喬錦莉，張 妍,3，劉 佩，郭良川，霍俊偉,3,

（1.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝園林學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150030；2.寒地小漿果開(kāi)發(fā)利用國(guó)家地方聯(lián)合工程研究中心，黑龍江 哈爾濱 150030；3.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部東北地區(qū)園藝作物生物學(xué)與種質(zhì)創(chuàng)制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江 哈爾濱 150030）

藍(lán)果忍冬（Lonicera caeruleaL.）是屬于忍冬科（Caprifoliaceae）忍冬屬的落葉灌木[1-2]，起源于亞洲東北部和中亞山區(qū)，在中國(guó)主要分布在東北、華北和西北地區(qū)[3]，其野生資源主要分布于大興安嶺、小興安嶺以及長(zhǎng)白山等地[4]，小興安嶺地區(qū)分布的藍(lán)果忍冬野生資源遠(yuǎn)離工業(yè)區(qū)，植物生長(zhǎng)過(guò)程中受到污染的可能性更小，植物資源更加原生態(tài)，更為符合人們對(duì)健康食品的追求，具有很高的食用、經(jīng)濟(jì)和研究?jī)r(jià)值[5]。

多酚是植物中重要的次生代謝物質(zhì)和天然的強(qiáng)還原性物質(zhì)，具有抗氧化、抗心血管疾病、抗糖尿病等生物活性[6]。藍(lán)果忍冬果實(shí)中含有豐富的多酚類(lèi)物質(zhì)，已被發(fā)現(xiàn)在抗氧化和抗糖尿病等方面具有生物活性。在抗氧化方面，Rop等[7]對(duì)不同的藍(lán)果忍冬栽培品種進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，測(cè)定其抗氧化活性，篩選出抗氧化活性較高的藍(lán)果忍冬栽培品種。藍(lán)果忍冬所含的多酚物質(zhì)能夠抑制或者減緩自由基的生成，阻止氧化反應(yīng)的發(fā)生，使自由基能夠維持相對(duì)平衡的狀態(tài)，保護(hù)機(jī)體免受損傷；在抗糖尿病方面，多酚通過(guò)控制淀粉由α-淀粉酶水解為麥芽糊精和麥芽糖、由α-葡萄糖苷酶水解為葡萄糖的速率，即抑制α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的活性[8]，可以有效地調(diào)控糖尿病人餐后血糖水平（主要針對(duì)II型糖尿?。9]。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)藍(lán)果忍冬所含的生物活性物質(zhì)可以降低血糖、減少肝臟損傷[10]。藍(lán)果忍冬野生資源豐富，了解藍(lán)果忍冬野生資源的生物活性成分，分析其抗氧化與抗糖尿病方面的生物活性，有利于填補(bǔ)這方面研究的空白，并為培育高藥食功效的藍(lán)果忍冬提供參考和理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

藍(lán)果忍冬果實(shí)產(chǎn)自小興安嶺地區(qū)，隨機(jī)選取3 株藍(lán)果忍冬植株上完全成熟的果實(shí)，于－20 ℃冰箱中保存，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

甲醇、鹽酸、乙酸乙酯、乙腈、甲酸、醋酸銨（均為色譜級(jí)） 加拿大Simark公司；氯化鉀、乙酸鈉 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）、2,2'-聯(lián)氨-雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)（2,2'-azinobis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)，ABTS）、熒光素、2,2'-偶氮二(2-甲基丙脒)二鹽酸鹽、水溶性VE（Trolox）、六水合氯化鐵（FeCl3·6H2O）、七水合硫酸亞鐵（FeSO4·7H2O）、2,4,6-三(2-吡啶基)三嗪、沒(méi)食子酸（gallic acid，GA）（純度≥98%）、福林-酚試劑北京博奧拓達(dá)科技有限公司；α-淀粉酶（10 U/mg）、α-葡萄糖苷酶（10 U/mg）、脂肪酶（30 U/mg）、玉米淀粉、阿卡波糖 美國(guó)Sigma公司；矢車(chē)菊素-3-葡萄糖苷（cyanidin-3-glucoside，C3G）（純度≥99%） 上海安普實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

