劉維靜,聶 宇,廉 虹*,王玉瑤*

(1.山西醫(yī)科大學基礎(chǔ)醫(yī)學院生物化學與分子生物學教研室,太原 030001; 2.中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院國家心血管病中心阜外醫(yī)院心血管疾病國家重點實驗室,北京 100037)

心血管疾病(心肌梗死、心衰等)最終的結(jié)局均會導致心肌細胞的丟失,大量研究表明,成年哺乳動物心肌細胞處于終末期分化狀態(tài)而不能通過有絲分裂進行增殖,再生能力非常有限[1-2]。 因此,心肌再生的機制研究一直是心血管疾病領(lǐng)域的研究熱點。 小鼠是心血管疾病領(lǐng)域研究中使用最為廣泛的哺乳動物模型之一[3]。 2011 年,Porrello 課題組在新生小鼠出生后第1 天切除約15%的心尖部分,21 天后心臟可以完全再生,但在出生后第7 天進行心尖切除后心臟卻失去再生能力,只能出現(xiàn)疤痕修復[4]。 1 d 和7 d 心臟組織再生能力改變的原因一直是近年來研究的熱點[5-7]。 心臟成纖維細胞占整個心臟組織的50%以上,在心臟中起到分泌膠原和生長因子等作用,是構(gòu)成細胞外基質(zhì)的一類重要細胞類型,在維持心臟結(jié)構(gòu)和功能中發(fā)揮重要作用[8]。 近年研究表明,心臟成纖維細胞在心肌再生領(lǐng)域中發(fā)揮了重要作用[9-11]。 本文通過比較小鼠出生后1 d 和7 d 的心臟組織中成纖維細胞數(shù)量的變化以及對這兩個時間點的成纖維細胞標志蛋白在轉(zhuǎn)錄水平的分析,探究了小鼠出生1 d 和7 d 心肌成纖維細胞的比例和性狀變化,為研究心肌成纖維細胞在再生領(lǐng)域的研究提供基礎(chǔ)性研究數(shù)據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實驗動物

80 只出生 1 d(1.2 ～1.5 g,誤差小于 10%)和60 只出生7 d(4.5 ～4.8 g,誤差小于 10%)的 SPF級別C57BL/6 J 小鼠購買自北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司[SCXK(京)2016-0011],不區(qū)分雌雄。 小鼠的模型制作以及取材均在中國醫(yī)學科學院阜外醫(yī)院國家心血管病中心E 座屏障設(shè)施內(nèi)進行[SYXK(京)2017-0015]。 動物實驗中涉及的動物所有操作程序符合3R 原則,已得到中國醫(yī)學科學院阜外醫(yī)院實驗動物管理和使用委員會的批準(FW-2019-0005)。

1.2 主要試劑與儀器

BD Aria II 流式細胞儀(FACSAria 2,美國);體式顯微鏡(Zeiss,德國);全自動組織脫水機(Leica,德國);展片機(Leica,德國);烤片機(Leica,德國);熒光共聚焦顯微鏡(Zeiss,德國);全自動掃片機(Zeiss,德國);普通 PCR 儀(Bio-Rad,美國);實時熒光定量 PCR 儀(Bio-Rad,美國);DMEM(Gibco,美國);胎牛血清(Gibco,美國);含 EDTA 的胰酶(Gibco,美國);Masson 染色試劑盒(Sigma);antisarcomeric alpha actinin (1 ∶200,ab9465,Abcam,英國),anti-Vimentin (1 ∶100,ab92547,Abcam,英國);Neonatal Heart Dissociation Kit(Miltenyi 公司, 德國);Gentle MACS Octo Dissociator 儀器(Miltenyi 公司,德國);Neonatal Cardiac Fibroblast Isolation Kit(Miltenyi 公 司, 德 國);SYBR Green qPCR Master Mix(A25742,美國 Applied Biosystems)。

1.3 實驗方法

1.3.1 流式細胞分選

流式細胞儀對細胞進行自動分析和分選,檢測懸浮在液體中的單個分散細胞以及其它微粒信號,一般先將待測樣本熒光染色后制備為懸液標本,在周圍氣體壓力下待測樣本流入流動室,鞘液從鞘液管中流出,包裹著待測樣本高速流動,形成鞘流,待測細胞分開為單個細胞依次通過檢測區(qū)域,達到細胞分選的目的[12]。

