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        高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定食品中的 5種生物堿含量

        2021-06-16 07:44:34賈琳斐賈潤芳
        現(xiàn)代食品 2021年7期
        關(guān)鍵詞:方法

        ◎ 賈琳斐,管 理,賈潤芳,張 鑫,尹 靜

        (咸陽市食品藥品檢驗檢測中心,陜西 咸陽 712000)

        罌粟殼為植物罌粟干燥后的成熟果殼,含有罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因和蒂巴因等多種生物堿類物質(zhì)[1]。罌粟殼的主要成分在臨床具有一定的藥用價值,但長期食用含有罌粟殼的食品,會產(chǎn)生一定的依賴性,嚴(yán)重時甚至?xí)粑ソ叨劳鯷2]。國家發(fā)布的《食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)和易濫用的食品添加劑名單》中含有罌粟殼。因此,建立一種前處理快速、準(zhǔn)確性高的檢測方法,對食品中生物堿的測定具有重要的意義。

        目前,測定食品中生物堿的方法有分光光度法[3]、高效液相色譜法[4-5]、氣相色譜法[6]、氣相色譜-質(zhì)譜法[7]及液相色譜-質(zhì)譜法[8-10]。其中,氣相色譜法和液相色譜法不能準(zhǔn)確定性目標(biāo)物,易造成假陽性結(jié)果,氣相色譜-質(zhì)譜法樣品前處理復(fù)雜,檢測成品較高,不適用于批量樣品檢測。

        本實驗采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法通過優(yōu)化色譜條件,建立罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因和蒂巴因5種生物堿快速、簡單、準(zhǔn)確的檢測方法。

        1 材料與方法

        1.1 材料與試劑

        甲醇、乙腈:美國Thermo公司生產(chǎn);超純水由Millipore超純水系統(tǒng)制備。罌粟堿、那可丁標(biāo)準(zhǔn)品:純度99.9%,美國CATO公司生產(chǎn);可待因標(biāo)準(zhǔn)品:純度96.9%,中國食品藥品檢定研究院生產(chǎn);蒂巴因、嗎啡、嗎啡-D3、可待因-D3標(biāo)準(zhǔn)品(液體):純度99%,規(guī)格1 mg·mL-1,Sigma公司生產(chǎn)。

        1.2 儀器與設(shè)備

        PE Qsight 210液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(珀金埃爾默公司);H1850離心機(湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司)、VXRBS025自動渦旋混合器(德國IKA公司)。

        1.3 方法

        1.3.1 色譜條件

        色譜柱:Phenomenex Kinetex C18色譜柱(2.1 mm×100 mm,2.6 μm),柱溫:40 ℃;進(jìn)樣體積:5 μL;流速:0.3 mL·min-1;流動相:A為0.1%甲酸乙腈,B為5 mmol·L-1乙酸銨;梯度洗脫程序:0~0.3 min,A、B比 例 為 10∶ 90;0.3~ 1.0 min,A、B由10∶ 90改 變 為 25∶ 75;1.0~ 3.5 min,A、B保持25∶75;3.5~4 min,A、B由25∶75改變?yōu)?0∶90;4~7 min保持10∶90。

        1.3.2 質(zhì)譜條件

        多反應(yīng)監(jiān)測掃描模式(MRM),ESI+,干燥器流速:110 μL·min-1;脫溶劑氣溫度:320 ℃;霧化器流速:180 μL·min-1;離子源噴霧電壓:5 500 V;離子源溫度:400 ℃。各化合物質(zhì)譜條件參數(shù)見表1。

        1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

        稱取罌粟堿、可待因、那可丁標(biāo)準(zhǔn)品適量,用0.5%甲酸甲醇配制成濃度為1 mg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)儲備液;用基質(zhì)空白溶液配制罌粟堿、那可丁、蒂巴因的標(biāo)準(zhǔn)系列 工 作 液:0.05 ng·mL-1、0.1 ng·mL-1、0.2 ng·mL-1、0.5 ng·mL-1和 1.0 ng·mL-1;嗎啡、可待因標(biāo)準(zhǔn)系列工作液:1.0 ng·mL-1、2.0 ng·mL-1、5.0 ng·mL-1、10 ng·mL-1和 25 ng·mL-1。內(nèi)標(biāo)濃度為 20 ng·mL-1。