EPOCH 2型酶標(biāo)儀 美國(guó)Bio-Teck公司；ExionLC型液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀 美國(guó)AB SCIEX公司；Luna C18分析色譜柱 美國(guó)Phenomenex公司；C18Sep-Pak固相萃取柱 美國(guó)Waters公司；LC-20 AD型高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）儀 日本島津公司；H1750R型凍干機(jī) 北京亞太科隆公司；TGL-16型離心機(jī) 湖南湘儀動(dòng)力測(cè)試儀器有限公司；HZQ-211C型搖床 上海一恒科學(xué)儀器有限公司；AMP-12型固相萃取儀 上海安普實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司。

1.3 方法

1.3.1 野生藍(lán)果忍冬多酚的提取和分離純化

將采集的藍(lán)果忍冬果實(shí)真空冷凍干燥后研磨成粉末，過(guò)60 目篩后在－20 ℃冰箱中保存。取15 g果實(shí)粉末加入100 mL體積分?jǐn)?shù)80%甲醇溶液，室溫條件下?lián)u床振蕩24 h（200 r/min），4 ℃條件下5 000 r/min離心10 min，所得上清液為多酚粗提液。

藍(lán)果忍冬多酚粗提液通過(guò)固相萃取技術(shù)分離純化，參照Kim等[11]的方法將多酚粗提液分離為多糖、非花色苷多酚和花色苷多酚3 個(gè)組分。依次加入甲醇溶液（10 mL）和HCl溶液（15 mL 0.01 mol/L）平衡固相萃取柱之后，依次加入15 mL 0.01 mol/L的HCl溶液獲得多糖，40 mL純乙酸乙酯獲得非花色苷多酚，60 mL酸性甲醇溶液（體積分?jǐn)?shù)0.1%HCl的甲醇溶液）得到花色苷多酚。收集洗脫液，35 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，將濃縮液過(guò)有機(jī)膜（0.22 μm），于－20 ℃冰箱中保存?zhèn)溆?。?0 μL濃縮液于EP管中，40 ℃烘干12 h，按公式（1）分別計(jì)算濃縮液中3 個(gè)組分的質(zhì)量濃度/（mg/mL）。

式中：m為EP管與烘干后的樣品質(zhì)量/mg；m’為EP管的質(zhì)量/mg；V為加入的樣品體積（10 μL）。

1.3.2 野生藍(lán)果忍冬總酚含量測(cè)定

總酚含量測(cè)定參照Waterhouse[12]的方法，利用酶標(biāo)儀在765 nm波長(zhǎng)處測(cè)定多酚粗提液的吸光度，以沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液在765 nm波長(zhǎng)處的吸光度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y＝5.381 5x+0.000 3，R2＝0.992 7，y表示多酚粗提液的吸光度，x表示總酚含量/（mg/100 g），總酚含量以每100 g干質(zhì)量樣品所含沒(méi)食子酸的質(zhì)量表示，單位mg/100 g。

1.3.3 野生藍(lán)果忍冬多酚成分鑒定

將1.3.1節(jié)獲得的藍(lán)果忍冬多酚粗提液稀釋為質(zhì)量濃度1 mg/mL的溶液，過(guò)0.22 μm有機(jī)膜，去除雜質(zhì)。利用HPLC-三重四極桿-離子阱串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)多酚成分進(jìn)行鑒定[13]，對(duì)于花色苷多酚和非花色苷多酚檢測(cè)，HPLC儀檢測(cè)器均為二極管陣列檢測(cè)器，色譜柱均為L(zhǎng)una C18柱（250 mm×46 mm，5 μm）。

花色苷多酚檢測(cè)HPLC條件：二元流動(dòng)相：A相為5%（體積分?jǐn)?shù)，下同）乙腈-1%甲酸，B相為乙腈；梯度洗脫程序：0～20 min，100% A；20～25 min，80% A；25～20 min，60% A；30～35 min，100% B。流速0.6 mL/min、柱溫25 ℃、檢測(cè)波長(zhǎng)520 nm、進(jìn)樣量10 μL。

