孟靜一 曹玲亞 李建寬 高建平

中圖分類號 R285 文獻標志碼 A 文章編號 1001-0408（2021）10-1209-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2021.10.09

摘 要 目的：研究黨參多糖對脾虛模型小鼠的補脾作用。方法：將60只雄性ICR小鼠隨機分為空白組，模型組，黨參多糖高、中、低劑量組[1.6、0.8、0.4 g/（kg·d）]和四君子湯組[30 g/（kg·d），以生藥總量計]，每組10只。除空白組外，其余各組小鼠均灌胃番瀉葉溶液（0.4 g/d）構建脾虛模型。造模后，各給藥組小鼠灌胃相應藥液，空白組和模型組小鼠灌胃20 mL/kg生理鹽水;每天給藥1次，連續(xù)6周。給藥結束后，測定小鼠體質(zhì)量并進行一般行為學觀察，記錄其全血中紅細胞計數(shù)，測定其血清中D-木糖、胃泌素（GAS）、胃動素（MTL）、生長抑素（SS）、血管活性腸肽（VIP）、淀粉酶（AMS）、免疫球蛋白（IgG和IgM）、脂多糖（LPS）含量，并測定其結腸組織中密封蛋白（Claudin）、閉合蛋白（Occludin） mRNA及其蛋白表達水平。結果：與空白組比較，模型組小鼠體質(zhì)量顯著減輕（P<0.05），出現(xiàn)了背毛稀疏、無光澤等脾虛癥狀;全血中紅細胞計數(shù)和血清中D-木糖、SS、VIP、AMS、IgG、IgM含量以及結腸組織中Claudin、Occludin mRNA及其蛋白的表達水平均顯著降低（P<0.05或P<0.01），血清中GAS、MTL、LPS含量均顯著升高（P<0.01）。與模型組比較，黨參多糖高劑量組小鼠體質(zhì)量顯著增加（P<0.05），脾虛癥狀顯著改善;除黨參多糖低劑量組小鼠血清中D-木糖、IgM含量和結腸組織中Claudin、Occludin mRNA及其蛋白表達水平差異無統(tǒng)計學意義外（P>0.05），其余各組小鼠上述指標均顯著改善（P<0.05或P<0.01）。結論：黨參多糖對番瀉葉所致的脾虛模型小鼠具有改善作用，其作用機制可能與調(diào)節(jié)其胃腸激素分泌、增強免疫以及保護腸黏膜屏障有關。

關鍵詞 黨參多糖;脾虛模型;補脾作用;胃腸激素;密封蛋白;閉合蛋白;小鼠

Study on the Tonifying Spleen Effect of Codonopsis pilosula Polysaccharides on Sennae Folium-induced Spleen-deficiency Model Mice

MENG Jingyi，CAO Lingya，LI Jiankuan，GAO Jianping（School of Pharmacy， Shanxi Medical University， Taiyuan 030001， China）

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To study the tonifying spleen effect of Codonopsis pilosula polysaccharides （CPP） on spleen-deficiency model mice. METHODS： Totally 60 ICR male mice were randomized into blank group， model group， CPP high-dose， medium-dose and low-dose groups [1.6， 0.8， 0.4 g/（kg·d）]， Sijunzi tang （SJZT） group [30 g/（kg·d），by crude drug]， with 10 mice in each group. Except for blank group， other groups were given Sennae Folium solution intragastrically （0.4 g/d） to establish spleen-deficiency model.? After modeling， administration groups were given relevant drug intragastrically， and blank group and model group were given 20 mL/kg normal saline intragastrically， once a day， for consecutive 6 weeks. After last administration， body weight of mice in each group was measured and their general behavioral characteristics were observed. The red blood cell count in whole blood were recorded， and the contents of D-xylose， gastrin （GAS）， motilin （MTL）， somatostatin （SS）， vasoactive intestinal peptide （VIP）， amylase （AMS）， immunoglobulin （IgG and IgM） and lipopolysaccharide （LPS） in serum were determined; mRNA and protein expressions of Claudin and Occludin in colon tissues of mice were also detected. RESULTS： Compared with blank group， body weight of mice in model group was significantly decreased （P<0.05）， and the spleen deficiency symptoms such as sparse back hair and no luster appeared; the red blood cell count in whole blood， serum contents of D-xylose， SS， VIP， AMS， IgG and IgM， mRNA and protein expressions of Claudin and Occludin were significantly decreased （P<0.05 or P<0.01）; serum contents of GAS， MTL and LPS were significantly increased （P<0.01）. Compared with model group， the body weight of mice were increased significantly in CPP high-dose group （P<0.05）， and spleen-deficiency symptom was improved significantly. Except for the serum contents of D-xylose and IgM， the protein expressions of Claudin and Occludin in colon tissue had no statistical significance in CPP low-dose group （P>0.05）， above indexes of other groups were improved significantly （P<0.05 or P<0.01）. CONCLUSION： CPP can improve spleen-deficiency model mice induced by Sennae Folium， the mechanism of which may be associated with regulating gastrointestinal hormone secretion， enhancing immunity and protecting intestinal mucosal barrier.

