李東嫻 張曉南 普冰清 王鵬 徐怡 游燕

摘 要 目的：對注射用舒尼鉑（凍干）的無菌檢查方法進行適用性研究。方法：按《中國藥典》2015年版通則1101進行試驗，采用薄膜過濾法對注射用舒尼鉑（凍干）進行無菌檢查。結(jié)果：注射用舒尼鉑（凍干）經(jīng)pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液100 ml/膜沖洗后，試驗組均生長良好，與陽性對照組一致。結(jié)論：薄膜過濾法可用于注射用舒尼鉑（凍干）的無菌檢查。

關(guān)鍵詞 注射用舒尼鉑（凍干） 無菌檢查 方法適用性

中圖分類號：R979.19； R927.1 文獻標志碼：A 文章編號：1006-1533（2021）07-0076-02

Validation on sterility test method for suniplatin injection

LI Dongxian*， ZHANG Xiaonan， PU Bingqing， WANG Peng， XU Yi， YOU Yan（Yunnan Bai Yao Group Innovation and R&D Center/Yunnan Institute of Materia Medica/ Yunnan Provincial Enterprise Key Laboratory for the New Drug Creation of Traditional Chinese Medicine and Ethnic Drug， Kunming 650111， China）

ABSTRACT Objective： To analyze the applicability of sterility test method for suniplatin injection. Methods： According to the Chinese Pharmacopeia （2015 edition） General rule 1101， the sterility test for suniplatin injection was conducted by membrane filtration. Results： The microbes in the test group grew well after suniplatin injection （lyophilized） was washed with pH 7.0 sterile sodium chloride-peptone buffer at 100 ml/membrane， which was consistent with the results of positive control group. Conclusion： This method can be used for the sterility test for suniplatin injection.

KEy WORDS suniplatin injection； sterility test； validation

鉑類抗癌藥物屬于一類結(jié)構(gòu)獨特的無機配合物，目前已批準上市的鉑類抗癌藥物有順鉑[1]、卡鉑等7個品種[2-3]，是目前治療常見惡性腫瘤的藥物，在臨床上得到廣泛使用，對改善癌癥患者的生活質(zhì)量、延長壽命起到重要的作用。但不良反應(yīng)和耐藥性一直是鉑類抗癌藥物亟需解決的問題。因此，開發(fā)新型鉑類化合物是目前抗癌藥領(lǐng)域的研究方向之一[4]。

舒尼鉑是由對卡鉑（carboplatin）和舒鉑（heptaplatin）的化學(xué)結(jié)構(gòu)進行組合修飾而得。注射用舒尼鉑（凍干）為云南省藥物研究所以舒尼鉑為原料的自研凍干注射用藥，為控制產(chǎn)品質(zhì)量，需對注射用舒尼鉑（凍干）進行無菌檢查的方法學(xué)研究。而中國藥典規(guī)定，只要供試品性狀允許，可采用薄膜過濾法進行無菌檢查[5]。據(jù)此，擬采用薄膜過濾法對注射用舒尼鉑（凍干）的無菌檢查進行方法學(xué)研究。

1 材料與方法

1.1 樣品

舒尼鉑（云南省藥物研究所生產(chǎn)；共3批：170412，

170711，170727）。

1.2 稀釋劑及培養(yǎng)基

pH 7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液、胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基、沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基，均由北京三藥科技開發(fā)公司提供。

1.3 菌種

金黃色葡萄球菌[CMCC（B）26003 第Ⅲ代]、枯草芽孢桿菌[CMCC（B）63501 第Ⅲ代]、銅綠假單胞菌[CMCC（B）10104 第Ⅲ代]和白色假絲酵母[CMCC（F）98001 第Ⅲ代]、生孢梭菌[CMCC（F）64941第Ⅲ代]均由云南省食品藥品檢驗所提供；黑曲霉[CMCC（B）98003 第Ⅱ代]，由中國藥品生物制品檢定研究院提供。