非花色苷多酚檢測(cè)HPLC條件：三元流動(dòng)相：A相為5 mmol/L醋酸銨溶液，B相為20% A（溶劑為純乙腈），C相為60 mmol/L甲酸溶液；梯度洗脫程序：0～12.5 min，14% B和86% C；12.5～17.5 min，16.5% B和83.5% C；17.5～40 min，25% B和75% C；40～60 min，100% A。流速0.6 mL/min、柱溫25 ℃、檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm、進(jìn)樣量10 μL。

花色苷和非花色苷多酚檢測(cè)的質(zhì)譜條件：電噴霧離子源；花色苷多酚采用正離子模式檢測(cè)，非花色苷多酚采用負(fù)離子模式檢測(cè)；全離子掃描，掃描范圍100～1 000m/z；毛細(xì)管電壓4 500 V；碰撞氣體N2；干燥氣體溫度550 ℃；流速0.6 mL/min；霧化氣壓3.0 Bar。

1.3.4 野生藍(lán)果忍冬總花色苷含量測(cè)定

藍(lán)果忍冬果實(shí)總花色苷含量測(cè)定參照Petrova等[14]的方法，將花色苷多酚濃縮液與氯化鉀緩沖液（pH 1.0）、乙酸鈉緩沖液（pH 4.5）混合，利用酶標(biāo)儀分別在520 nm和700 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以每100 g樣品所含C3G質(zhì)量表示總花色苷含量。按照公式（2）、（3）分別計(jì)算藍(lán)果忍冬總花色苷吸光度、總花色苷含量。

式中：Mω為C3G的摩爾質(zhì)量（449.2 g/mol）；DF為稀釋倍數(shù)；V為提取液總體積/mL；ε為摩爾吸光系數(shù)（26 900 L/（mol·cm））；m為樣品質(zhì)量/g；L為光程（1 cm）。

1.3.5 抗氧化活性測(cè)定

DPPH自由基清除率的測(cè)定參照Brand-Williams等[15]的方法并適當(dāng)修改，DPPH溶液與樣品混合處理后，利用酶標(biāo)儀在517 nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度，以不加樣品的體積分?jǐn)?shù)80%甲醇溶液為對(duì)照。按照公式（4）計(jì)算DPPH自由基清除率，并以DPPH自由基清除率為縱坐標(biāo)，以Trolox的濃度（100～800 μmol/L）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：y＝0.160 8x－10.928 0，R2＝0.996 9。

式中：A1為樣品吸光度；A0為對(duì)照吸光度。

ABTS陽(yáng)離子自由基清除率的測(cè)定參照Fellegrini等[16]的方法并適當(dāng)修改，將ABTS工作液與樣品混合后在734 nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度，以不加樣品的體積分?jǐn)?shù)80%甲醇溶液為對(duì)照。按照公式（5）計(jì)算ABTS陽(yáng)離子自由基清除率，并以ABTS陽(yáng)離子自由基清除率為縱坐標(biāo)，以Trolox的濃度（50～500 μmol/L）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：y＝0.718 0x+0.667 6，R2＝0.999 4。

式中：A1為樣品吸光度；A0為對(duì)照吸光度。

鐵離子還原能力（ferric reducing antioxidant power，F(xiàn)RAP）的測(cè)定參照Benzie等[17]的方法，將樣品與FRAP工作液混合后，在30 min時(shí)于593 nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度，以不加樣品的體積分?jǐn)?shù)80%甲醇溶液為對(duì)照。按照公式（6）計(jì)算FRAP，并以FRAP為縱坐標(biāo)，以FeSO4·7H2O的濃度（100～1 000 μmol/L）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：y＝0.000 3x+0.018 6，R2＝0.992 2。

