姜莉莉，孫瑞紅，宮慶濤，武海斌，武沖

（山東省果樹研究所，山東 泰安 271000）

草莓（Fragaria×ananassa Duchesne）屬薔薇科草莓屬宿根性草本植物［1］。其果實(shí)營養(yǎng)豐富、口感上佳，深受消費(fèi)者喜愛，是我國重要的經(jīng)濟(jì)作物。近年來隨著設(shè)施栽培草莓面積的不斷擴(kuò)大，規(guī)?；a(chǎn)地區(qū)草莓輪作、倒茬困難，病害發(fā)生日益嚴(yán)重［2］。草莓炭疽病是危害草莓、造成減產(chǎn)的主要病害［3］。炭疽病在草莓整個生育期內(nèi)均可發(fā)生，在繁苗階段和定植初期發(fā)生最為普遍，主要危害草莓根部和匍匐莖，造成根部腐爛和整株萎蔫死亡［4］。

目前對草莓炭疽病的防治手段主要包括農(nóng)業(yè)防治、生物防治和化學(xué)防治。農(nóng)業(yè)防治措施主要為選育抗病品種，加強(qiáng)田間管理等［5］。生物防治主要在研究階段，尚未獲得產(chǎn)品登記［6］。作為鮮食水果，市場對草莓的口感品質(zhì)要求較高，當(dāng)前國內(nèi)主栽草莓品種大都高感炭疽?。?］，化學(xué)防治仍是控制炭疽病的有效手段［8］。本研究選取了7種常用殺菌劑，評價(jià)其對草莓炭疽病菌的室內(nèi)毒力，并選取高效藥劑進(jìn)行盆栽防效試驗(yàn)，以期為該病害的科學(xué)防治提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試藥劑

98%多菌靈原藥，山東濰坊潤豐化工股份有限公司；97%吡唑醚菌酯原藥，浙江宇龍生物科技股份有限公司；97%苯醚甲環(huán)唑原藥和98%肟菌酯原藥，山東省聯(lián)合農(nóng)藥工業(yè)有限公司；98%嘧菌酯原藥，山東濰坊雙星農(nóng)藥有限公司；98%咯菌腈原藥，河北興柏農(nóng)業(yè)科技有限公司；97%咪鮮胺原藥，山東華陽農(nóng)藥化工集團(tuán)有限公司。多菌靈以3%的鹽酸溶液溶解，其余供試原藥均由丙酮溶解，配置成濃度為1×104mg·L－1的母液，于4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

450 g·L－1咪鮮胺水乳劑，浙江天豐生物科學(xué)有限公司；20%咯菌腈懸浮劑，青島凱源祥化工有限公司；250 g·L－1苯醚甲環(huán)唑乳油，江蘇禾本生化有限公司。

1.2 病原菌分離

草莓炭疽病株采自山東省果樹研究所金牛山試驗(yàn)基地草莓大棚。采用病組織分離法［9］進(jìn)行病原菌分離：將病健交界處（圖1）組織在75%乙醇溶液中浸泡30 s，以滅菌水沖洗3次；將處理好的病組織置于PDA培養(yǎng)基中央，25℃黑暗培養(yǎng)5 d；待菌落形成后挑取邊緣菌絲于新的PDA平板上進(jìn)一步純化培養(yǎng)。以PDA斜面培養(yǎng)基4℃保存，備用。

圖1 炭疽病病健交界處

根據(jù)柯赫氏法則［10］，在‘章姬’草莓莖基部以手術(shù)刀切數(shù)條小口，將培養(yǎng)7 d的炭疽病菌菌落連同培養(yǎng)基回接至切口處，進(jìn)行常規(guī)栽培管理，觀察接種植株的發(fā)病癥狀與田間癥狀是否一致。

