周迎春 韓文鳳 劉致遠(yuǎn)

1.河南進(jìn)口肉類指定口岸漯河查驗(yàn)區(qū)服務(wù)中心 河南漯河 462300 2.漯河職業(yè)技術(shù)學(xué)院 河南漯河 462000

萬(wàn)古霉素(Vancomycin)和去甲萬(wàn)古霉素(Norvancomycin)分子式分別為：C66H75Cl2N9O24、C65H73Cl2N9O24，他們均屬于抗革蘭氏陽(yáng)性菌的三環(huán)糖肽類抗生素，其藥力較強(qiáng)，被稱為“抗生素最后的王牌”，可用來(lái)治療超級(jí)耐藥細(xì)菌如超級(jí)細(xì)菌NDM1、MRSA、MRSE細(xì)菌的感染[1]，是人類目前對(duì)付超級(jí)耐藥菌株的最后一道防線。

在商業(yè)利益的驅(qū)動(dòng)下，萬(wàn)古霉素和去甲萬(wàn)古霉素被不法分子應(yīng)用于養(yǎng)殖業(yè)，從而造成動(dòng)物性食品中萬(wàn)古霉素和去甲萬(wàn)古霉素殘留。

長(zhǎng)期或過(guò)量食用含有萬(wàn)古霉素和去甲萬(wàn)古霉素的動(dòng)物源性食品，可引起耳、腎和神經(jīng)系統(tǒng)毒性反應(yīng)，皮膚過(guò)敏及器官功能紊亂等不良反應(yīng)[2]。同時(shí)，由于萬(wàn)古霉素及去甲萬(wàn)古霉素的濫用，導(dǎo)致其耐受細(xì)菌的數(shù)量也有所增加，產(chǎn)生更嚴(yán)重的抗生素耐藥性，這對(duì)人類疾病的預(yù)防和治療極其不利，影響動(dòng)物源性食品安全、公共衛(wèi)生、生態(tài)平衡以及動(dòng)物性食品出口。

在肉類進(jìn)口過(guò)程中，萬(wàn)古霉素的測(cè)定曾一度是國(guó)際貿(mào)易中的壁壘。因此，對(duì)動(dòng)物源性食品開(kāi)展萬(wàn)古霉素及去甲萬(wàn)古霉素殘留量的檢驗(yàn)檢測(cè)工作迫在眉睫。

1 動(dòng)物性食品中萬(wàn)古霉素及去甲萬(wàn)古霉素測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)的研究進(jìn)展

我國(guó)農(nóng)業(yè)部第560號(hào)公告將萬(wàn)古霉素及去甲萬(wàn)古霉素規(guī)定為禁用獸藥。

2010年03月22日，衛(wèi)生部第四批《食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)和易濫用的食品添加劑名單》(整頓辦函〔2010〕50號(hào))公告將萬(wàn)古霉素列為可能違法添加的非食用物質(zhì)，并特別注明：“需要研制動(dòng)物性食品中測(cè)定萬(wàn)古霉素的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法”。

通過(guò)檢索國(guó)內(nèi)外已公開(kāi)發(fā)布的標(biāo)準(zhǔn)，未查詢到相關(guān)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或已立項(xiàng)未批準(zhǔn)發(fā)布的標(biāo)準(zhǔn)。目前，我國(guó)已公布的標(biāo)準(zhǔn)中，僅有一個(gè)飼料中萬(wàn)古霉素測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)，即《農(nóng)業(yè)部1862號(hào)公告-3-2012飼料中萬(wàn)古霉素的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》。吉林省地方標(biāo)準(zhǔn)《DB22/T 1825-2013豬肉中萬(wàn)古霉素殘留量的測(cè)定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》處于未公布實(shí)施階段，暫無(wú)其他標(biāo)準(zhǔn)適應(yīng)本標(biāo)準(zhǔn)所涉及的檢驗(yàn)內(nèi)容。

為了給食品風(fēng)險(xiǎn)預(yù)警和食品安全監(jiān)管提供技術(shù)支撐，制定動(dòng)物性食品中萬(wàn)古霉素和去甲萬(wàn)古霉素殘留量測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)刻不容緩。