式中：A1為樣品吸光度；A0為對(duì)照吸光度。

氧自由基吸收能力（oxygen radical absorbance capacity，ORAC）的測(cè)定參照Huang Dejian等[18]的方法、在激發(fā)波長(zhǎng)465～505 nm、發(fā)射波長(zhǎng)505～555 nm、溫度37 ℃、時(shí)間2 h條件下測(cè)定其熒光值。按照公式（7）計(jì)算熒光衰退曲線下面積（area under curve，AUC），按照公式（8）計(jì)算ORAC，并以O(shè)RAC為縱坐標(biāo)，以Trolox的濃度（10～200 μmol/L）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：y＝0.024 9x+24.717 0，R2＝0.994 6。

式中：f1、f2…fn為兩小時(shí)內(nèi)第n分鐘時(shí)的熒光值；AUC0為空白熒光衰退曲線下面積；AUC1為樣品熒光衰退曲線下面積；AUC2為T(mén)rolox熒光衰退曲線下面積；ρ0為樣品的質(zhì)量濃度/（g/L）；c1為T(mén)rolox的濃度/（μmol/L）。

1.3.6 抗淀粉酶、抗脂肪酶活性測(cè)定

參照Z(yǔ)hang Yan等[19]的方法測(cè)定藍(lán)果忍冬果實(shí)多酚粗提液（濃縮后粗提物在粗提液中的質(zhì)量濃度為8.13 mg/mL，后續(xù)實(shí)驗(yàn)需對(duì)其進(jìn)行稀釋?zhuān)?duì)淀粉酶（α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶）的抑制活性，以阿卡波糖為對(duì)照（不添加多酚粗提液），在660 nm波長(zhǎng)處測(cè)定樣品的吸光度，每2 min讀取一次，持續(xù)2 h，獲得多酚粗提液對(duì)α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制活性的動(dòng)力學(xué)曲線，抑制活性結(jié)果以半抑制質(zhì)量濃度（half-inhibitory concentration，IC50）表示。按照公式（9）計(jì)算AUC，按照公式（10）計(jì)算抑制率，并以抑制率為縱坐標(biāo)，樣品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)繪制曲線，計(jì)算IC50值。

式中：f1、f2…fn為測(cè)定的各時(shí)間點(diǎn)的吸光度；AUC1為樣品的抑制曲線下面積；AUC0為對(duì)照的抑制曲線下面積。

對(duì)脂肪酶的抑制活性測(cè)定：參照Z(yǔ)hang Yan等[20]的方法，在410 nm波長(zhǎng)處測(cè)定樣品的吸光度，每1 min讀取一次，持續(xù)1 h，獲得多酚粗提液對(duì)脂肪酶的抑制活性的動(dòng)力學(xué)曲線，計(jì)算同公式（9）、（10）。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

通過(guò)Peak View 2.0軟件對(duì)高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行鑒定分析，利用SPSS 20.0軟件以及Microsoft Excel軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)計(jì)算和分析，Origin 2019軟件作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 野生藍(lán)果忍冬果實(shí)中多酚成分

