS中，制成懸液。

1.2.3 直接免疫熒光法 分別吸取25 μl細(xì)胞懸液，滴入8孔板中，干燥后固定。按照試劑盒說明書計(jì)入TITC標(biāo)記的熒光抗體，放置20 min后封片待檢。

1.2.4 檢測標(biāo)準(zhǔn) 使用熒光顯微鏡觀察，顯示綠色熒光為抗原陽性細(xì)胞，紅色熒光為抗原陰性細(xì)胞。通常細(xì)胞內(nèi)熒光信號≥2個判斷為陽性，否則為陰性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

使用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，采用χ2檢驗(yàn)；P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同種類病毒感染陽性率的檢出情況

本實(shí)驗(yàn)共分析12 394例患兒的咽拭子，其中2161例陽性標(biāo)本，標(biāo)本陽性率為17.4%，包含2389次陽性結(jié)果。單項(xiàng)病毒感染檢出1962例，混合病毒感染檢出199例，其中185例標(biāo)本檢出兩種病毒混合感染，14例標(biāo)本報(bào)告三種及以上病毒感染。RSV感染的比例最高，占44.87%；其次是ADA，占30.81%；其他五項(xiàng)感染的比例低。ADA和RSV組與其他組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。不同種類病毒檢出情況見表1。

表1 七項(xiàng)病毒感染陽性率檢出情況

2.2 不同年齡段患兒呼吸道病毒感染檢出情況

按照基本資料中的年齡段進(jìn)行分組，其中幼兒組RSV的檢出率最高，占80.41%；學(xué)齡前組ADA的檢出率最高，占39.27%；已檢出病毒陽性患兒的年齡分布比例中，幼兒期檢出陽性率最高（67.48%），與其他組別比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。七種病毒檢出的情況見表2。

表2 不同年齡段患兒呼吸道病毒感染檢出情況[n（%）]

2.3 2019年3月至2020年2月患兒病毒檢出情況

2019年3月至2020年2月，6—8月ADA的比例最高，占總檢出率的64.97%，與其他組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；而其他時(shí)間段感染均以RSV為主，尤其秋冬春季。不同季節(jié)病毒檢出的情況見表3。

表3 2019年3月至2020年2月病毒檢出情況[n（%）]

3 討論

呼吸道感染是兒科最常見的疾病之一，病毒是引起兒童呼吸道感染最常見的病原體[5]。本研究回顧2019年3月至2020年2月我院患兒呼吸道病毒檢出的情況。這一期間的標(biāo)本病毒檢出率是17.4%，共有2389次陽性結(jié)果。本研究中選擇使用直接熒光免疫抗原檢測方法，也是目前國內(nèi)外兒科病毒診斷的首選方法[6]。通過單克隆熒光抗體標(biāo)記呼吸道脫落細(xì)胞內(nèi)的病毒抗原相結(jié)合，其敏感性達(dá)到98%，特異性達(dá)到86%，是穩(wěn)定可靠的方法，符合臨床需求[7]。本研究中病毒陽性率略低于國內(nèi)其他文獻(xiàn)的報(bào)道[8]，這應(yīng)該與地域氣溫偏高有關(guān)系。廈門緯度低，同期氣溫高于大部分地區(qū)，因此呼吸道病毒的發(fā)生率略低于國內(nèi)平均水平。

在2389例陽性病毒感染例數(shù)中，RSV和ADA的檢出比例最高，占總陽性數(shù)的45.16%和31.00%。在嬰幼兒時(shí)期，RSV的檢出比例均明顯高于其他種類病毒，這與國外的報(bào)道相一致[9]。RSV的感染率很高，大多數(shù)的幼兒至少經(jīng)歷過一次感染，這與嬰幼兒期呼吸道發(fā)育不完善和免疫功能低有關(guān)[10]。嬰兒期由于接觸外界機(jī)會少，隨著生長發(fā)育至幼兒期，活動范圍和接觸外界機(jī)會增多，但此時(shí)的免疫系統(tǒng)還不完善，因此幼兒期檢出病毒感染的比例最高。隨著年齡的增長，呼吸系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)都得到提高，各種病毒感染的比例也發(fā)生了變化[11-12]。

據(jù)本研究結(jié)果分析，呼吸道病原呈現(xiàn)隨季節(jié)變化的流行趨勢。秋冬季氣溫較低，冷熱變化交替，RSV發(fā)生率高，占75.14%；夏季ADA感染多見，占64.97%。RSV感染可表現(xiàn)為嚴(yán)重的肺部炎癥和介導(dǎo)氣道重構(gòu)，因此，準(zhǔn)確識別感染病原的種類，有助于臨床醫(yī)生制訂正確的診斷和治療方案[13]。

兒童呼吸道病毒感染的臨床表現(xiàn)多樣，從輕微的、自限的上呼吸道感染到嚴(yán)重的甚至致死性的下呼吸道感染[14]。通過呼吸道病毒檢測可以及時(shí)有效地對病毒的種類及流行趨勢進(jìn)行監(jiān)測，觀察病情，指導(dǎo)用藥，尤其對嬰幼兒急性呼吸道感染的治療提供依據(jù)。兒童呼吸道感染的流行季節(jié)性明顯，往往會在一段時(shí)間造成區(qū)域流行[15]。因此準(zhǔn)確識別感染源，制訂恰當(dāng)?shù)闹委煼桨负蛻?yīng)對突發(fā)的流行趨勢，是兒科醫(yī)務(wù)工作者急需關(guān)注的實(shí)際問題。

綜上所述，兒童呼吸道感染以呼吸道合胞病毒和腺病毒感染常見；掌握病毒感染的年齡特點(diǎn)和季節(jié)特點(diǎn)為臨床早期診斷、合理用藥及預(yù)防并發(fā)癥有重要意義。