杜忠偉，胡志強(qiáng)，亢學(xué)平，王 旭，李 健，王 鑫

（延邊朝鮮族自治州農(nóng)業(yè)科學(xué)院，吉林 延吉 133000）

桑黃作為藥用真菌在我國有著悠久的食用歷史，從中藥學(xué)專著《神農(nóng)本草經(jīng)》到《藥性論》都記載了其藥用價(jià)值[1－2]。桑黃（Sanghuangporus spp．）是一類真菌的統(tǒng)稱，2016年桑黃孔菌屬（Sanghuangporus）作為新屬發(fā)表[3]?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)“桑黃”含有多種藥理功效顯著的物質(zhì)，如多糖、萜類、酚類、黃酮類等[4－6]。桑黃的作用主要有抗氧化、增強(qiáng)免疫力、抗腫瘤、抗菌、保肝、降低血脂、預(yù)防和治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、抑制尿酸和抗過敏等[7]。研究證實(shí)桑黃多糖能夠緩解疼痛、食欲不振、體重減輕及疲勞倦怠等癌癥特有的癥狀，提高生活品質(zhì)[8－11]。近些年來隨著對桑黃藥用價(jià)值研究的深入，桑黃的人工栽培越來越受到關(guān)注。然而，雖然在我國吉林、安徽、浙江等地人工栽培桑黃已形成產(chǎn)業(yè)，但在菌種選育和栽培方法上存在著菌種性狀不明確、栽培技術(shù)不成熟、管理不規(guī)范、雜菌污染嚴(yán)重等問題。因此，通過對8個桑黃菌株進(jìn)行菌絲生長特性和栽培試驗(yàn)，旨在選育出適合人工栽培的桑黃菌株。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 供試菌株

桑黃菌株編號和菌株來源見表1。

表1 桑黃菌株編號及來源Tab.1 Number and source of Sanghuangporus spp.strains

如表1所示，8株供試菌株試管菌種收集于全國不同地區(qū)，保存于延邊朝鮮族自治州農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所。

1.1.2 培養(yǎng)基配方

母種培養(yǎng)基（馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基）PDA：去皮馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g、磷酸二氫鉀3 g、硫酸鎂1.5 g，蒸餾水1 000 mL，pH自然。

原種培養(yǎng)基：玉米粒90%、木屑8%、麩皮2%，含水量65%，pH自然。

栽培種培養(yǎng)基：闊葉硬雜木木屑75%、麥麩22%、豆粉1%、玉米粉1%、石膏粉0.5%、白灰0.5%，含水量65%，pH自然。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 菌絲生長特性研究

將不同菌株的桑黃接種至直徑為9 cm的PDA培養(yǎng)基平板，28℃培養(yǎng)。待桑黃菌絲長滿平板后，用直徑為5 mm的打孔器，打出相同大小的菌塊，接入PDA培養(yǎng)皿中心位置，每個菌株5次重復(fù)。28℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，待菌絲萌發(fā)后，每天測量1次菌絲直徑（L，cm），計(jì)算平均值。當(dāng)菌絲長至培養(yǎng)皿邊緣時(shí)候，計(jì)算菌絲平均生長速度（V，cm·d-1），計(jì)算公式為：

式中：S為菌絲長度（cm）；D為菌絲生長天數(shù)（d）。

對各菌株菌絲平均生長速度進(jìn)行差異顯著性分析（顯著水平 P＜0.05）。

1.2.2 拮抗試驗(yàn)

使用直徑為5 mm的瓊脂打孔器，打出相同大小的接種塊，接入PDA培養(yǎng)皿中，采用每個平板接種2個不同的菌株方法，培養(yǎng)1周左右觀察菌種菌絲間是否有拮抗現(xiàn)象，記錄拮抗特征并拍照。

1.2.3 栽培試驗(yàn)

1）栽培袋制作及培養(yǎng)

桑黃栽培基質(zhì)按照栽培種的配方配制，將配制好的栽培料裝入18 cm×30 cm的聚丙烯塑料袋中。每袋濕重約1 kg，每個菌株接種50袋，高溫高壓滅菌（121℃，2 h）。冷卻后在超凈工作臺下將培養(yǎng)好的原種接至栽培袋中，放入培養(yǎng)室28℃避光培養(yǎng)。當(dāng)菌絲長滿菌袋后進(jìn)行光照刺激使菌袋轉(zhuǎn)色，繼續(xù)培養(yǎng)15 d～20 d至菌袋表面變?yōu)樯铧S色，并伴有瘤狀凸起后，轉(zhuǎn)移至溫室大棚內(nèi)進(jìn)行開口和出菇管理。

2） 出菇管理

東北地區(qū)在6月初進(jìn)行出菇培養(yǎng)。將培養(yǎng)好的菌袋轉(zhuǎn)移至大棚，大棚地面覆蓋3 cm～5 cm的細(xì)沙，并用水澆透。使用壁紙刀在距離菌袋底部5 cm處劃口，形狀為月牙狀，長5 cm～8 cm，寬1 cm。開口后的菌袋底部朝上直立擺放在澆透水的沙土地面，在擺放好的菌袋上覆蓋塑料膜和遮陽網(wǎng)，5 d～7 d即可長出原基。待桑黃原基長出，去掉塑料膜和遮陽網(wǎng)，保持棚內(nèi)溫度在28℃～30℃，濕度在85%～90%，棚外覆蓋遮陽網(wǎng)使棚內(nèi)光照強(qiáng)度在200 lx～300 lx，每天適當(dāng)?shù)耐L(fēng)保證氧氣的供應(yīng)，促進(jìn)桑黃子實(shí)體生長[12-13]。