野生藍(lán)果忍冬果實(shí)中花色苷HPLC圖如圖1所示，藍(lán)果忍冬果實(shí)提取物中花色苷種類(lèi)豐富，共檢測(cè)到8 種。根據(jù)圖2的花色苷一級(jí)和二級(jí)質(zhì)譜圖、表1的保留時(shí)間和質(zhì)譜數(shù)據(jù)并結(jié)合前人的研究結(jié)果分析，這些化合物為矢車(chē)菊素、天竺葵素、芍藥素和飛燕草素4 種花色素苷元，相連的糖殘基主要包括葡萄糖苷和蕓香糖苷2 種。根據(jù)文獻(xiàn)[21-23]和出峰順序進(jìn)行推斷，藍(lán)果忍冬A1、A2、A3號(hào)峰具有相同的二級(jí)碎片離子（287m/z），即矢車(chē)菊素花色苷的特征離子，A1號(hào)峰碎片離子為m/z287、449，失去兩分子葡萄糖苷（162m/z），因此推斷A1號(hào)峰為矢車(chē)菊素-3,5-二葡萄糖苷。A2號(hào)峰分子離子為m/z595，碎片離子m/z287是分子離子失去一分子蕓香糖苷（308m/z）所得，因此A2號(hào)峰為矢車(chē)菊素-3-蕓香糖苷。同理，A3號(hào)峰碎片離子為失去一分子葡萄糖苷所得，A3號(hào)峰為C3G。根據(jù)文獻(xiàn)[21]進(jìn)行推斷，m/z271是天竺葵素花色苷的特征離子，鑒定A4號(hào)峰為天竺葵素-3-葡萄糖苷。根據(jù)峰圖和文獻(xiàn)[21-23]進(jìn)行推測(cè)，A5和A6號(hào)峰的碎片離子為m/z301，A5號(hào)峰為失去一分子蕓香糖苷，A6號(hào)峰為失去一分子葡萄糖苷，因此A5號(hào)峰為芍藥素-3-蕓香糖苷，A6號(hào)峰為芍藥素-3-葡萄糖苷。A7號(hào)峰分子離子為m/z466，碎片離子為m/z303是飛燕草色素花色苷的特征離子，推斷A7號(hào)峰為飛燕草素-3-葡萄糖苷，A8與A7號(hào)峰特征離子相同，是m/z611失去一分子蕓香糖苷所得，推斷A8號(hào)峰為飛燕草素-3-蕓香糖苷。其中保留時(shí)間為24.018 min的花色苷（A3號(hào)峰）含量最高，表明藍(lán)果忍冬果實(shí)中C3G的含量最高（占總花色苷含量的91.1%）。Chaovanalikit等[21]在藍(lán)果忍冬果實(shí)中檢測(cè)到了6 種花色苷，同樣發(fā)現(xiàn)在這些花色苷中，C3G的含量最高。

表1 野生藍(lán)果忍冬果實(shí)中花色苷多酚高效液相色譜-三重四極桿-離子阱串聯(lián)質(zhì)譜鑒定結(jié)果Table 1 Liquid chromatography coupled to triple quadrupole ion trap mass spectrometric data and tentative identification of anthocyanins polyphenols from wild blue honeysuckle fruit

圖1 野生藍(lán)果忍冬果實(shí)中花色苷多酚高效液相色譜圖（520 nm）Fig.1 High performance liquid chromatogram of the anthocyanin polyphenols extracts from wild blue honeysuckle fruit detected at 520 nm

圖2 野生藍(lán)果忍冬果實(shí)中花色苷一級(jí)、二級(jí)質(zhì)譜圖Fig.2 Primary and secondary mass spectra of anthocyanins in wild blue honeysuckle fruit

野生藍(lán)果忍冬果實(shí)中共檢測(cè)到20 種非花色苷多酚（圖3），根據(jù)表2的保留時(shí)間和質(zhì)譜數(shù)據(jù)，對(duì)比非花色苷的一級(jí)和二級(jí)質(zhì)譜圖、參考文獻(xiàn)[21,24-26]和出峰順序進(jìn)行推斷，和花色苷的推測(cè)方法一致，P11、P13、P16號(hào)峰具有相同的碎片離子，m/z611是槲皮素的特征離子，蕓香糖苷、葡萄糖苷、鼠李糖苷的相對(duì)分子質(zhì)量分別是308、162和146，因此推斷P11、P13和P16號(hào)峰分別是槲皮素-3-蕓香糖苷、槲皮素-3-葡萄糖-7-鼠李糖苷和槲皮素-3-葡萄糖苷。P10號(hào)峰是由兩個(gè)原花青素單體聚合而成（m/z289），推斷P10號(hào)峰所代表物質(zhì)為原花青素二聚體。P12和P15號(hào)峰具有相同的特征離子（m/z285），P12號(hào)峰為失去一分子的蕓香糖苷，P15號(hào)峰為失去一分子半乳糖苷，因此P12和P15號(hào)峰所代表的物質(zhì)分別為山柰酚-3-蕓香糖苷和山柰酚-3-半乳糖苷。根據(jù)一級(jí)、二級(jí)質(zhì)譜和出峰時(shí)間，P1、P3、P6、P8號(hào)峰分別為奎寧酸（m/z191）、檸檬酸（m/z191）、龍膽酸（m/z153）和表兒茶素（m/z289）。其中，P2和P19號(hào)峰所代表的物質(zhì)未知，但推測(cè)P2號(hào)峰屬于奎寧酸類(lèi)多酚，P19號(hào)峰屬于山柰酚類(lèi)多酚。在野生藍(lán)果忍冬果實(shí)中發(fā)現(xiàn)含有較多種類(lèi)的槲皮素、奎寧酸和山柰酚等物質(zhì)，P7、P12號(hào)峰的峰面積最大，即5-咖啡?？鼘幩帷⑸借头?3-蕓香糖苷的含量較高，其中山柰酚-3-蕓香糖苷在非花色苷化合物中占比最大，表明藍(lán)果忍冬果實(shí)中非花色苷的主要組成成分是綠原酸和黃酮醇類(lèi)物質(zhì)，這一結(jié)果與Ochmian等[27]的研究結(jié)果一致。

