劉 銘，吳坤英，郭寶芝，宋芷霜，張 青，李新敏

(1.鄭州市婦幼保健院婦產(chǎn)科 河南 鄭州 450053；2.鄭州市婦幼保健院病理科 河南 鄭州 450053)

宮頸癌屬女性生殖系統(tǒng)常見(jiàn)惡性腫瘤，好發(fā)于30～55歲女性，在全球范圍內(nèi)每年約有50萬(wàn)宮頸癌新發(fā)病例，占所有新發(fā)惡性腫瘤患者的5%左右，同時(shí)每年病死患者約21萬(wàn)，我國(guó)每年約有13萬(wàn)宮頸癌新發(fā)病例，約占所有宮頸癌新發(fā)病例27%，且呈現(xiàn)出發(fā)病率逐漸升高及發(fā)病人群年輕化趨勢(shì)，對(duì)我國(guó)女性生命安全構(gòu)成嚴(yán)重威脅[1-3]。同時(shí)，宮頸癌起病較隱匿，大部分患者于疾病確診時(shí)已處于中晚期，存在轉(zhuǎn)移癥狀，治療難度大，預(yù)后差，遠(yuǎn)期生存率低[4-5]。探尋一種宮頸癌早期診斷及病情評(píng)定方法對(duì)提高疾病早期確診率、指導(dǎo)臨床進(jìn)行及時(shí)科學(xué)治療、提升患者生存率尤為重要。性別決定區(qū)Y框蛋白2(sex determining region Y box 2，Sox-2)為重要轉(zhuǎn)錄因子之一，于胚胎干細(xì)胞保持自我更新和多向性發(fā)展中具有重要作用，對(duì)維持膠質(zhì)瘤祖細(xì)胞遺傳特性和增殖中也扮演著重要角色，其表達(dá)異常與食管癌、乳腺癌、肺癌等多種惡性腫瘤發(fā)生、進(jìn)展密切相關(guān)[6]。含亮氨酸重復(fù)序列G-蛋白偶聯(lián)受體5(leucine repeat containing G-protein coupled receptor 5，Lgr5)為小腸和毛囊等成體組織敏感干細(xì)胞標(biāo)志物，在基底細(xì)胞癌、肝癌、結(jié)直腸癌等多種類型惡性腫瘤組織均有高表達(dá)[7]。本研究以免疫組化S-P法檢測(cè)74例宮頸癌、39例宮頸上皮內(nèi)瘤變及36例正常宮頸組織石蠟包埋標(biāo)本Sox-2、Lgr5蛋白表達(dá)情況，旨在分析兩者表達(dá)和宮頸癌患者腫瘤分化程度等病理參數(shù)的關(guān)系，以期為臨床診斷、病情評(píng)價(jià)及基因靶向治療提供一定參考。報(bào)道如下。

1 資料及方法

1.1 一般資料收集2016年3月至2017年9月我院經(jīng)病理檢查證實(shí)的74例宮頸癌、39例宮頸上皮內(nèi)瘤變及36例正常宮頸組織石蠟包埋標(biāo)本，標(biāo)本均源自行手術(shù)切除治療且經(jīng)病理檢查證實(shí)的宮頸癌、宮頸上皮內(nèi)瘤變及子宮肌瘤患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：1)術(shù)前均未采取放化療及免疫治療；2)臨床資料完整；3)術(shù)后經(jīng)病理檢查證實(shí)為宮頸癌、宮頸上皮內(nèi)瘤變及子宮肌瘤。排除標(biāo)準(zhǔn)：1)心、腎、肝、肺等臟器存在器質(zhì)性病變者；2)合并其他類型惡性腫瘤者；3)合并精神系統(tǒng)疾病、血液系統(tǒng)疾病及認(rèn)知功能障礙者；4)哺乳、妊娠期女性；5)無(wú)法配合完成隨訪者。其中宮頸癌患者年齡24～79(45.31±8.92)歲；體質(zhì)量40～86(55.27±7.06)kg；病理類型：腺癌19例，鱗癌55例；腫瘤分化程度：低分化39例，高、中分化35例；臨床分期：Ⅰ～Ⅱ期30例，Ⅲ～Ⅳ期44例；浸潤(rùn)深度：T1～T222例，T3～T452例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移50例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移24例。宮頸上皮內(nèi)瘤變患者年齡25～78(44.60±8.13)歲，體質(zhì)量41～88(55.62±6.84)kg。子宮肌瘤患者年齡23～77(45.02±8.37)歲，體質(zhì)量42～89(56.14±6.72)kg。3組患者年齡比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究已經(jīng)獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)的審核同意。