KEYWORDS? ?Codonopsis pilosula polysaccharides; Spleen- deficiency model; Tonifying spleen effect; Gastrointestinal hormone; Claudin; Occludin; Mice

黨參（Codonopsis Radix）是臨床常用的補益藥，有健脾益肺、養(yǎng)血生津的傳統(tǒng)功效[1]。中醫(yī)腑臟理論認為，“脾”是一個功能性結構單位，曰“脾為后天之本”“四季脾旺不受邪”“脾為之衛(wèi)”，充分反映了脾與機體防御功能的關系[2-3]。脾虛證是臨床常見證型，表現(xiàn)為運化功能失調(diào)及免疫功能受損，與多種疾病的發(fā)生密切相關[4]。黨參多糖是黨參發(fā)揮生物活性的重要物質(zhì)基礎之一，具有抗氧化應激、抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫等作用[5-6]。研究發(fā)現(xiàn)，黨參多糖在胃腸道消化系統(tǒng)疾病中發(fā)揮重要作用，可提高正常小鼠小腸蠕動能力、胃蛋白酶活性及其排出量[7]，也可緩解葡聚糖硫酸鈉誘導的結腸炎[8]，但有關黨參多糖補脾的作用機制研究尚少。鑒于此，本研究擬采用番瀉葉所致的苦寒瀉下脾虛小鼠動物模型來評價黨參多糖的補脾作用，并從調(diào)節(jié)胃腸激素分泌、增強免疫及保護腸黏膜屏障的角度來探討其補脾機制，為其進一步開發(fā)利用提供參考。

1 材料

1.1 主要儀器

MS 352型酶標儀購自芬蘭Thermo Labsystems公司;TG16W型微量高速離心機購自湖南湘儀離心機廠;LightCycler?96型實時熒光定量-聚合酶鏈式反應（qRF-PCR）儀購自瑞士Roche公司;PowerPacTM型電泳儀、ChemiDocTMMP型凝膠成像儀購自美國Bio-Rad公司;D30型核酸蛋白檢測儀購自德國Eppendorf公司;Z326K型臺式高速離心機購自德國Hermle公司;T2600型紫外-可見分光光度計購自上海佑科儀器儀表有限公司;KZ-Ⅱ型高速組織研磨儀購自武漢賽維爾生物科技有限公司;DMi8型倒置熒光顯微鏡購自德國Leica公司;101 型細胞計數(shù)器購自山東翼動新材料科技股份有限公司。

1.2 主要藥品與試劑

黨參藥材（批號20170901）購自山西省長治市，番瀉葉（批號20171201）、茯苓（批號181001）、炒白術（批號190402）、炙甘草（批號190301）藥材或飲片均購自山西省中醫(yī)院;以上藥材由山西醫(yī)科大學藥學院高建平教授鑒定分別為桔?？浦参稂h參Codonopsis pilosula（Franch）Nannf.的干燥根、狹葉番瀉Cassia angustifolia Vahl的干燥葉、多孔菌科真菌茯苓Poria cocos（Schw.）Wolf.的干燥菌核、菊科植物白術Atractylodes macrocephala Koidz.的干燥根莖、豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.的干燥根和根莖。D-木糖試劑盒（批號20191028）購自南京建成生物工程研究所;小鼠免疫球蛋白G（IgG）、IgM、胃泌素（Gas）、胃動素（MTL）、生長抑素（SS）、血管活性腸肽（VIP）、淀粉酶（AMS）酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）試劑盒（批號分別為MM-0057M1、MM-0058M1、MM-44405M1、MM-0492M1、MM-0493M1、MM-0446M1、MM-1018M1）均購自江蘇酶免實業(yè)有限公司;小鼠脂多糖（LPS）ELISA試劑盒（批號202012）購自上海江萊生物科技有限公司;PrimeScriptTM RT reagent Kit with gDNA Eraser反轉錄試劑盒（批號A170713A）、TB Green Premix Ex TaqTM（Tli RNaseH Plus）熒光定量試劑盒（批號AJ52620A）均購自寶生物工程（大連）有限公司;全蛋白提取試劑盒（批號KGP250）、BCA蛋白定量試劑盒（批號KGPBCA）均購自江蘇凱基生物技術股份有限公司;超敏ECL化學發(fā)光檢測試劑盒（批號 SW134-01）購自賽文創(chuàng)新（北京）生物科技有限公司;兔源密封蛋白（Claudin）多克隆抗體（批號13050-1-AP）、兔源閉合蛋白（Occludin）多克隆抗體（批號27260-1-AP）均購自武漢三鷹生物技術有限公司;兔源β-肌動蛋白（β-actin）多克隆抗體（批號GB11001）購自武漢賽維爾生物科技有限公司;辣根過氧化物酶標記的山羊抗兔IgG二抗（批號RS0002）購自美國ImmunoWay公司;其余試劑均為分析純或實驗室常用規(guī)格，水為蒸餾水。