(1)樣本制備

①小鼠心臟的獲取

出生1 d 的小鼠40 只,出生7 d 的小鼠20 只,使用75%乙醇對小鼠進行消毒,快速取出心臟,剪掉連帶血管組織,PBS 沖洗3 次,將心臟中血液沖洗干凈備用,此過程在冰上操作。

②剪碎,消化心臟組織,收集細胞

將取出的心臟組織置于10 cm 直徑的培養(yǎng)皿中,剪碎至大約每小塊1 mm3,置于帶有自制轉(zhuǎn)子的三角燒瓶中,加入10 mL 0.08%的胰酶的消化液,放入磁力攪拌的水浴鍋中,調(diào)節(jié)溫度30℃,消化 8 min,棄掉上清(首次消化除去血細胞)。 繼續(xù)加入10 mL 0.08%的胰酶進行消化8 min,吸取上清經(jīng)40 μm 的篩子過濾后,置于 10 mL 含 10% FBS 的DMEM 中,此過程重復操作7 ～8 次后,組織塊成絮狀,說明細胞基本無殘留,終止消化過程,將收集到的細胞懸液,室溫 1200 r/min,5 min 離心,收集細胞。

(2)細胞分選

①制備上機懸液

將收集好的細胞使用PBS 沖洗一次,1×106細胞量為一個反應,成纖維細胞表面標志物Thy1-APC抗體以1 ∶100 的比例稀釋,同時做好陰性對照和同型對照(Isotype control)。 混勻后冰浴 30 min,后1200 r/min,5 min 離心,棄上清,再次使用PBS 清洗一次,最后40 μm 細胞過濾篩子過濾至流式管中,待上機。

②流式上機分選

細胞懸液上機前5 min 加入活性染料7-AAD,混勻,上機,收集分選后的心肌成纖維細胞,分選結(jié)束后,將分選出的陽性細胞管進行回測實驗,驗證細胞純度。 所有流式細胞術(shù)均在BD Aria II 流式細胞儀上進行,分選目的細胞的電壓分別為,FSC: 100 V, SSC: 250 V, APC: 181 V。

1.3.2 心尖切除

出生1 d 和7 d 的小鼠分別埋于碎冰中冰凍麻醉2 min 和5 min,醫(yī)用膠帶將小鼠四肢固定在預冷的微型金屬手術(shù)臺上,將其置于體式顯微鏡下,75%乙醇對小鼠胸前皮膚進行消毒。 用顯微剪于小鼠第4～5 肋間隙剪開長約1 cm 的切口,隨后利用眼科鑷撐開胸腔,輕輕撕掉心包膜,采用顯微鑷在切口外端輕微按壓擠出心臟,之后使用虹膜剪剪去心臟部分左心室心肌組織,左心室輕微滲血即可,隨后將心臟送回胸腔。 8-0 滌綸線縫合小鼠皮膚后,將小鼠置于37℃恒溫臺數(shù)分鐘,待小鼠完全恢復呼吸、活動自由后放回母鼠籠中。

1.3.3 組織學檢測

對出生1 d 和7 d 的小鼠分別進行心尖切除(AR, Apical resection),術(shù)后21 d 取完整心臟,4%多聚甲醛固定48 h,脫水后進行石蠟包埋,以5 μm的厚度切片。 按照之前研究操作[13],將石蠟切片放在烤片機上68℃烘烤45 min 防止脫片,隨后將玻片依次放入二甲苯Ⅰ、Ⅱ各10 min,100%、95%、80%、75%、50%梯度乙醇中各5 min 進行脫蠟、水化,之后在重鉻酸鉀中過夜,使用Masson 染色試劑盒進行染色,根據(jù)Masson 染色方法,苯胺藍染液將膠原纖維染為藍色即為組織纖維化。 若心尖處無藍色纖維化組織則可視作心臟完全再生,若心尖處存在纖維化組織則為心臟不完全再生,再生率是指術(shù)后完全再生小鼠只數(shù)占所有手術(shù)小鼠只數(shù)百之比。 對于HE 染色,則需將玻片在烤片機上68℃烘烤45 min后直接進行染色。