1.3 室內(nèi)毒力測定

采用菌絲生長速率法［11］進(jìn)行殺菌劑室內(nèi)毒力測定。在超凈工作臺上，以無菌水將7種供試藥劑母液進(jìn)行梯度稀釋；取1 mL各濃度藥液于49 mL冷卻至50～60℃的PDA培養(yǎng)基中，充分混勻后倒板，每個濃度3次重復(fù)。咪鮮胺和咯菌腈濃度為0.05、0.10、0.20、0.40、1.00 mg·L－1，苯醚甲環(huán)唑的濃度為0.1、0.2、0.4、1.0、2.0 mg·L－1，多菌靈濃度為1.0、2.5、5.0、10.0、25.0 mg·L－1，吡唑醚菌酯、嘧菌酯和肟菌酯的濃度為2.5、5.0、10.0、25.0、50.0 mg·L－1。

以直徑7 mm的打孔器在活化好的草莓炭疽病菌菌落邊緣打取菌餅，接種于上述含藥PDA平板上，以無菌水處理為對照。25℃黑暗培養(yǎng)，待對照菌落長至培養(yǎng)皿2／3處時，采用十字交叉法［12］測量菌落直徑，計(jì)算各藥劑處理對草莓炭疽病菌菌絲生長的抑制率，采用SPSS 18.0軟件計(jì)算各藥劑的EC50值，并以毒力最低藥劑的EC50值為基準(zhǔn)值計(jì)算其它藥劑的相對毒力指數(shù)。

抑制率（%）＝（對照組菌落直徑－處理組菌落直徑）／（對照組菌落直徑－菌餅直徑）×100。

1.4 盆栽藥效試驗(yàn)

根據(jù)《中國農(nóng)藥信息網(wǎng)》公布的藥劑推薦劑量進(jìn)行盆栽藥效試驗(yàn)。從草莓炭疽病發(fā)病嚴(yán)重的地塊取土，裝入直徑15 cm的塑料花盆，移入三葉一心期‘章姬’草莓幼苗。試驗(yàn)共設(shè)4個處理，分別為20%咯菌腈懸浮劑2 000倍液20 mL／株、450 g·L－1咪鮮胺水乳劑4 500倍液20 mL／株、250 g·L－1苯醚甲環(huán)唑乳油2 500倍液20 mL／株，以及清水對照。每個處理重復(fù)3次，每個重復(fù)10盆。

移栽后14 d調(diào)查草莓炭疽病的發(fā)病率和病情級數(shù)，并計(jì)算防治效果。病情分級標(biāo)準(zhǔn)［13］：0級，無任何癥狀；1級，點(diǎn)狀病斑，長度≤2.0 mm；3級，病斑長度介于2.1～5.0 mm；5級，病斑長度介于5.1～9.0 mm；7級，病斑長度介于9.1～15.0 mm；9級，植株萎蔫。

發(fā)病率（%）＝發(fā)病株數(shù)／總株數(shù)×100；

病情指數(shù)＝∑（病情級數(shù)×該級病害株數(shù)）／（最高病情級數(shù)×總株數(shù)）×100；

防治效果（%）＝（對照組病情指數(shù)－處理組病情指數(shù)）／對照組病情指數(shù)×100。

2 結(jié)果與分析

2.1 病原菌分離

如圖2所示，從草莓病株分離得到的病原菌在25℃黑暗條件下培養(yǎng)5 d，菌落厚實(shí)，有灰白色氣生絨毛；培養(yǎng)10 d后，菌落中央出現(xiàn)橘色黏質(zhì)孢子堆，與張海英等［14］報(bào)道的草莓炭疽病菌特征一致。

圖2 草莓炭疽病菌菌落形態(tài)