1.3 動物

ICR小鼠60只，雄性，SPF級，體質(zhì)量（18±2）g，由斯貝福北京生物技術有限公司提供，動物生產(chǎn)許可證號為SCXK（京）2016-0002。小鼠購入后分籠飼養(yǎng)，自由攝食、飲水，飼養(yǎng)環(huán)境溫度為20～22 ℃、相對濕度為40%～60%。實驗操作均按照山西醫(yī)科大學實驗動物管理和使用委員會的要求執(zhí)行。

2 方法

2.1 藥液的制備

2.1.1 番瀉葉溶液 稱取番瀉葉藥材50 g，加5倍量（mL/g，下同）沸水，小火煎煮3.5 min，過濾，收集濾液并濃縮至1 g/mL（以生藥量計），即得。

2.1.2 四君子湯 四君子湯的中藥組成為黨參12 g、茯苓12 g、炒白術12 g、炙甘草6 g[9]。按處方量稱取各藥材或飲片，加入8倍量水浸泡1 h，再用小火煎煮1 h，過濾，收集濾液;濾渣繼續(xù)加6倍量水煎煮1 h，過濾，收集濾液。合并2次濾液，濃縮至2 g/mL（以生藥總量計），即得。

2.1.3 黨參多糖 黨參多糖的制備參照課題組前期方法[10]。稱取黨參藥材500 g，切段，加6倍量水加熱回流提取3次、每次1 h，分別過濾并收集濾液。合并3次濾液，以4 000 r/min離心15 min，收集上清液并減壓濃縮至原體積的1/4，然后加95%乙醇至乙醇的終體積分數(shù)為80%，在4 ℃下醇沉12 h，然后以4 000 r/min離心15 min。收集沉淀，分別用無水乙醇、丙酮、乙醚各洗3次，然后在40 ℃真空干燥至恒定質(zhì)量，即得到黨參多糖（得率為18.39%）。

2.2 分組、造模與給藥

將60只小鼠按隨機數(shù)字表分為空白組，模型組，黨參多糖高、中、低劑量組和四君子湯對照組，每組10只。除空白組外，其余各組小鼠均按0.4 g/d灌胃番瀉葉溶液，每天1次，連續(xù)5周，以復制小鼠苦寒瀉下脾虛模型[11];空白組小鼠灌胃等體積生理鹽水。造模完成后，黨參多糖高、中、低劑量組小鼠分別按1.6、0.8、0.4 g/（kg·d）灌胃黨參多糖（給藥體積為20 mL/kg，以水為溶劑），給藥劑量參考黨參日用劑量（30 g）并按人與動物體表面積換算劑量公式折算[1]，分別為臨床成人等效劑量的2、1、0.5倍;四君子湯組小鼠按30 g/（kg·d）（以生藥總量計）灌胃四君子湯[12]，為成人臨床等效劑量;空白組和模型組小鼠灌胃等體積生理鹽水。每天下午給藥1次，連續(xù)給藥6周。在給藥期間，除空白組外，其余各組小鼠每天上午均繼續(xù)按0.4 g/d維持灌胃番瀉葉溶液，每天1次。