表2 野生藍(lán)果忍冬果實(shí)中非花色苷多酚高效液相色譜-三重四極桿-離子阱串聯(lián)質(zhì)譜鑒定結(jié)果Table 2 Liquid chromatography coupled to triple quadrupole ion trap mass spectrometric data and tentative identification of non-anthocyanin polyphenols from wild blue honeysuckle fruit

圖3 野生藍(lán)果忍冬果實(shí)中非花色苷多酚高效液相色譜圖（280 nm）Fig.3 High performance liquid chromatogram of the non-anthocyanin polyphenols from wild blue honeysuckle fruit detected at 280 nm

2.2 野生藍(lán)果忍冬果實(shí)中總酚與花色苷含量

本實(shí)驗(yàn)中，野生藍(lán)果忍冬果實(shí)中總酚含量為82.7 mg/100 g，總花色苷含量為49.8 mg/100 g，謝佳璇[13]對(duì)藍(lán)果忍冬‘蓓蕾'進(jìn)行測(cè)定，總花色苷含量為37.85 mg/100 g，總酚含量為29.13 mg/100 g，Oszmiański等[26]發(fā)現(xiàn)藍(lán)果忍冬果實(shí)中總酚含量為24.37 mg/100 g，表明野生藍(lán)果忍冬在總花色苷和總酚含量方面存在優(yōu)勢(shì)。野生藍(lán)果忍冬與其他果實(shí)相比也存在優(yōu)勢(shì)，Méndez-Lagunas等[28]測(cè)定了草莓中的總酚和總花色苷含量，比較發(fā)現(xiàn)藍(lán)果忍冬果實(shí)中總酚和總花色苷含量是草莓中的10 倍。

2.3 野生藍(lán)果忍冬果實(shí)多酚粗提液的抗氧化活性

抗氧化活性的測(cè)定常用DPPH自由基清除能力法、ABTS陽(yáng)離子自由基清除能力法、FRAP法和ORAC法，在這些方法中，最關(guān)鍵的是測(cè)定樣品消除自由基的能力，過(guò)量的自由基會(huì)對(duì)生命大分子和各種細(xì)胞器進(jìn)行攻擊，從而對(duì)機(jī)體造成一定的損傷，加速機(jī)體的衰老，誘導(dǎo)高血壓、糖尿病等相關(guān)疾病的產(chǎn)生[29]?？寡趸瘎┠軌蛴行У厍宄龣C(jī)體內(nèi)過(guò)量的氧自由基，減輕其對(duì)機(jī)體的損傷，因此常將抗氧化劑的抗氧化活性作為衡量植物抗氧化性的關(guān)鍵指標(biāo)。抗氧化劑常分為阻止型抗氧化劑和斷鏈型抗氧化劑，植物體內(nèi)存在的多酚類(lèi)物質(zhì)一般屬于斷鏈型抗氧化劑，通過(guò)使自由基與氫離子或電子結(jié)合，轉(zhuǎn)化為穩(wěn)定的非自由基產(chǎn)物[30]。藍(lán)果忍冬果實(shí)中含有大量的多酚類(lèi)物質(zhì)，有研究表明，果實(shí)的抗氧化性與花色苷的含量和種類(lèi)存在顯著相關(guān)性[31]。Kahkonen等[32]對(duì)C3G的研究中發(fā)現(xiàn)，C3G的含量與抗氧化性存在正相關(guān)關(guān)系。從圖4可知，野生藍(lán)果忍冬果實(shí)的DPPH自由基清除能力為985 μmol/g，Kusznierewicz等[33]對(duì)波蘭的藍(lán)果忍冬栽培品種進(jìn)行抗氧化性測(cè)定，不同的藍(lán)果忍冬栽培品種DPPH自由基清除能力為93～166 μmol/g，ABTS陽(yáng)離子自由基清除能力為170～417 μmol/g，本實(shí)驗(yàn)中野生藍(lán)果忍冬果實(shí)對(duì)ABTS陽(yáng)離子自由基清除能力為512 μmol/g，波蘭的藍(lán)果忍冬抗氧化活性低于小興安嶺地區(qū)的野生藍(lán)果忍冬栽培品種。本實(shí)驗(yàn)中藍(lán)果忍冬果實(shí)的FRAP為9.6 μmol/g，ORAC為372 μmol/g，Thompson等[34]測(cè)定美國(guó)栽培的藍(lán)果忍冬果實(shí)的FRAP為37～113 μmol/g，ORAC為18～104 μmol/g，與本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果接近。