1.4 方法

參照中國藥典無菌檢查法進行試驗[5]。

1.4.1 菌液制備

將金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞菌的新鮮培養(yǎng)物接種至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基，生孢梭菌的新鮮培養(yǎng)物接種至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，30～35 ℃培養(yǎng)18～24 h；白色假絲酵母的新鮮培養(yǎng)物接種至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基，20～25 ℃培養(yǎng)2～3 d；黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物接種至沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，20～25 ℃培養(yǎng)5～7 d。取金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌、枯草芽孢桿菌、白色假絲酵母的新鮮培養(yǎng)物，用0.9%無菌氯化鈉溶液制成適宜濃度的菌懸液備用；取黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物，加入3～5 ml含體積分數(shù)0.05%聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫后用含體積分數(shù)0.05%聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液制成孢子懸液并稀釋成適宜濃度備用。

1.4.2 方法摸索與優(yōu)化

用170412批次的樣品，進行無菌檢查方法探索。

1）供試品處理 各批次表面滅菌后的樣品，去除鋁蓋，用碘伏棉球擦拭膠塞后，通過一次性全封閉薄膜過濾器注入葡萄糖注射液10～15 ml，振搖使凍干粉全部溶解后將所有液體通過濾筒。

2）試驗組 取樣品40瓶，按供試品處理方法處理后，通過一次性全封閉薄膜過濾器（二聯(lián)），20瓶/膜，共做12份。其中6份用100 ml pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗，另外6份用300 ml pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗。沖洗結(jié)束后，分別加入硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基，并加入金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌、枯草芽孢桿菌、白色假絲酵母菌液或黑曲霉孢子懸液。放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3）供試品對照組 以沖洗液代替菌液，同試驗組操作。

4）菌液對照組 以沖洗液代替供試液，同試驗組操作。

5）陰性對照組 以沖洗液代替供試液和菌液，同試驗組操作。

1.4.3 方法驗證

1）試驗組 取供試品40瓶，按供試品處理方法處理后，將40瓶供試品全部通過一次性全封閉薄膜過濾器（二聯(lián)），20瓶/膜。再用pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液200 ml沖洗濾膜，每膜100 ml，向一只濾筒中加入100 ml硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，向另一只濾筒中加入100 ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基，取塑料夾片，在內(nèi)含硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基濾杯的進液口處導(dǎo)管上端約5～6 cm位置將其夾住，取一無菌剪刀，于夾片的上端約3 cm處將導(dǎo)管剪斷，并將尾端插入濾杯上端的呼吸器端口。如此分別重復(fù)3次，獲得含胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基和硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的濾筒各3份。拔出插在呼吸器上端的軟管，通過呼吸器注入1 ml含菌量不大于100 cfu的菌液于杯體，重新封閉杯體并置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)，用注射器穿刺濾管另一側(cè)。加入硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的3份濾筒分別加入金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌的菌液；加入胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基的3份濾筒分別加入枯草芽孢桿菌、白色假絲酵母菌液或黑曲霉孢子懸液。加入硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的濾筒放入30～35 ℃的恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)不超過5 d，加入胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基的濾筒放入20～25 ℃培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)不超過5 d。其余兩批樣品均用同法操作。

2）供試品處理、供試品對照組、菌液對照組、陰性對照組 分別同“1.4.2”1）、3）、4）、5）。

2 結(jié)果

2.1 方法優(yōu)化

2.2 方法適用性驗證

對3批注射用舒尼鉑（凍干）進行無菌檢查方法適用性驗證的結(jié)果顯示，3個批次試驗組各容器中各菌種的生長狀況與菌液對照組一致，陰性對照組和供試品對照組各培養(yǎng)物均澄清，無微生物生長。表明注射用舒尼鉑（凍干）的檢驗量在該檢驗條件下無抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不計。

3 討論

本試驗使用薄膜過濾法對注射用舒尼鉑（凍干）進行無菌檢查，結(jié)果表明，舒尼鉑對6種試驗菌株均無明顯抑制作用，這與其他鉑類抗癌藥無菌檢查方法學(xué)研究的結(jié)果相符[6]。雖然有報道顯示，順鉑等鉑類藥物對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌等有一定的體外抑菌活性[7]，但相關(guān)文獻與本試驗均表明這些抑菌活性并不影響使用薄膜過濾法對藥品進行無菌檢查。因此，可以采用薄膜過濾法作為舒尼鉑的無菌檢查方法。

參考文獻

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