2.3 小鼠體質(zhì)量測定與行為學觀察

實驗期間，每3天以及在給藥結束后稱定小鼠體質(zhì)量，并每天觀察其一般體征。參考《中藥新藥臨床研究指導原則》的脾虛標準，制訂本研究中脾虛動物模型的標準為：（1）大便溏稀;（2）體質(zhì)量減輕或增長緩慢;（3）蜷縮聚堆;（4）神態(tài)萎靡，毛色枯槁;（5）弓背;（6）易疲勞。其中，前3項為主癥，后3項為次癥，具備2項主癥或者1項主癥兼2項次癥者，即可認定脾虛模型構建成功[13]。

2.4 小鼠血清中D-木糖含量測定

末次給藥12 h后，各組小鼠均灌胃6%D-木糖溶液10 mL/kg;1 h后，摘眼球取血1.5 mL，迅速吸取全血10 μL用于紅細胞計數(shù)。剩余血樣于室溫靜置90 min后，以3 000 r/min離心10 min，分離上層血清。取部分血清，按照D-木糖試劑盒說明書要求，采用間苯三酚顯色法于紫外-可見分光光度計下測定小鼠血清中D-木糖含量。

2.5 小鼠全血中紅細胞計數(shù)測定

取“2.4”項下全血10 μL，以生理鹽水稀釋10 000倍至100 mL，取1或2滴稀釋血樣置于載有干燥蓋玻片的紅細胞計數(shù)板的一端，于倒置熒光顯微鏡下采用細胞計數(shù)器進行小鼠全血紅細胞計數(shù)。

2.6 小鼠血清中生物學指標含量測定

取“2.4”項下血清適量，按照試劑盒說明書方法操作，采用ELISA法以酶標儀測定各組小鼠血清中胃腸激素（GAS、MTL、SS、VIP）、AMS、IgG、IgM、LPS含量。

2.7 小鼠結腸組織中Claudin、Occludin mRNA表達測定

采用qRT-PCR法進行檢測。取血后將小鼠處死，取其結腸，液氮速凍后，按照Trizol法提取結腸組織總RNA，檢驗其純度后，反轉錄合成cDNA，并以cDNA為模板進行PCR擴增。反應體系（共20 μL）包括cDNA 模板2 μL，上、下游引物各0.8 μL，TB Green Premix Ex Taq Ⅱ10 μL，滅菌水6.4 μL。采用兩步法進行擴增反應，擴增條件為95 ℃預變性30 s;95 ℃變性5 s，60 ℃延伸31 s，共40個循環(huán)。以GAPDH為內(nèi)參基因，采用2-ΔΔCt法計算各目的基因mRNA的相對表達量（以空白對照組的值為1）。引物序列及擴增產(chǎn)物長度見表1[引物序列由本課題組采用Primer premier 5.0軟件自行設計，由生工生物工程（上海）股份有限公司合成]。

2.8 小鼠結腸組織中Claudin、Occludin蛋白表達測定

采用Western blot法進行檢測。取小鼠結腸組織適量，加入含有蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑的蛋白提取液，用高速組織研磨儀勻漿，然后在4 ℃下以12 850 r/min離心5 min，取上清液，按照BCA蛋白定量試劑盒方法測定總蛋白含量。將總蛋白于100 ℃加熱變性10 min后，取變性蛋白樣品30 μg進行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（濃縮膠層80 V恒壓、分離膠層120 V恒壓），然后以0.3 A恒流轉移至PVDF膜上。用5%脫脂牛奶室溫封閉1 h，分別加入Claudin、Occludin、β-actin抗體（稀釋度分別為1 ∶ 8 000、1 ∶ 6 000、1 ∶ 2 000），于4 ℃孵育過夜;TBST溶液清洗5 min×3次，加入辣根過氧化物酶標記的IgG二抗（稀釋度為1 ∶ 20 000），室溫下孵育1 h;TBST溶液清洗5 min×3次，經(jīng)超敏ECL化學發(fā)光液顯色后，于凝膠成像儀上成像。使用Image Lab 1.6.0軟件分析條帶灰度值，以目標蛋白與內(nèi)參蛋白（β-actin）條帶的灰度值比值作為目標蛋白的表達水平。

2.9 統(tǒng)計學方法

利用SPSS 23.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料以x±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

3 結果

3.1 黨參多糖對脾虛模型小鼠體質(zhì)量和行為學的影響

實驗期間，空白組小鼠活動正常，背毛光澤，反應靈敏，糞便正常。模型組小鼠自灌胃番瀉葉溶液進行造模后，其糞便就時軟時溏;后期出現(xiàn)了體質(zhì)量增長緩慢、扎堆、懶動現(xiàn)象，且出現(xiàn)了肛周污穢和背毛稀疏、無光澤等脾虛癥狀，提示脾虛小鼠模型造模成功。給藥6周后，各給藥組小鼠的活動及背毛情況均恢復正常。與空白組比較，模型組小鼠體質(zhì)量顯著降低（P<0.05）;與模型組比較，黨參多糖高劑量組小鼠體質(zhì)量顯著升高（P<0.05）。給藥6周后各組小鼠體質(zhì)量測定結果見表2。