1.2 方法Sox-2、Lgr5蛋白表達(dá)檢測(cè)方法：將石蠟包埋組織標(biāo)本實(shí)施切片，應(yīng)用免疫組化S-P法檢測(cè)宮頸癌、宮頸上皮內(nèi)瘤變及正常宮頸組織中Sox-2、Lgr5蛋白表達(dá)，檢測(cè)試劑盒購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明實(shí)施操作，所有操作均由同一組病理科醫(yī)師完成，將已知抗體陽(yáng)性標(biāo)本設(shè)為陽(yáng)性對(duì)照，PBS代替一抗設(shè)為陰性對(duì)照。

結(jié)果判斷方法：每張切片以隨機(jī)方法選擇4個(gè)高倍鏡視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)約200個(gè)細(xì)胞，依據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞百分比和細(xì)胞染色程度綜合施行結(jié)果判定。陽(yáng)性細(xì)胞百分比>50%計(jì)為3分，26%～50%計(jì)為2分，6%～25%計(jì)為1分，≤5%計(jì)為0分；染色程度：棕褐色計(jì)為3分，棕黃色計(jì)為2分，淡黃色計(jì)為1分，不著色計(jì)為0分。將上述2項(xiàng)評(píng)分相乘得出綜合評(píng)分，評(píng)分為9分判定為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)，6～8分判定為陽(yáng)性(++)，2～5分判定為弱陽(yáng)性(+)、不足2分判定為陰性(-)，將強(qiáng)陽(yáng)性、陽(yáng)性、弱陽(yáng)性均歸入陽(yáng)性結(jié)果[8]。

1.3 觀察指標(biāo)比較觀察宮頸癌、宮頸上皮內(nèi)瘤變和正常宮頸組織標(biāo)本Sox-2、Lgr5蛋白表達(dá)情況，并分析Sox-2、Lgr5蛋白表達(dá)和宮頸癌患者性別、體質(zhì)量、病理類型、腫瘤分化程度、臨床分期、腫瘤浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 24.0處理相關(guān)數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料用百分?jǐn)?shù)表示，比較用χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 宮頸癌、宮頸上皮內(nèi)瘤變和正常宮頸組織中Sox-2、Lgr5蛋白表達(dá)比較Sox-2、Lgr5蛋白在宮頸癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率分別為77.03%、79.73%，均高于宮頸上皮內(nèi)瘤變組織(38.46%、41.03%)和正常宮頸組織(5.56%、2.78%)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 宮頸癌、宮頸上皮內(nèi)瘤變和正常宮頸組織中Sox-2、Lgr5蛋白表達(dá)比較 n(%)

2.2 Sox-2、Lgr5蛋白表達(dá)與宮頸癌患者性別、體質(zhì)量的關(guān)系Sox-2、Lgr5蛋白在宮頸癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率與患者性別、體質(zhì)量均無(wú)關(guān)(P均>0.05。見(jiàn)表2。

表2 Sox-2、Lgr5蛋白表達(dá)與宮頸癌患者性別、體質(zhì)量的關(guān)系 n(%)

2.3 Sox-2、Lgr5蛋白表達(dá)與宮頸癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系Sox-2、Lgr5蛋白在宮頸癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率與患者病理類型無(wú)關(guān)(P>0.05)；Sox-2、Lgr5蛋白在宮頸癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率與患者的腫瘤分化程度、臨床分期、腫瘤浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，腫瘤分化程度為低分化、臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期、腫瘤浸潤(rùn)深度為T3～T4、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者Sox-2、Lgr5蛋白在宮頸癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率高于腫瘤分化程度為高中分化、臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期、腫瘤浸潤(rùn)深度為T1～T2及無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者(P均<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 Sox-2、Lgr5蛋白表達(dá)與宮頸癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系 n(%)

3 討論

宮頸癌為臨床常見(jiàn)惡性腫瘤，病因較復(fù)雜，與吸煙、初產(chǎn)年齡過(guò)小、多產(chǎn)多孕、多性伴、高危型人乳頭瘤病毒、滴蟲、沙眼衣原體感染等具有一定相關(guān)性，疾病早期常無(wú)明顯臨床表現(xiàn)，確診時(shí)多已處于中晚期，致使治療難度增加，易出現(xiàn)轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)，生存率低[9-11]。故探尋一種高效的宮頸癌早期診斷和病情評(píng)估方法一直為臨床研究重點(diǎn)。