1.3.4 免疫熒光染色

取1 d 和7 d 小鼠完整心臟,4%多聚甲醛固定24 h,脫水后進行石蠟包埋,以5 μm 的厚度切片。根據(jù)之前研究[13],脫蠟水化之后使用EDTA 修復法高溫修復2 min,使用含Triton-X 100 的山羊血清封閉液封閉1 h,在4℃孵育一抗過夜:anti-sarcomeric alpha actinin (1 ∶200; ab9465, Abcam, UK),anti-Vimentin (1 ∶100; ab92547, Abcam, UK)。 室溫復溫1 h,使用PBS 將玻片洗滌5 次,每次5 min,在室溫與熒光標記二抗避光孵育1 h,PBS 洗滌玻片5次,每次5 min,然后使用含DAPI 的封片劑封片。我們使用蔡司LSM800 共聚焦激光掃描顯微鏡(Carl Zeiss, Inc., Jena, Germany)檢測熒光強度。

1.3.5 心臟組織成纖維細胞分離

取1 d 和7 d 小鼠完整心臟各20 只,剪掉血管連帶組織,在PBS 緩沖液中沖洗3 遍,放入含有酶液(含酶 A:12.5 μL、酶 P:62.5 μL、酶 D: 100 μL、緩沖液 Y:25 μL、緩沖液 X:2300 μL)的 C 管中,利用Neonatal Heart Dissociation Kit 及 Gentle MACS Octo Dissociator 儀器消化心臟;消化結(jié)束后立即用含10% 胎牛血清(FBS)的DMEM 終止消化,70 μm濾網(wǎng)過濾,1000 r/min 離心5 min,棄上清,使用紅細胞裂解液裂解紅細胞,3 min 后使用PBS 緩沖液終止裂解,1000 r/min 離心5 min;使用含有穩(wěn)定劑和0.05%疊氮化鈉的緩沖液重懸,30 μm 濾網(wǎng)過濾,使用Count Star 進行細胞計數(shù),按照5×106細胞量為一個體系,使用Neonatal Cardiac Fibroblast Isolation Kit 分離成纖維細胞。

1.3.6 qRT-PCR

使用TRIzol 試劑(Invitrogen)提取分離的心臟成纖維細胞中的 RNA,然后使用 PrimeScript RT Master Mix(TaKaRa,RR036A)將其轉(zhuǎn)化為 cDNA。使用SYBR Green qPCR Master Mix 進行qRT-PCR,并在Vii7 Real-Time PCR System 上擴增,擴增條件為95℃預變性2 min,后95℃運行15 s 進行變性,60℃運行15 s 進行退火,72℃運行1 min 進行延伸,變性、退火、延伸過程共進行40 個循環(huán)。 下面列出了 該 反 應 的 所 有 引 物。Thy1 正 向: 5′-GGAACTCTTGGCACCATGAAC-3′, 反 向: 5′-TTATTCTCATGGCGGCAGTC-3′;Fsp-1 正 向: 5′-GGAGGCCCTGGATGTAATTGTG - 3′, 反 向: 5′-CAACTTCATTGTCCCTGTTGCTG-3′;Periostin正向:5′-ACTGAATGCCTTACACAGCCACA-3′, 反 向:5′-TCGAGCACAGTTCACAGTGACAA-3′;Pdgfα正向:5′-GGCAGGCACATTTACATCTATG - 3′, 反 向: 5′-CATCCTCTTCCACGATGACTAA-3′;Col1a1 正向:5′-TGAACGTGGTGTACAAGGTC-3′, 反 向: 5′-CCATCTTTACCAGGAGAACCAT-3′;Tcf21 正 向:5′-GCGATGTAGAAGACCTTCAAGA - 3′, 反 向: 5′-GAAGTTCCAAACTCCTTGTTGG-3′;Gapdh正向:5′-GCAGTGGCAAAGTGGAGAATTG - 3′, 反 向: 5′-AGAGATGATGACCCTTTTGGCTCC-3′。

1.4 統(tǒng)計學方法

使用 GraphPad Prism(7.0 版,GraphPad 軟件)分析所有結(jié)果。 所有數(shù)據(jù)均表示為平均數(shù)±標準差()。 組間差異通過未配對的t檢驗進行評估。顯著性水平由Prism 軟件得出,*P＜0.05 被認為是有統(tǒng)計學差異。