病原菌回接至‘章姬’草莓健株7 d后，草莓莖基部變褐色，植株出現(xiàn)萎蔫（圖3），與田間初期發(fā)病癥狀一致。

圖3 草莓炭疽病菌回接后癥狀

2.2 不同濃度下7種殺菌劑對草莓炭疽病菌的抑制率

由表1可知，咯菌腈對草莓炭疽病菌的抑制效果最佳，濃度為0.05～1.00 mg·L－1時的抑制率為37.73%～75.17%。咪鮮胺濃度為0.05～1.00 mg·L－1時的抑制率為29.10%～81.52%；苯醚甲環(huán)唑濃度為0.1～2.0 mg·L－1時，抑制率為33.63%～68.03%，抑菌活性均較高。多菌靈濃度為1.0～25.0 mg·L－1時，抑制率為29.12%～84.02%。吡唑醚菌酯、嘧菌酯和肟菌酯對草莓炭疽病菌的抑制作用較低，濃度為2.5～50.0 mg·L－1時，吡唑醚菌酯抑制率為36.18%～78.06%，嘧菌酯抑制率為29.85%～71.49%，肟菌酯抑制率為31.08%～69.99%。

表1 不同濃度下7種殺菌劑對草莓炭疽病菌的抑制率

2.3 7種殺菌劑對草莓炭疽病菌的毒力

由表2可知，供試7種殺菌劑中，咯菌腈對草莓炭疽病的室內(nèi)毒力最高，EC50值為0.117 mg·L－1，相較于嘧菌酯的相對毒力指數(shù)高達(dá)104.66。咪鮮胺和苯醚甲環(huán)唑?qū)Σ葺烤也〉氖覂?nèi)毒力也較高，EC50值分別為0.141mg·L－1和0.357mg·L－1，相對毒力指數(shù)分別為86.84和34.30。嘧菌酯對草莓炭疽病菌的室內(nèi)毒力最低，EC50值為12.245mg·L－1。多菌靈、吡唑醚菌酯和肟菌酯的室內(nèi)毒力也較低，EC50值分別為3.475、5.703、10.345 mg·L－1，相對毒力指數(shù)分別為3.52、2.15和1.18。

表2 7種殺菌劑對草莓炭疽病菌的室內(nèi)毒力

2.4 3種殺菌劑對草莓炭疽病的盆栽防效

由表3可以看出，對照組的炭疽病發(fā)病率高達(dá)46.67%。通過灌根處理，20%咯菌腈懸浮劑2 000倍液對炭疽病的盆栽防效最高，為92.86%；450 g·L－1咪鮮胺水乳劑4 500倍液和250 g·L－1苯醚甲環(huán)唑乳油2 500倍液防效也較高，分別為91.68%和89.29%。

表3 3種殺菌劑對草莓炭疽病的盆栽防效

3 討論與結(jié)論

炭疽病菌屬復(fù)雜，致病力強(qiáng)，包括多個致病種，且同一菌株對不同殺菌劑的敏感性差異較大［15］。本研究通過室內(nèi)毒力測定發(fā)現(xiàn)，分離得到的草莓炭疽病菌對咯菌腈敏感性最高，EC50值僅為0.117 mg·L－1，咪鮮胺和苯醚甲環(huán)唑的室內(nèi)毒力也較高，EC50值分別為0.141 mg·L－1和0.357 mg·L－1。這與劉霞［16］、張俊有［17］等的結(jié)果一致。

咯菌腈屬苯吡咯類非內(nèi)吸性殺菌劑，防病譜較廣。咪鮮胺屬咪唑類脫甲基抑制劑，高效、廣譜、滲透性強(qiáng)，通過抑制脫甲基酶的活性，使麥角甾醇合成受阻，導(dǎo)致真菌細(xì)胞膜不能正常形成，從而引起細(xì)胞死亡［18］。苯醚甲環(huán)唑?qū)儆谌蝾愮薮济摷谆种苿哂休^強(qiáng)的內(nèi)吸性［19］，對多種病害具有較持久的保護(hù)和治療作用［20］。本試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，通過灌根處理，20%咯菌腈懸浮劑2 000倍液對炭疽病的盆栽防效最高，達(dá)92.86%；450 g·L－1咪鮮胺水乳劑4 500倍液和250 g·L－1苯醚甲環(huán)唑乳油2 500倍液防效分別達(dá)91.68%和89.29%。由此可見，咯菌腈、咪鮮胺和苯醚甲環(huán)唑可以考慮用于防治草莓炭疽病，但其田間藥效結(jié)果尚有待進(jìn)一步研究。