既往研究[12]發(fā)現(xiàn)，宮頸癌患者機(jī)體中也存在腫瘤干細(xì)胞，在宮頸癌疾病發(fā)生、進(jìn)展中扮演著重要角色。Sox為重要的轉(zhuǎn)錄因子家族，在性別決定與分化、神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、多組織臟器形成等過(guò)程中均有著重要作用[13]。Sox-2可參與介導(dǎo)干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄過(guò)程，與Kruppel類因子4、八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子4等產(chǎn)生共同作用，誘導(dǎo)成體細(xì)胞形成多功能干細(xì)胞，起到干細(xì)胞調(diào)控作用[14-15]。有學(xué)者[16]報(bào)道，對(duì)機(jī)體Sox-2基因的表達(dá)實(shí)施干涉能抑制乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)向S期，促使其停滯在G1期，改變細(xì)胞形態(tài)。亦提示Sox-2基因表達(dá)與腫瘤增殖有著密切關(guān)系。徐文彬[17]研究發(fā)現(xiàn)，宮頸癌組織中Sox-2蛋白表達(dá)顯著高于非宮頸癌宮頸病理組織，且其表達(dá)情況與患者病理組織分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，Sox-2蛋白在宮頸癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率高于宮頸上皮內(nèi)瘤變和正常宮頸組織，且腫瘤分化程度為低分化、臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期、腫瘤浸潤(rùn)深度為T3～T4、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者Sox-2蛋白在宮頸癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率高于腫瘤分化程度為高中分化、臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期、腫瘤浸潤(rùn)深度為T1～T2及無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者(P<0.05)。這表明Sox-2在宮頸癌中呈高表達(dá)，且表達(dá)與患者腫瘤分化程度、臨床分期、腫瘤浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有著密切關(guān)系。推測(cè)其原因與宮頸癌患者機(jī)體中有腫瘤干細(xì)胞，且惡性程度越高宮頸癌組織中存在干細(xì)胞特性腫瘤細(xì)胞數(shù)量越多等有關(guān)。

Lgr5屬G蛋白偶聯(lián)受體超家族中的一員，于胚胎、器官發(fā)育和體內(nèi)細(xì)胞代謝調(diào)節(jié)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等方面均具有重要功能。臨床研究[18]證實(shí)，Lgr5是人類毛囊和小腸等成體組織的敏感干細(xì)胞標(biāo)志物，于多種惡性腫瘤中均呈現(xiàn)高表達(dá)，屬腫瘤干細(xì)胞潛在標(biāo)志物。呂轉(zhuǎn)等[19]研究發(fā)現(xiàn)，Lgr5在食管癌中呈高表達(dá)，且表達(dá)情況與食管鱗癌復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移侵襲等密切相關(guān)。另有研究[20]顯示，肝癌中也具有Lgr5高表達(dá)細(xì)胞。但其在女性生殖器官惡性腫瘤中的有關(guān)報(bào)道尚較少。馬琳等[21]研究發(fā)現(xiàn)，卵巢癌組織中Lgr5蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于其在正常組織中的陽(yáng)性表達(dá)率。張惠潔等[22]研究報(bào)道，乳腺癌中Lgr5呈高表達(dá)，且其表達(dá)與患者年齡、腫瘤部位、大小無(wú)關(guān)，與腫瘤浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移、臨床分期有關(guān)。上述研究亦提示了其在婦科腫瘤發(fā)生、進(jìn)展中的作用。本研究結(jié)果顯示，Lgr5蛋白在宮頸癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率均高于宮頸上皮內(nèi)瘤變和正常宮頸組織，且腫瘤分化程度為低分化、臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期、腫瘤浸潤(rùn)深度為T3～T4、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者Lgr5蛋白在宮頸癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率高于腫瘤分化程度為高中分化、臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期、腫瘤浸潤(rùn)深度為T1～T2及無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者(P均<0.05)。這表明Lgr5在宮頸癌中呈高表達(dá)，且表達(dá)與患者腫瘤分化程度、臨床分期、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有著密切關(guān)系。

綜上所述，Sox-2、Lgr5在宮頸癌中均呈高表達(dá)，且表達(dá)水平與患者疾病進(jìn)展有著密切關(guān)系，可將兩者作為宮頸癌早期診斷、病情及預(yù)后評(píng)價(jià)的重要指標(biāo)，通過(guò)阻斷兩者信號(hào)傳導(dǎo)通路可能發(fā)現(xiàn)治療宮頸癌的新靶點(diǎn)。