3.2 黨參多糖對脾虛模型小鼠血清中D-木糖含量的影響

與空白組比較，模型組小鼠血清中D-木糖含量顯著降低（P<0.05）。與模型組比較，黨參多糖高、中劑量組和四君子湯組小鼠血清中D-木糖含量均顯著升高（P<0.05）。各組小鼠血清中D-木糖含量測定結果見表2。

3.3 黨參多糖對脾虛模型小鼠全血中紅細胞計數(shù)的影響

空白組，模型組，黨參多糖高、中、低劑量組和四君子湯組小鼠全血中紅細胞計數(shù)分別為（9.24±0.91）×1012、（6.61±0.33）×1012、（9.98±0.12）×1012、（6.06±0.31）×1012、（5.02±3.35）×1012、（9.44±0.18）×1012 L-1（x±s，n=10）。與空白組比較，模型組小鼠全血中紅細胞計數(shù)顯著降低（P<0.05）。與模型組比較，黨參多糖高劑量組和四君子湯組小鼠全血中紅細胞計數(shù)均顯著升高（P<0.05）。

3.4 黨參多糖對脾虛模型小鼠血清生物學指標的影響

與空白組比較，模型組小鼠血清中GAS、MTL、LPS含量均顯著升高（P<0.01），SS、VIP、AMS、IgG、IgM含量均顯著降低（P<0.01）。與模型組比較，除黨參多糖低劑量組小鼠血清中IgM含量升高不顯著外（P>0.05），其余各組小鼠上述血清學指標均顯著改善（P<0.05或P<0.01）。各組小鼠血清生物學指標含量測定結果見表3。

3.5 黨參多糖對脾虛模型小鼠結腸組織中Claudin、Occludin mRNA表達的影響

與空白組比較，模型組小鼠結腸組織中Claudin、Occludin mRNA的表達水平均顯著降低（P<0.01）。與模型組比較，黨參多糖高、中劑量組和四君子湯組小鼠結腸組織中Claudin、Occludin mRNA的表達水平均顯著升高（P<0.05或P<0.01）。各組小鼠結腸組織中Claudin、Occludin mRNA的表達水平測定結果見表4。

3.6 黨參多糖對脾虛模型小鼠結腸組織中Claudin、Occludin蛋白表達的影響

與空白組比較，模型組小鼠結腸組織中Occludin、Claudin 蛋白的表達水平均顯著降低（P<0.05或P<0.01）。與模型組比較，黨參多糖高、中劑量組和四君子湯組小鼠結腸組織中Claudin、Occludin 蛋白的表達水平均顯著升高（P<0.05或P<0.01）。各組小鼠結腸組織中Claudin、Occludin蛋白表達的電泳圖見圖1，表達水平測定結果見表5。

4 討論

四君子湯出自《太平惠民和劑局方》，是健脾的代表方劑，臨床常用于治療消化系統(tǒng)疾病，主治脾虛證[14]。現(xiàn)代研究表明，四君子湯可明顯改善脾虛動物的D-木糖含量，提高其消化吸收功能，具有健脾作用[15]。因此，本研究在利用番瀉葉復制脾虛小鼠模型的基礎上，采用健脾代表方四君子湯為陽性對照，對評價黨參多糖的補脾作用并挖掘其作用機制具有重要意義。

本研究發(fā)現(xiàn)，黨參多糖干預后可增加脾虛模型小鼠的體質(zhì)量，改善了其扎堆懶動、毛發(fā)不光澤等癥狀，提示其可改善番瀉葉所致的小鼠脾虛癥狀。血清中D-木糖含量可反映小腸吸收功能[16]。AMS是一種重要的消化酶，是反映消化、吸收功能的公認指標之一[17]。在本研究中，模型組小鼠血清中D-木糖、AMS含量和全血紅細胞計數(shù)均顯著降低，表明模型組小鼠胃腸道吸收功能下降及氣血生化不足。經(jīng)黨參多糖干預后，脾虛模型小鼠血清中D-木糖、AMS含量和全血紅細胞計數(shù)均顯著升高，提示黨參多糖可以改善脾虛模型小鼠的胃腸道吸收功能及氣血生化能力。