2 結(jié)果

2.1 小鼠出生1 d 和7 d 心臟組織的變化

按照之前報道的心尖切除操作方法[14],我們對出生1 d 和出生 7 d 的小鼠分別進行了 AR(圖1A),石蠟切片進行HE 染色觀察切口處病理結(jié)構(gòu)(圖1B),與之前研究相一致,術(shù)后21 d 發(fā)現(xiàn)出生1 d 進行 AR 的小鼠可以完全再生(再生率為87.67%),而出生7 d 進行 AR 的小鼠術(shù)后21 d 無法再生(再生率為0)(圖1C、1D)。 為了解小鼠出生后7 d 心臟組織的變化情況,我們分別取1 d 和7 d 小鼠完整心臟,稱取小鼠心臟濕重,同時對兩個時間點小鼠心臟進行拍照比較小鼠心臟大小(圖1E),石蠟切片進行HE 染色觀察其病理結(jié)構(gòu)(圖1F),發(fā)現(xiàn)小鼠出生后7 d 心臟組織平均比1 d 心臟濕重重 13.13 mg(3.11 倍)(1 d:(6.22 ± 0.19),7 d:(19.35 ± 0.56),P＜ 0.0001;n=6)(圖 1G)。 心臟成纖維細胞免疫熒光染色證明,7 d 心臟成纖維細胞數(shù)量明顯高于1 d 心臟(圖1H、1I)。 以上結(jié)果說明,小鼠出生早期心臟體積隨著心臟發(fā)育增大的同時,心臟成纖維細胞數(shù)量也隨之增加。

2.2 流式細胞術(shù)分選心臟成纖維細胞

2.2.1 流式細胞術(shù)分選心臟成纖維細胞的圈門策略

為了分析小鼠出生后7 d 心臟成纖維細胞數(shù)量的變化情況,我們使用成纖維細胞表面標志蛋白Thy1 標記出生1 d 和7 d 的小鼠心肌成纖維細胞,通過流式細胞術(shù)進行細胞分選。 首先,我們通過正向散射(FSC)和側(cè)向散射(SSC)散點圖,去除細胞碎片以及黏連細胞圈出P1 門(圖2A),P1 門中的細胞開展后續(xù)分析。 為了避免背景熒光及自發(fā)熒光的影響,收集分離后未染色的細胞作為空白對照(Blank,圖2B);收集加入無熒光染料的單個抗體的細胞作為同型對照(圖2C),以此判斷抗原抗體的特異性結(jié)合;使用APC 標記抗體收集所有APC+細胞(圖 2D),最后,加入活性染料 7-AAD,收集APC+、7-AAD-的所有細胞即為Thy1+的活的心肌成纖維細胞,即為Q4(圖2E),收集Q4 門中的所有細胞,收集5000 個細胞后記錄陽性細胞占總細胞的比例。

圖1 小鼠出生1 d 和7 d 心臟組織的變化Note, A, Apical resection was performed on day 1 and day 7 mice respectively, the heart was photographed immediately. B,Apical resection was performed on day 1 and day 7 mice respectively, the heart section of the mouse was stained with HE. C, Apical resection was performed on day 1 and day 7 mice respectively,and Masson staining was performed at 21 days after the operation. D,Apical resection was performed on day 1 and day 7 mice,and regeneration rate was counted at 21 day after operation. E,The whole heart of the mouse was photographed on day 1 and day 7. F, The heart section of the mouse was stained with HE on day 1 and day 7. G, The heart weight of the mouse was compared on day 1 and day 7. H,Cardiomyocytes and fibroblasts co-stained in 1 day and 7 days of mouse heart sections. I,Immunofluorescence staining of fibroblasts in 1 day and 7 days of mouse heart sections.Figure 1 Changes of heart tissue in mice on day 1 and day 7

2.2.2 小鼠出生1 d 和7 d 心肌成纖維細胞比例變化的比較

為明確小鼠出生1 d 和7 d 心臟成纖維細胞的比例變化,我們在分選的同時對心臟組織中成纖維細胞所占比例進行了統(tǒng)計。 按圖1 所示,收集Q4門中細胞,收集5000 個細胞后記錄陽性細胞占總細胞的比例,我們共進行了3 次重復實驗,出生后1 d小鼠的心臟組織細胞中,Thy1+細胞所占比例分別為6.9%、7.6%、8.7%,7 d 的小鼠心臟組織細胞中,Thy1+細胞所占比例分別為9.5%、11.8%、10.4%,因此,小鼠出生后7 d 心臟組織中心肌成纖維細胞占總細胞比例比出生后1 d 時高2.9%(1.38 倍)(1 d: (7.7 ± 0.74),7 d: (10.6 ± 0.95)),P=0.029,t=3.334,差異具有統(tǒng)計學意義(表1)。