        1.3.4 樣品前處理

        稱取2 g試樣于50 mL離心管中,加入60 μL的5 μg·mL-1內(nèi)標(biāo)物,液體、半固體加入3 mL水,固體樣品加入5 mL的0.1 mol·L-1鹽酸溶液,渦旋振蕩30 s,準(zhǔn)確加入15 mL乙腈,渦旋振蕩1 min,超聲處理30 min,加入6 g無水硫酸鎂和1.5 g無水醋酸鈉的混合粉末,迅速振搖,渦旋振蕩1 min,以4 000 r·min-1離心5 min,取上清液,0.22 μm濾膜過濾。進(jìn)樣測定嗎啡、可待因;將濾液用乙腈稀釋20倍,進(jìn)樣測定罌粟堿、那可丁、蒂巴因。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 實驗條件優(yōu)化

        2.1.1 色譜柱的選擇

        分別選用Phenomenex Kinetex HILIC柱(2.1 mm×100 mm,1.7 μm) 和 Phenomenex Kinetex C18柱(2.1 mm×100 mm,2.6 μm)2種不同的高效液相色譜柱對各組分進(jìn)行分離。結(jié)果表明,HILIC柱分離效果不佳,且峰型較差;而C18柱分離度較好,且峰型較HILIC柱更佳,故選擇Phenomenex Kinetex C18柱作為高效液相色譜柱。

        2.1.2 流動相的選擇

        分別配制0.1%甲酸水-甲醇,0.1%甲酸乙腈-5 mmol·L-1乙酸銨作為流動相。結(jié)果顯示,選用0.1%甲酸水-甲醇作為流動相,5種組分峰型較寬,且分離度較差,罌粟堿與那可丁并未分開;選用0.1%甲酸乙腈-5 mmol·L-1乙酸銨作為流動相,峰型較前兩者有明顯改善,分離效果佳,線性較好,且響應(yīng)最高,故選擇0.1%甲酸乙腈-5 mmol·L-1乙酸銨作為流動相。

        2.2 方法檢出限及定量限

        取5種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的系列工作液進(jìn)樣,以罌粟堿、那可丁、蒂巴因的色譜峰面積為縱坐標(biāo),濃度為橫坐標(biāo)繪制工作曲線,外標(biāo)法定量;以嗎啡、可待因的色譜峰面積與相應(yīng)內(nèi)標(biāo)物峰的比值為縱坐標(biāo),濃度為橫坐標(biāo)繪制工作曲線,內(nèi)標(biāo)法定量。S/N=3時對應(yīng)目標(biāo)物的含量為方法檢出限;S/N=10時對應(yīng)目標(biāo)物的含量為方法定量限。結(jié)果得出,罌粟堿、那可丁、蒂巴因的方法檢出限為2.5 μg·kg-1,方法定量限為 7.5 μg·kg-1。嗎啡、可待因方法檢出限為 12 μg·kg-1,方法定量限為 36 μg·kg-1。

        2.3 精密度及回收率

        準(zhǔn)確稱取16份陰性試樣各2 g于50 mL離心管中,一組作為空白對照,其余15份平均分為3組,進(jìn)行3梯度加標(biāo)試驗?;|(zhì)空白標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量測定,計算方法回收率和精密度,結(jié)果見表2。由表中數(shù)據(jù)分析得知,該方法精密度、回收率均滿足痕量實驗分析要求。

        表2 添加3種不同濃度的回收率及精密度表

        3 結(jié)論

        本研究使用三重四極桿電噴霧離子源(ESI),采用多反應(yīng)監(jiān)測模式(MRM),可以準(zhǔn)確測定食品中罌粟堿、那可丁、蒂巴因、嗎啡和可待因5種生物堿,其中,罌粟堿、那可丁、蒂巴因的檢出限為2.5 μg·kg-1,定量限為 7.5 μg·kg-1;嗎啡、可待因的檢出限為 12 μg·kg-1,定量限為 36 μg·kg-1。平均回收率為84.2%~96.0%,精密度為3.2%~6.8%。該方法準(zhǔn)確性好,前處理易操作,可用于生物堿的批量檢測。

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