胃腸道功能的改變受機體內(nèi)胃腸激素分泌的影響[18]。GAS能促進胃酸、胃蛋白酶的分泌，刺激胃腸道的蠕動，增加黏膜血流量，營養(yǎng)胃腸道黏膜[19]。MTL可激活胃腸道平滑肌，能促進消化道運動，加速胃排空，并刺激胃蛋白酶和胰液分泌[20]。SS能抑制胃酸的分泌和胃的蠕動，可舒張血管平滑肌[21]。VIP可抑制多種胃腸激素的分泌[22]。研究表明，脾虛模型小鼠胃腸道吸收功能的下調(diào)與胃腸激素的紊亂有關[23]。在本研究中，模型組小鼠血清中GAS、MTL含量異常升高，SS、VIP含量均異常降低，表明模型組小鼠胃腸激素水平失調(diào)。而與模型組相比，黨參多糖高、中、低劑量組小鼠血清中GAS、MTL含量顯著降低，VIP、SS含量顯著升高，表明黨參多糖可明顯改善脾虛模型組小鼠胃腸激素的失調(diào)狀態(tài)。以上結果提示，黨參多糖能改善脾虛模型小鼠的胃腸吸收功能，其作用機制可能與調(diào)節(jié)胃腸激素水平有關。

免疫球蛋白作為免疫活性物質(zhì)，是“衛(wèi)氣”功能活動的重要物質(zhì)之一[24]。IgG在血清中含量最高，IgM則是抗原刺激誘導體液免疫應答中最先產(chǎn)生的免疫球蛋白，二者是體液免疫應答中的關鍵因子，可作為評價機體免疫力的指標[25]。在本研究中，與空白組比較，模型組小鼠血清中IgG、IgM含量均異常降低，表明模型組小鼠“衛(wèi)氣”功能下降。而給予不同劑量黨參多糖干預后，脾虛模型小鼠血清中IgG、IgM含量均不同程度升高。以上結果提示，黨參多糖可通過調(diào)節(jié)脾虛模型小鼠血清中IgG、IgM含量而提高機體免疫力，進而發(fā)揮健脾作用。

腸上皮是機體免疫系統(tǒng)與外界的主要屏障，脾虛則會影響腸道通透性以及腸黏膜屏障完整性[26]。緊密連接蛋白是腸黏膜屏障的重要組成部分，而Claudin、Occludin蛋白是緊密連接蛋白的基本組成單位[27-28]。本研究結果顯示，脾虛模型小鼠結腸組織中Claudin、Occludin mRNA及其蛋白的表達均顯著下調(diào)，這與李晶等[29]的研究結果一致，提示其腸道屏障功能受損。而給予黨參多糖干預后，脾虛模型小鼠結腸組織中Claudin、Occludin mRNA及其蛋白的表達均不同程度上調(diào)。當腸黏膜屏障受損后，微生物、LPS等有毒物質(zhì)會大量入血，血清中LPS含量會異常升高[30]。本研究結果顯示，脾虛模型小鼠血清中LPS含量異常升高;而給予黨參多糖后，可顯著降低脾虛模型小鼠血清中LPS含量。以上結果顯示，脾虛模型小鼠存在腸黏膜屏障受損和血清中LPS含量異常升高的現(xiàn)象，而黨參多糖可恢復腸黏膜緊密連接并顯著降低血清中LPS含量，有效改善了小鼠的腸黏膜屏障損傷，這可能是黨參多糖在脾虛模型小鼠腸道發(fā)揮“脾為之衛(wèi)”健脾作用的機制之一。

綜上所述，本研究結果揭示黨參多糖是黨參補脾作用的重要物質(zhì)基礎之一，可改善脾虛模型小鼠的胃腸吸收功能，作用機制可能與調(diào)節(jié)其胃腸激素分泌、增強免疫以及保護腸黏膜屏障有關。此外，在本研究中筆者發(fā)現(xiàn)，黨參多糖發(fā)揮補脾作用與腸道屏障功能有密切的聯(lián)系。而腸道微生物的多樣性與豐度會影響宿主腸道屏障功能且腸道菌群失調(diào)可誘發(fā)多種消化系統(tǒng)疾病[31]。因此，在下一步研究中，本課題組將從代謝組學和腸道菌群的角度出發(fā)對黨參多糖補脾功能進行評價，以期深入探索其補脾的作用機制。

參考文獻

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（收稿日期：2021-01-01 修回日期：2021-03-08）

（編輯：林 靜）