圖4 野生藍(lán)果忍冬果實(shí)多酚粗提液抗氧化活性Fig.4 Antioxidant activity of polyphenols extracted from wild blue honeysuckle fruit

2.4 野生藍(lán)果忍冬果實(shí)多酚粗提液對(duì)α-淀粉酶活性的抑制作用

2型糖尿病的關(guān)鍵表現(xiàn)是餐后高血糖[35]，α-淀粉酶是小腸腸道細(xì)胞膜上用于消化碳水化合物的關(guān)鍵酶，能夠催化淀粉、糖原和低聚糖α-1,4糖苷鍵的水解[36]。圖5為藍(lán)果忍冬果實(shí)中的多酚物質(zhì)對(duì)α-淀粉酶的活性抑制作用，以阿卡波糖為對(duì)照，當(dāng)其質(zhì)量濃度為0.26 mg/mL時(shí)表現(xiàn)出對(duì)α-淀粉酶的抑制活性（抑制率50%），藍(lán)果忍冬果實(shí)也對(duì)α-淀粉酶表現(xiàn)出抑制活性（IC50為0.39 mg/mL），抑制活性略低于阿卡波糖，但高于沙果提取物（IC50為10.31 mg/mL）[37]、乳苣（IC50為6.904 mg/mL）[38]、蔓越莓（IC50為5.015 mg/mL）、草原櫻桃（IC50為7.555 mg/mL）、軟棗獼猴桃（IC50為14.641 mg/mL）[39]，表明藍(lán)果忍冬具有較強(qiáng)的抗α-淀粉酶活性。Phan等[40]研究了多酚對(duì)α-淀粉酶活性的抑制效果，證明了多酚具有較強(qiáng)的α-淀粉酶抑制活性，Worsztynowicz等[37]的結(jié)果進(jìn)一步證明了多酚中的花色苷和酚酸類(lèi)物質(zhì)是抑制α-淀粉酶活性的主要物質(zhì)，這些研究表明，多酚化合物作為α-淀粉酶活性抑制劑，可有效降低餐后血糖濃度，并在預(yù)防糖尿病及糖尿病的前期治療中發(fā)揮重要作用。

圖5 阿卡波糖和野生藍(lán)果忍冬果實(shí)多酚粗提液對(duì)α-淀粉酶活性的抑制作用Fig.5 Inhibitory activity of α-amylase by acarbose and polyphenols extracted from wild blue honeysuckle fruit

2.5 野生藍(lán)果忍冬果實(shí)多酚粗提液對(duì)α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用