2.3 小鼠出生1 d 和7 d 心臟組織中成纖維細胞蛋白標志物的表達變化比較

小鼠出生后7 d 心臟組織中成纖維細胞比例明顯高于出生后1 d 小鼠心臟組織。 為了驗證成纖維細胞在小鼠出生后的性狀變化,我們分別分離了1 d和7 d 的心臟成纖維細胞,通過qRT-PCR 檢測心臟組織中成纖維細胞標志蛋白Thy1、Fsp-1、Periostin、Pdgfrα、Col1a1、Tcf21 在轉(zhuǎn)錄水平上的表達變化。以出生1 d 小鼠心臟成纖維細胞中標志蛋白的轉(zhuǎn)錄水平表達為對照,比較分析出生后7 d 小鼠心臟成纖維細胞中標志蛋白Thy1、Fsp-1、Periostin、Pdgfrα、Col1a1、Tcf21 的表達,反映心臟中成纖維細胞的性狀變化。 結(jié)果顯示,與出生后1 d 相比,出生后7 d心臟成纖維細胞中Thy1、Fsp-1、Periostin的表達顯著高于1 d 成纖維細胞(Thy1: 1 d: (1.01± 0.12),7 d: (2.71 ± 0.27),P=0.0288;Fsp-1: 1 d: (1.04± 0.27),7 d: (5.28 ± 0.10),P=0.0046;Periostin:1 d: (0.91 ± 0.01),7 d: (1.13 ± 0.05),P=0.0119;n=3)(圖 3A、3B、3C);而Pdgfrα、Col1a1、Tcf21 的表達顯著低于1 d 成纖維細胞(Pdgfrα: 1 d: (1.09 ± 0.04),7 d: (0.62 ± 0.01),P=0.0068;Col1a1: 1 d: (1.00 ± 0.09),7 d: (0.57 ± 0.02),P=0.0433;Tcf21: 1 d: (1.00 ± 0.03),7 d: (0.54± 0.02),P=0.0054;n=3)(圖 3D、3E、3F),由此證明小鼠出生后1 d 到7 d 心臟中成纖維細胞性狀發(fā)生了改變。

綜上我們發(fā)現(xiàn):小鼠出生早期(1 ～7 d)心臟成纖維比例不斷增加的同時,成纖維細胞的性狀也發(fā)生了改變,為心臟再生機制研究提供一定的線索。

3 討論

成纖維細胞起源于胚胎時期的間充質(zhì)干細胞,廣泛分布于心臟、腎、肝、皮膚等器官間質(zhì)中,其細胞體積大且形態(tài)多樣多變,隨外界微環(huán)境改變而改變[15-16]。 心臟成纖維細胞是心臟的主要組成細胞,占整個心臟組織總細胞的50%以上[12,17-18],在心臟中發(fā)揮維持心臟結(jié)構(gòu)和功能的作用。 本研究主要針對小鼠出生1 d 和7 d 兩個時間點成纖維細胞的數(shù)量及性狀的變化情況,發(fā)現(xiàn)小鼠出生后7 d 心臟組織中成纖維細胞比例明顯高于出生后1 d 小鼠心臟組織;在成纖維細胞轉(zhuǎn)錄水平,成纖維細胞標志物Thy1、Fsp-1、Periostin在小鼠出生后 7 d 表達高于出生后 1 d 的成纖維細胞,而Pdgfrα、Col1a1、Tcf21三種成纖維細胞標志蛋白表達則低于出生后1 d 的小鼠心臟中的成纖維細胞,提示在小鼠出生后7 d心臟組織中成纖維細胞性狀發(fā)生了變化。

表1 小鼠出生后1 d 和7 d 心肌成纖維細胞比例變化比較Table 1 Comparison of the ratio of cardiac fibroblasts in mouse at 1 day and 7 days after birth

圖2 流式細胞術(shù)分選心臟成纖維細胞的圈門方法Note, A, All cells were collected without cell debris and adhesion cells. B, Unstained cells were collected as blank control. C, Cell labeled with single antibody without fluorescent dyes were collected as isotype controls. D, The APC+ cells among total cells were collected. E, The APC+,7-ADD- cells among total cells were collected.Figure 2 The ring gate method of sorting cardiac fibroblasts by flow cytometry