3） 產(chǎn)量測定

當(dāng)天氣變冷，桑黃子實(shí)體不再生長時(shí)，對桑黃進(jìn)行采收。同一菌株的子實(shí)體放入一個網(wǎng)袋中，采收后放入55℃烘干箱烘干，稱重后計(jì)算單袋平均產(chǎn)量（m，g/袋）。

式中：M為總產(chǎn)量（g）；n為總袋數(shù)（袋）。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌絲生長特性

不同桑黃菌株的菌絲生長速率及培養(yǎng)至第7天的菌落形態(tài)見表2、圖1。

如圖1所示，不同桑黃菌株菌落均呈放射狀、淺黃色，當(dāng)菌絲長滿平板后會形成氣生菌絲，菌絲成熟后菌落顏色變深。如表2所示，不同桑黃菌株的菌絲生長速率差異明顯。

表2 8株桑黃菌絲生長速率及長勢Tab.2 Mycelium average growth rate and growth vigor of 8 Sanghuangporus spp.strains

圖1 菌落形態(tài)Fig.1 The colony morphology

2.2 菌絲拮抗試驗(yàn)

親緣關(guān)系較近的菌株之間無拮抗或拮抗不明顯，而親緣關(guān)系較為疏遠(yuǎn)、不同遺傳背景的菌株之間則拮抗作用十分明顯，其菌絲的交匯區(qū)會形成分界線，發(fā)生菌絲隆起以及在平板背面有褐色色素沉淀[14-15]。拮抗試驗(yàn)結(jié)果見表3。

由表3可知，8個桑黃菌株菌絲培養(yǎng)7 d～9 d觀察拮抗情況。初步可以推斷，菌株YBSH1與YBSH4間、菌株YBSH7和YBSH8間無拮抗反應(yīng)，說明其為遺傳親緣關(guān)系較近的桑黃菌株。其他均有拮抗反應(yīng)，形成拮抗線，說明其為無遺傳親緣關(guān)系的桑黃菌株。

表3 8個桑黃菌株菌絲拮抗試驗(yàn)Tab.3 Mycelial antagonistic test of 8 Sanghuangporus spp.strains

2.3 出菇試驗(yàn)結(jié)果

出菇試驗(yàn)結(jié)果見圖2、表4。

如圖2所示，當(dāng)菌袋長滿后進(jìn)行轉(zhuǎn)色培養(yǎng)，通過光照刺激使得菌袋表層菌絲顏色變黃，菌袋變得緊實(shí)，有利于開口出菇，不同菌種轉(zhuǎn)色后菌袋顏色存在差別。6月初將轉(zhuǎn)色好的桑黃栽培袋開口后，空氣進(jìn)入刺激菌絲生長，3 d～5 d開口處長滿菌絲，6 d～10 d即可長出原基。原基形成后經(jīng)過一段時(shí)間分化形成子實(shí)體，其中只有菌株YBSH5、YBSH7、YBSH8能形成具有菌蓋和菌孔的子實(shí)體，菌株YBSH5子實(shí)體黃色，馬蹄形至平展；菌株YBSH7和菌株YBSH8子實(shí)體馬蹄形至貝殼形，較厚，菌蓋黃棕色，菌孔灰褐色。

圖2 桑黃菌株培養(yǎng)至第60天的出菇情況Fig.2 Fruiting body of 8 Sanghuangporus spp.on the 60th day

如表4所示，8個桑黃菌株接種后萌發(fā)時(shí)間均為2 d，菌株YBSH7和YBSH8菌袋長滿時(shí)間最快為27 d，與母種培養(yǎng)期間菌絲生長速率基本一致；其次為菌株YBSH2、YBSH5需要34 d長滿；最慢的是菌株YBSH1、YBSH3、YBSH4、YBSH6滿袋時(shí)間均為35 d。對培養(yǎng)期間的污染情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，菌株YBSH5和菌株YBSH7未發(fā)生雜菌污染，初步判斷2個菌株抗雜菌能力較強(qiáng)。

表4 桑黃菌株栽培特性比較Tab.4 Comparison of cultivation characteristics of Sanghuangporus spp.strains

桑黃菌株YBSH5、YBSH7和YBSH8栽培后能產(chǎn)生完整的子實(shí)體，經(jīng)計(jì)算，菌株YBSH5平均干重產(chǎn)量為20 g/袋～30 g/袋，菌株YSSH7和菌株YBSH8平均干重產(chǎn)量為28 g/袋～40 g/袋。

3 結(jié)論

通過對8個桑黃菌株的菌絲培養(yǎng)試驗(yàn)、拮抗試驗(yàn)和栽培試驗(yàn)，比較了菌絲體生長特性和栽培過程中栽培袋在培養(yǎng)至出菇期間的變化，結(jié)果表明菌株YBSH7和YBSH8菌絲生長速率最快；菌株YBSH1和YBSH4之間，菌株YBSH7和YBSH8之間無拮抗反應(yīng)；菌株YBSH5、YBSH7和YBSH8栽培后能產(chǎn)生完整的子實(shí)體，同時(shí)，菌株YBSH7和YBSH8產(chǎn)量高于菌株YBSH5。經(jīng)過綜合比較，菌株YBSH7和YBSH8桑黃菌株更適合在北方地區(qū)進(jìn)行人工栽培，為進(jìn)一步研究這2個株桑黃菌株的親緣關(guān)系，需要采用分子生物學(xué)手段進(jìn)行DNA鑒定。

目前隨著桑黃產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，人工栽培技術(shù)還不是很成熟，無論是桑黃菌種的選育還是栽培管理方式方法都存在很多問題，導(dǎo)致生產(chǎn)出的產(chǎn)品質(zhì)量也參差不齊，因此針對如何栽培出優(yōu)質(zhì)的桑黃，需要在桑黃優(yōu)良菌種選育及配套栽培技術(shù)上進(jìn)行研究。