α-葡萄糖苷酶是小腸腸道細(xì)胞膜上用于消化碳水化合物的關(guān)鍵酶，能夠?qū)⒍寝D(zhuǎn)化成被小腸吸收的單糖，導(dǎo)致餐后血糖水平急劇升高[41]。食用對(duì)α-葡萄糖苷酶活性具有抑制作用的食物能夠有效緩解餐后血糖濃度升高，有利于糖尿病的預(yù)防和控制[36]。圖6表示藍(lán)果忍冬果實(shí)中的多酚物質(zhì)對(duì)α-葡萄糖苷酶的活性抑制作用，以阿卡波糖為對(duì)照，根據(jù)圖中曲線方程計(jì)算出其對(duì)α-葡萄糖苷酶的IC50為0.02 mg/mL，藍(lán)果忍冬果實(shí)對(duì)α-葡萄糖苷酶的IC50為0.933 mg/mL，與楊梅（IC50為1.562 mg/mL）[42]和芒果苷（IC50為1.642 mg/mL）[43]相比，具有較強(qiáng)的抗α-葡萄糖苷酶活性。研究表明，5-咖啡?；鼘幩醄44]、二咖啡?；鼘幩醄45]均能夠抑制α-葡萄糖苷酶的活性，這些物質(zhì)在野生藍(lán)果忍冬果實(shí)中含量較高，尤其是較高含量的5-咖啡酰基奎寧酸可能是藍(lán)果忍冬具有較高α-葡萄糖苷酶活性抑制作用的原因。

圖6 阿卡波糖和野生藍(lán)果忍冬果實(shí)多酚粗提液對(duì)α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用Fig.6 Inhibitory activity of α-glucosidase by acarbose and polyphenols extracted from wild blue honeysuckle fruit

2.6 野生藍(lán)果忍冬果實(shí)多酚粗提液對(duì)脂肪酶活性的抑制作用

近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，肥胖和超重人群糖尿病患病率逐年上升[46]，且肥胖和中心性肥胖程度與糖尿病嚴(yán)重程度呈正相關(guān)關(guān)系[47]。脂肪酶對(duì)于甘油三酯的消化起關(guān)鍵作用，能將甘油三酯水解成脂肪酸和單甘脂[48]。日常人們攝入的90%的膳食脂肪都是由混合型的甘油三脂組成，在消化過(guò)程中，脂肪酶可以水解50%～70%的脂肪[49]。抑制脂肪酶的活性可以減少人體對(duì)于脂肪的吸收，從而達(dá)到預(yù)防糖尿病的作用。植物多酚提取液能與酶聚合從而使酶失去活性，對(duì)脂肪酶表現(xiàn)出抑制活性[50]。本實(shí)驗(yàn)中，野生藍(lán)果忍冬的多酚粗提液對(duì)于脂肪酶具有一定的抑制活性，IC50為12.31 mg/mL。此外，槲皮素在脂肪酶活性抑制方面具有顯著的效果[9]，藍(lán)果忍冬果實(shí)中檢測(cè)到了槲皮素-3-蕓香糖苷和槲皮素-3-葡萄糖苷，這可能是藍(lán)果忍冬具有較強(qiáng)抗脂肪酶活性的原因。在關(guān)于植物對(duì)脂肪酶的活性抑制方面，Slanc等[51]共篩選了106 種食用和藥用植物以抑制胰脂肪酶活性，發(fā)現(xiàn)熊果、豌豆、挪威云杉和大葉椴樹(shù)具有較強(qiáng)的抑制脂肪酶活性的作用。但目前藍(lán)果忍冬對(duì)脂肪酶的抑制活性相關(guān)的研究較少，尤其是針對(duì)野生資源方面，未來(lái)可以利用其果實(shí)進(jìn)行抗肥胖食品的開(kāi)發(fā)。

3 結(jié) 論

野生藍(lán)果忍冬果實(shí)中的多酚成分含量豐富，果實(shí)中共檢測(cè)到8 種花色苷、20 種非花色苷，其中C3G和山柰酚-3-蕓香糖苷含量很高。藍(lán)果忍冬具有較強(qiáng)的抗氧化活性，總酚含量達(dá)到82.7 mg/100 g，總花色苷含量為49.8 mg/100 g；對(duì)α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶、脂肪酶的IC50分別為0.39、0.933 mg/mL和12.31 mg/mL，具有降血糖的作用。