成纖維細胞具有強大的多向分化潛能[19-20],增殖能力強且代謝旺盛,可體外培養(yǎng)、多次傳代[21-22]。在未受傷的成年心臟中,成纖維細胞主要作用于營養(yǎng)因子的分泌、ECM 監(jiān)測、傳導系統(tǒng)絕緣、心肌細胞電偶聯(lián)和血管維護;在損傷的心臟中,成纖維細胞增殖,沉積ECM,招募炎癥細胞,是體外機制探索的重要細胞類型[23]。 成年哺乳動物心臟受損后喪失心肌細胞增殖能力導致無法進行有意義的自我恢復[1-2],2011 年,Porrello 研究組發(fā)現(xiàn)新生小鼠出生后1 d 切除約15%的心尖部分,21 d 后心臟可以完全再生,但在出生后第7 d 進行心尖切除后只能出現(xiàn)疤痕修復[4],其中的原理機制尚不清楚,但是小鼠出生后7 d 成為心臟組織是否可以再生的時間轉(zhuǎn)折點是確定的。 有研究表明,心臟中成纖維細胞可以重編程為心肌細胞,2010 年leda 等[24]將小鼠心肌成纖維細胞直接重編程為心肌樣細胞,首次報道了成纖維細胞向心肌細胞的直接重編程。 近幾年,Qian 等[10]、Song[25]等在小鼠心肌梗死部位注射GHMT(Gata4、Hand2、Mef2c、Tbx5)也可引起心臟成纖維細胞重編程為心肌細胞,為再生醫(yī)學研究奠定了扎實基礎(chǔ)。

心臟成纖維細胞異質(zhì)性很強,沒有特異性表達的標志蛋白,在發(fā)育過程的不同階段成纖維細胞表達的蛋白發(fā)生變化,因此,目前研究者通常使用多種標志蛋白組合標記的方法對成纖維細胞進行標識。Thy1 是目前為止研究最為詳細的一種細胞表面糖蛋白,在所有成纖維細胞中均表達,該糖蛋白通過糖基磷脂酰肌醇部分固定在細胞表面,編碼的蛋白經(jīng)過進一步的處理,生成成熟的蛋白,介導細胞與細胞的相互作用,從而觸發(fā)下游信號通路,參與細胞增殖、細胞凋亡等過程[26-27];Fsp-1 為成纖維細胞分泌因子,在體外培養(yǎng)的成纖維細胞中高度表達,對維持細胞生物學功能起著重要作用[28-29];Periostin是肌成纖維細胞分泌的細胞外基質(zhì)中的非結(jié)構(gòu)性基質(zhì)蛋白,在正常心臟中幾乎不表達,但是在受損的心臟中高度表達,是一種相對較新的潛在標志物,可用于鑒定心肌成纖維細胞,促進肌成纖維細胞的募集并增加膠原蛋白的產(chǎn)生[30]。Col1a1是Ⅰ型膠原的主要成分,可用于鑒定心臟成纖維細胞,并與pdgfrα共同表達[31];pdgfrα是酪氨酸蛋白激酶家族成員,具有促進細胞趨化分裂增殖、細胞趨化、血管收縮及參與組織器官的生成分化等生物效應;Tcf21 在心臟成纖維細胞中表達,與其他標志物一起鑒別心臟成纖維細胞[32]。 我們的結(jié)果顯示,小鼠出生后7 d 成纖維細胞占整個心臟組織的比例較出生后1 d 心臟組織升高了2.9%,成纖維細胞的標志物Thy1、Fsp-1、Periostin、Pdgfrα、Col1a1、Tcf21表達水平也發(fā)生了顯著改變,提示此過程中成纖維細胞細胞性狀發(fā)生了一定程度的改變,可能與小鼠出生7 d 后再生能力丟失相關(guān),進一步探討小鼠出生7 d 心臟成纖維細胞的變化與心肌再生關(guān)系和機制,有可能為尋找出心肌再生關(guān)鍵的靶點提供新的研究方向。

圖3 小鼠出生1 d 和7 d 心臟成纖維細胞標志的變化Note.Compared with 1 day group, *P＜0.05,**P＜0.01.Figure 3 Changes of cardiac fibroblast markers in mouse at 1 day and 7 days after birth

隨著科學界對心肌成纖維細胞功能的不斷深入研究,發(fā)現(xiàn)心肌成纖維細胞在心臟生理及病理條件下的作用越來越重要,成為心血管領(lǐng)域的重要研究對象。 本研究主要著眼于小鼠出生后1 d 和出生后7 d 心臟成纖維細胞的數(shù)量和心臟成纖維細胞中標志物的表達分析,為心肌再生領(lǐng)域的研究提供一定的實驗數(shù)據(jù)和理論線索。