2 動(dòng)物性食品中萬(wàn)古霉素及去甲萬(wàn)古霉素測(cè)定方法的研究現(xiàn)狀

目前，測(cè)定萬(wàn)古霉素和去甲萬(wàn)古霉素的方法主要有高效液相色譜法和熒光偏振免疫法[3]、化學(xué)發(fā)光免疫法[4，5]等，這些方法的前處理往往適用于基質(zhì)簡(jiǎn)單的樣品，且檢出限高，不適用于低濃度的檢測(cè)，測(cè)定對(duì)象多為人體或動(dòng)物血液、腦脊液樣品[6，7]。豬、牛、羊、家禽和水產(chǎn)等動(dòng)物源性食品含有大量脂肪、蛋白質(zhì)、無(wú)機(jī)鹽、固醇類等，成分復(fù)雜，易被雜質(zhì)干擾，引起基質(zhì)效應(yīng)，降低回收率，而且動(dòng)物源性食品中萬(wàn)古霉素和去甲萬(wàn)古霉素殘留量小，運(yùn)用上述方法無(wú)法準(zhǔn)確進(jìn)行定量定性檢測(cè)。

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)兼有分離與定性、定量的優(yōu)勢(shì)，可完成對(duì)復(fù)雜樣本準(zhǔn)確、高效的定性定量分析，優(yōu)化了樣本的前處理過(guò)程，使樣本分析更準(zhǔn)確、方便、快捷，具有靈敏度高、應(yīng)用范圍廣、實(shí)用性強(qiáng)等優(yōu)勢(shì)，尤其適合分析基質(zhì)復(fù)雜的樣品。

已發(fā)表的文獻(xiàn)報(bào)道中利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定萬(wàn)古霉素和去甲萬(wàn)古霉素殘留量的測(cè)定對(duì)象多為牛奶[8]、蝦[9]等極性較強(qiáng)的樣品，便于分離、易于檢測(cè)，而同時(shí)適用于豬、牛、羊、家禽和水產(chǎn)等多種動(dòng)物性食品的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定萬(wàn)古霉素和去甲萬(wàn)古霉素殘留量的報(bào)道相對(duì)較少，現(xiàn)有報(bào)道的方法僅適用于豬肉或豬肝等一種動(dòng)物性食品[10，11]，或者只能測(cè)定萬(wàn)古霉素[12，13]，而且多數(shù)方法需要采用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行定量[14，15]，增加了檢測(cè)工作的復(fù)雜性，實(shí)用性不強(qiáng)。

杜業(yè)剛[16](2016)、韓婉清[17](2016)、綦艷[18](2016)等研究適用于多種動(dòng)物性食品中萬(wàn)古霉素和去甲萬(wàn)古霉素殘留量的測(cè)定，具有較高參考價(jià)值。杜業(yè)剛[16](2016)等研究中，萬(wàn)古霉素和去甲萬(wàn)古霉素的方法定量限均為20μg/kg；韓婉清[17](2016)等研究中，萬(wàn)古霉素和去甲萬(wàn)古霉素的方法定量限分別為15μg/kg、9μg/kg；綦艷[18](2016)等研究中，萬(wàn)古霉素和去甲萬(wàn)古霉素的方法定量限分別為2.0μg/kg、3.0μg/kg。方法檢出限普遍偏高，均不能達(dá)到該項(xiàng)目立項(xiàng)要求的技術(shù)指標(biāo)——方法定量限在1ppb(即1.0μg/kg)以下或盡可能低。王洪朋[19](2019)等報(bào)道的方法在檢測(cè)豬肉、豬肝、豬腎樣品時(shí)萬(wàn)古霉素和去甲萬(wàn)古霉素的方法定量限均可低至0.3μg/kg，值得推廣到牛、羊、家禽和水產(chǎn)等動(dòng)物性食品中加以研究、得以應(yīng)用。

3 動(dòng)物性食品中萬(wàn)古霉素及去甲萬(wàn)古霉素測(cè)定方法的發(fā)展方向

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法根據(jù)液相色譜的配置不同，又分為液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法與超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法與另外兩種檢測(cè)方法相比，具有檢測(cè)效率高、進(jìn)樣體積小、流動(dòng)相消耗少等顯著優(yōu)勢(shì)。為保障動(dòng)物性食品安全、公共衛(wèi)生、生態(tài)平衡以及動(dòng)物性食品安全出口，制定超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定動(dòng)物性食品中萬(wàn)古霉素殘留量的標(biāo)準(zhǔn)并將方法定量限降低到1ppb(即1.0μg/kg)以下或盡可能低勢(shì)在必行。